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白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎疗效和血清炎性因子、免疫因子的影响

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浙江农业学报 2021年第7期33卷 1184-1191页

作者：沈留红钱柏霖尤留超张钺莘余吕尚揆肖劲邦余树民苏柘僮董可杨世林冯育林曹随忠四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室/奶牛疾病研究中心四川成都611130 广西英路维特药物有限公司广西荔浦541000 四川育强本草生物技术有限公司四川成都611130 江西中医药大学中药固体制剂制造技术国家工程研究中心江西南昌330006

为观察不同剂量白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎的疗效,及对血清炎性因子和免疫因子的影响,将36头患临床型乳房炎的奶牛随机分为低、中、高剂量3个试验组,同时选择12头健康奶牛作为对照组。试验组每日分别于颈部肌肉注射白头翁皂苷B40.... 详细信息

为观察不同剂量白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎的疗效,及对血清炎性因子和免疫因子的影响,将36头患临床型乳房炎的奶牛随机分为低、中、高剂量3个试验组,同时选择12头健康奶牛作为对照组。试验组每日分别于颈部肌肉注射白头翁皂苷B40.025、0.05、0.1 mL·kg^(-1),连续注射6 d,对照组不注射任何药物。试验期间,观察试验组各奶牛的有效率和治愈率,同时采集对照组任意一天,及试验组1、3、5、7 d静脉血进行炎性因子和免疫因子检测,分别采集试验组1、7、12 d患病乳区奶样进行乳汁体细胞数(SCC)计数和病原微生物检测,整个试验观察至12 d,统计临床疗效。临床疗效试验结果表明,白头翁皂苷B4低、中、高3个剂量组的临床治愈率和总有效率分别为75.00%、75.00%、91.67%和100%、100%、100%,平均治愈时间分别为6.33、6.11、6.91 d。白头翁皂苷B4可显著(P临床型奶牛乳房炎SCC。治疗前,36份奶样有34份检测出病原微生物,检出率为94.44%,主要为支原体、球菌和大肠埃希菌等;治疗12 d后,病原微生物总转阴率为52.94%,其中,杆菌、产色葡萄球菌、溶血葡萄球菌和大肠埃希菌的转阴率均达100%,支原体、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和球菌的转阴率分别为69.23%、60.00%、50.00%和33.33%。白头翁皂苷B4可显著(P临床型奶牛乳房炎血清炎性因子CRP、SAA、HP、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α和免疫因子IgA、IgD、IgE、IgG、IgM恢复到健康水平。

关键词：白头翁皂苷B4 临床型奶牛乳房炎疗效炎性因子免疫因子

基于DIA蛋白质组学探究TLR2参与调控临床型奶牛乳房炎发生和发展的生物学途径

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基于DIA蛋白质组学探究TLR2参与调控临床型奶牛乳房炎发生和发展...

作者：白旭甘肃农业大学

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奶牛乳房炎是奶牛养殖业中常见的一种疾病,其发病率高且难以防治,导致奶牛产奶量下降、乳品质降低,对动物健康和乳品行业造成巨大影响。临床型乳房炎(CM)主要是由病原微生物入侵奶牛乳腺组织而引发的局部炎症反应。病原菌入侵乳腺后,免... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛养殖业中常见的一种疾病,其发病率高且难以防治,导致奶牛产奶量下降、乳品质降低,对动物健康和乳品行业造成巨大影响。临床型乳房炎(CM)主要是由病原微生物入侵奶牛乳腺组织而引发的局部炎症反应。病原菌入侵乳腺后,免疫系统通过模式识别受体(PRRs)引起宿主免疫调节和抗菌反应。Toll样受体2(TLR2)作为一种重要的PRRs,可识别多种病原相关分子模式(PAMPs),启动信号传导通路并释放炎症细胞因子,在感染性疾病的细菌识别和宿主免疫应答中发挥重要作用。然而,TLR2在临床乳房炎奶牛乳腺中的作用及下游调控机制尚不完全清楚。本研究旨在根据非依赖采集(DIA)蛋白质组学数据,全面筛选与细菌反应相关的生物学过程(BPs)及差异表达蛋白(DEPs),分析其潜在功能和生物学机制,并通过各种分子生物学方法探究其在临床型奶牛乳房炎发生和发展中的作用。主要研究内容及结果如下:1.根据DIA蛋白质组学数据,对相关BPs及DEPs进行生物信息学分析:基于GO数据库,共鉴定出13个BPs和45个DEPs参与调控细菌反应,其中TLR2是关键靶标分子。基于KEGG数据库共筛选出10条通路和134个DEPs与TLR2互作。进一步分析其机制发现,TLR2可能通过不同信号通路与不同靶点相互作用,从而介导乳腺内免疫应答、细胞凋亡和血管生成来调控临床型奶牛乳房炎的发生和发展。***2与免疫应答相关性研究:TLR2定位于乳腺上皮细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞,且与正常组相比,CM组表达量显著上调(P炎症反应。***2与细胞凋亡相关性研究:CM组乳腺腺泡及血管中出现大量细胞凋亡,且TLR2和半胱氨酸蛋白酶-8(CASP8)共定位于乳腺上皮细胞、血管内皮细胞和先天免疫细胞,表达水平与细胞凋亡程度呈正相关,提示TLR2可能通过上调CASP8表达促进乳腺中细胞凋亡,从而参与临床型乳房炎的发生和发展。***2与血管生成相关性研究:乳腺血管形态学观察发现,CM组血管存在明显病理学特征,如管壁疏松、细胞崩解脱落及渗出物增多等,表明乳腺中血管生成和炎症反应密切相关。TLR2在乳腺小动脉、小静脉及毛细血管的血管内皮细胞中均具有强阳性表达,提示TLR2可能参与调控血管生成过程。此外,共定位结果显示TLR2和TEK酪氨酸激酶受体2(Tie2)在血管内皮细胞中共定位,且表达水平与血管生成呈负相关,提示TLR2可能通过下调Tie2的表达抑制血管生成,导致血乳屏障被破坏,进而参与调控奶牛乳房炎。综上所述,在临床型乳房炎奶牛乳腺中,TLR2通过免疫应答、细胞凋亡和血管生成途径参与调控临床型奶牛乳房炎的发生和发展。该研究结果将为进一步阐明乳房炎发病机制提供理论基础,同时也为靶向药物或疫苗研发提供参考。

关键词：临床型奶牛乳房炎 DIA蛋白质组学 Toll样受体2 生物学途径

复方阿莫西林乳房注入剂对临床型奶牛乳房炎的临床疗效及其弃奶期验证

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复方阿莫西林乳房注入剂对临床型奶牛乳房炎的临床疗效及其弃奶期...

作者：隋国燕锦州医科大学

学位级别：硕士

目的通过病原菌的分离鉴定和药敏试验,明确引起临床型奶牛乳房炎的主要病原菌及其对抗生素的耐药情况。通过临床扩大试验评价某药厂生产的复方阿莫西林乳房注入剂对泌乳期临床型奶牛乳房炎的治疗效果。并检测牛奶中阿莫西林、舒巴坦、... 详细信息

目的通过病原菌的分离鉴定和药敏试验,明确引起临床型奶牛乳房炎的主要病原菌及其对抗生素的耐药情况。通过临床扩大试验评价某药厂生产的复方阿莫西林乳房注入剂对泌乳期临床型奶牛乳房炎的治疗效果。并检测牛奶中阿莫西林、舒巴坦、泼尼松龙的残留量,确认复方阿莫西林乳房注入剂的弃奶期。方法1、在甘肃某牛场选择70头自然发生临床型奶牛乳房炎的奶牛,在给药前单乳区采集奶样70份,通过细菌的分离纯化培养,革兰氏染色镜检及16S r DNA方法鉴定其种类,将鉴定出病原菌通过K-B纸片药敏试验进行8种抗生素（红霉素、阿莫西林、环丙沙星、青霉素、庆大霉素、头孢噻肟、氟苯尼考、四环素）的耐药性进行分析。2、在甘肃某牛场选择70头自然发生临床型奶牛乳房炎的奶牛,将患病奶牛随机分为试验组（n=36头）和对照组（n=34头）。在给药前、停药后7 d及停药后14 d,进行单乳区奶样采集,每个感染乳区注入3 g药物,每12 h注射1次,连续用药3次。将采集的各组奶样进行细菌学检测及乳汁体细胞计数。通过临床观察、细菌清除率及体细胞计数对临床疗效进行评价。3、选择25头健康奶牛,乳房内注入复方阿莫西林乳房注入剂,每个乳区注入3 g药物,每12 h用药1次,连用3次。给药后60 h,采集4个乳区的混合奶样,采用现行国家标准进行相关活性成分残留量的检测。样品经过提取,固相萃取柱净化,采用色谱柱进行分离,以多反应离子监测方式,在正离子或者负离子模式下,进行LC-MS/MS检测,外标法定量,对阿莫西林、舒巴坦和泼尼松龙的残留量分别进行检测。结果1、70份患有临床型奶牛乳房炎的奶样经过细菌学鉴定后,在58份奶样中分离出65株病原菌,其中17株为大肠杆菌,21株为葡萄球菌,26株为链球菌,1株巨型球菌;对引起临床型奶牛乳房炎的主要病原菌（大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌）进行药敏试验,结果显示:大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌对环丙沙星、氟苯尼考和四环素敏感程度大于70%;对青霉素、红霉素、头孢喹肟和庆大霉素产生耐药性;对阿莫西林中度敏感。2、通过临床扩大试验的结果显示,用药前采集的70份奶样中有58份奶样检出细菌,细菌总检出率为82.86%,试验组的细菌检出率为86.11%（31/36）,对照组为79.41%（27/34）。停药后14 d,两组的混合感染清除率均为100%;试验组和对照组的单一感染清除率为92.86%和90.91%。试验组和对照组的细菌总清除率分别为94.12%和93.55%,临床治愈率分别为58.3%和61.8%。两组奶样中的SCC在治疗后均显著下降（P＜0.01）。两组临床疗效无显著性差异（P＞0.05）。3、本试验优化和验证了牛奶中阿莫西林、舒巴坦、泼尼松龙残留量的LC-MS/MS检测条件,结果表明其质控样品的准确度在规定范围内,符合方法学要求,可用于牛奶中阿莫西林、舒巴坦、泼尼松龙的残留检测。药物残留检测结果显示,依照本研究的给药方案对健康奶牛给予复方阿莫西林乳房注入剂,最后一次给药后60 h,生鲜牛奶中阿莫西林、舒巴坦和泼尼松龙的残留量,均低于现行标准中对各成分的MRLs要求。结论本研究中引起临床型奶牛乳房炎的主要病原菌为葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌;受试药物对临床型奶牛乳房炎的治疗效果与对照药物一致,具有较好的治疗效果。本研究优化后的LC-MS/MS检测方法符合方法学要求,可用于牛奶中阿莫西林、舒巴坦、泼尼松龙的残留检测。给药后60 h,生鲜牛奶中阿莫西林、舒巴坦、泼尼松龙的残留量均低于各自的MRLs。确认复方阿莫西林乳房注入剂的弃奶期为60h。

关键词：临床型奶牛乳房炎复方阿莫西林乳房注入剂药敏试验细菌转阴率临床疗效残留检测

中药对临床型奶牛乳房炎源大肠杆菌的体外抑制及耐药消除研究

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中药对临床型奶牛乳房炎源大肠杆菌的体外抑制及耐药消除研究

作者：赵秋云西北农林科技大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎是奶牛乳腺组织受到内、外界环境中的刺激因素如物理、化学、微生物等因素刺激所产生的一种炎性反应,是奶牛生产中的常见病和多发病,而多种病原微生物混合感染是引起奶牛乳房炎发病的主要原因,严重制约了当前奶牛业的发展。... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛乳腺组织受到内、外界环境中的刺激因素如物理、化学、微生物等因素刺激所产生的一种炎性反应,是奶牛生产中的常见病和多发病,而多种病原微生物混合感染是引起奶牛乳房炎发病的主要原因,严重制约了当前奶牛业的发展。奶牛场乳房炎的防控与治疗目前主要依赖抗菌药物,但由于长期和广泛使用抗菌药物,使得细菌耐药性增强现象普遍发生,导致乳汁中抗菌药物残留超标、环境污染严重及乳制品安全受到威胁等问题日益突出,引起了全社会的广泛关注。我国传统中草药具有天然性、多功能性、基本无耐药性、不易在畜禽及其产品中残留、毒副作用小和不污染环境等优点,在奶牛乳房炎防治中的应用越来越受到重视。其中,中草药黄连、黄芩及其复方制剂具有清热解毒、抑菌、抗病毒等作用,在临床上的研究和应用已成为热点。本研究收集陕西省部分地区奶牛场患临床型乳房炎奶牛乳样共95份,采用革兰氏染色镜检、生理生化试验、分子生物学特性检测等方法对其进行大肠杆菌的分离和鉴定;采用二倍稀释法对分离得到的大肠杆菌进行四组中药(黄连、黄芩、黄连黄芩(1:1)水煎剂及双黄连冻干粉针剂)体外抑菌试验;采用扫描电镜及酶标板法检测抑菌效果较好的黄芩和双黄连对细菌胞壁及细菌外观微形态的影响;进一步检测了所分离大肠杆菌对常用14种抗菌药物的耐药情况以及四组中药对大肠杆菌耐药性的消除作用,通过RT-PCR方法对比了四组中药对大肠杆菌所含耐药基因的影响,结果如下:本研究共分离得到大肠杆菌15株。四组中药对所分离15株大肠杆菌均有一定程度的体外抑制作用,药物体外MIC50测定结果显示,双黄连在所选中药中抑菌作用最强,其MIC50为3.90 mg/mL;其次是黄芩,其MIC50为7.81 mg/mL;然后是黄连和黄芩与黄连的组合,其MIC50为15.625 mg/mL。发射场电子扫描显微镜观察大肠杆菌胞体表面微观形态显示随着中药作用时间的延长,大肠杆菌胞体表面完整性破坏越发严重,说明中药黄芩和双黄连均对大肠杆菌有破坏作用;中药培养的大肠杆菌上清液中AKP随着中药作用时间的增加含量为上升趋势,表明中药黄芩和双黄连可增加大肠杆菌细胞壁的通透性,提示黄芩和双黄连主要通过对大肠杆菌细胞壁的破坏及菌体的分解破坏发挥抑制作用。15株大肠杆菌分离株对现阶段临床上普遍使用的大部分抗菌药物均表现出不同程度的耐药,其中对林可霉素、红霉素、青霉素的耐药率高达100%,而对头孢西丁、头孢噻肟的耐药率为0%。经中药培养后各组菌株敏感性普遍增强,其中以黄芩的作用最为显著;对单种抗菌药物(如万古霉素)耐药率降低最多的是黄芩(53%),其次是双黄连(40%)。15株大肠杆菌检测出β-内酰胺酶(Extended spectrumβ-lactamase,ESBL)基因型两种blaTEM和blaSHV,检出率分别为40%和13.3%;检测出质粒介导的喹诺酮耐药(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因型三种qnrB,qnrD和qnrS检出率均为13.3%。经中药作用后,耐药基因均呈现不同的减弱或消除,以黄芩对5种耐药基因的消除效果最好,黄芩黄连(1:1)次之。以上试验结果表明,黄连、黄芩、双黄连对临床型奶牛乳房炎乳源大肠杆菌具有一定的体外抑菌作用,黄芩、双黄连主要通过破坏大肠杆菌细胞壁完整性及分解破坏菌体发挥抑菌作用。药敏试验和分子生物学检测表明,中药黄连、黄芩、双黄连对大肠杆菌的耐药性和耐药基因均有不同程度的减弱或消除作用。

关键词：临床型奶牛乳房炎大肠杆菌中药耐药性耐药基因

规模化养殖场临床型奶牛乳房炎发病影响因素调查及病原分离鉴定

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规模化养殖场临床型奶牛乳房炎发病影响因素调查及病原分离鉴定

作者：张琛茜西北农林科技大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎是目前规模化养殖场的主要疾病之一,给养殖场造成严重的经济损失。奶牛乳房炎发病原因复杂,与养殖场管理的各个环节息息相关。为了深入解析规模化养殖场奶牛临床型乳房炎发病的影响因素、主要病原及其耐药性,为规模养殖场乳... 详细信息

奶牛乳房炎是目前规模化养殖场的主要疾病之一,给养殖场造成严重的经济损失。奶牛乳房炎发病原因复杂,与养殖场管理的各个环节息息相关。为了深入解析规模化养殖场奶牛临床型乳房炎发病的影响因素、主要病原及其耐药性,为规模养殖场乳房炎的的防治提供试验依据本研究收集了宁夏灵武市某规模化奶牛养殖场近一年的1164头临床型乳房炎牛胎次、月份、季节、发病乳区、发病次数相关信息,对其相关性进行分析。对该养殖场采集的118份临床型乳房炎乳样的病原菌和46份奶厅与牛舍环境样本进行细菌分离鉴定,分析养殖场临床型乳房炎的发病规律及主要影响因素,并对分离的160株菌进行养殖场常用抗生素的敏感性检测分析。进一步对养殖场奶厅管理细节进行评估,探究挤奶设备的脱杯低流速限值对临床型乳房炎牛治疗效果的影响。取得以下结果:1.2021年全年平均临床型乳房炎发病率为3.42%,其中1月至3月发病率较高,3月发病率最高(10.15%),5月发病率最低(0.68%);该地区全年月平均气温范围在-7℃至27℃时,温度与临床型乳房炎发病率呈负相关(P=0.05)。头胎牛的患病率较低(1.96%),随胎次增加,发病率呈逐渐上升的趋势,6胎次发病率最高(15.55%)。泌乳初期奶牛发病率最低(0.82%),随着泌乳天数增加,发病率升高,泌乳后期奶牛患病率最高(5.52%)。前、后乳区的发病牛数差异显著(P=0.023)。临床型乳房炎患牛中,平均单产低于15 kg的牛数占比最低(1.14%),平均单产量高于35kg的牛数占比最高(58.43%)。.2.对乳区和后肢蹄卫生评分显示,全群泌乳奶牛乳区洁净度1-2分牛数占比为66.52%,后肢蹄洁净度1-2分的牛数占比为28.81%。60头临床型乳房炎牛乳区洁净度1-2分的牛数占比为34.34%,后肢蹄洁净度1-2分的牛数占比为8.33%。全群泌乳牛乳头末端皮肤角质化评分结果显示,11个月的3-4分牛数占比均低于20%,其中2021年10月为全年最低(13.9%),2022年7月为全年最高(20.64%)。对奶厅员工挤奶操作规范性评估结果显示,各员工挤奶操作基本在合理范围内,但药浴液覆盖乳头面积不足100%;前、后乳区擦拭评分3-4分占比较高,分别为83.65%、71.67%。治疗时间3-5天的试验组(脱杯限值0.4kg/min)治愈牛数占比均高于对照组(脱杯限值0.2kg/min),在发病第7天、第14天的体细胞数低于100万/m L的试验组牛数占比比对照组高26.67%、16.66%。3.从118份临床型乳房炎乳样中分离鉴定出7个属17种164株病原菌,分离率为99.15%,其中主要为链球菌属(46.34%)、葡萄球菌属(34.76%)、埃希氏杆菌属(11.59%)、克雷伯氏菌属(5.49%)。从46份奶厅和牛舍环境样本中,分离鉴定出14个属53种127株病原菌,其中占比较高的细菌主要为:芽孢杆菌属(37.82%)、链球菌属(13.38%)、埃希氏杆菌属(10.24%)、肠球菌属(8.67%)、变形杆菌属(6.3%)、葡萄球菌属(3.93%)、乳球菌属(4.20%)。4.选取7类9种抗生素,对临床病例乳样中分离出的致病菌进行药敏试验检测。结果表明,76株链球菌菌株对氧氟沙星(92.11%)敏感性最高,而对四环素耐药性最高,耐药率为48.68%,其次对氨苄西林(46.05%)、林可霉素(39.47%)耐药性较高。57株葡萄球菌属菌株对氨苄西林耐药性最高,耐药率为24.56%,对头孢噻肟、林可霉素耐药性次之,耐药率依次为22.80%、19.30%,而对氧氟沙星敏感性最高,敏感率为92.98%,其次对万古霉素、庆大霉素敏感性较高,敏感率为91.22%、85.96%。28株肠杆菌菌株对氧氟沙星敏感性最高(100%),其次对庆大霉素较高,敏感率为75%,而对阿莫西林耐药性最高,耐药率为64.29%,对头孢噻肟次之,耐药率为53.57%。综上所述,该奶牛养殖场临床型奶牛乳房炎发病与月份、温度、胎次、泌乳阶段、产奶量、乳区存在显著相关性。主要致病菌为链球菌属、葡萄球菌属、埃希氏杆菌属和克雷伯氏菌属,与奶厅环境细菌的种类密切相关;通过对奶厅管理评估、优化临床型患病牛的挤奶参数以及进行常用抗生素的药敏试验等,为养殖场临床型奶牛乳房炎的防治措施提供试验依据。

关键词：临床型奶牛乳房炎流行病学调查细菌分离鉴定药敏试验奶厅管理

探索复方阿莫西林乳房注入剂治疗临床型奶牛乳房炎的疗效

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农业开发与装备 2017年第3期 95-95页

作者：侯晓申天津市静海区畜牧水产业发展服务中心天津市301600

目的:对临床型奶牛乳房炎应用复方阿莫西林乳房注入剂治疗的临床效果进行分析。方法:择取2014年1月至2016年8月接收的某牛场50头患临床型乳房炎奶牛作为研究对象,按数字奇偶法分为2组,每组25例,对照组给予速诺LC灌注治疗,研究组给予复... 详细信息

目的:对临床型奶牛乳房炎应用复方阿莫西林乳房注入剂治疗的临床效果进行分析。方法:择取2014年1月至2016年8月接收的某牛场50头患临床型乳房炎奶牛作为研究对象,按数字奇偶法分为2组,每组25例,对照组给予速诺LC灌注治疗,研究组给予复方阿莫西林乳房注入剂灌注治疗,观察对比两组奶牛治疗后的临床治疗效果。结果:观察组奶牛临床疗效为92.00%,对照组奶牛临床疗效的88.00%,观察组临床疗效优于对照组,但两者数据对比,无明显差异(p>0.05)。结论:对患有临床型奶牛乳房炎的患者应用复发阿莫西林乳房注入剂治疗,临床疗效显著,值得应用与进一步的推广。

关键词：临床型奶牛乳房炎复方阿莫西林乳房注入剂临床疗效

临床型乳房炎奶牛乳清蛋白质双向电泳图谱的建立及质谱分析

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临床型乳房炎奶牛乳清蛋白质双向电泳图谱的建立及质谱分析

作者：何渊甘肃农业大学

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本研究应用双向凝胶电泳(2-DE)技术,对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳清蛋白质进行分离,用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色两种方法进行了染色,获得两种乳清蛋白质2-DE图谱,同时通过PDQuest 7.4软件对蛋白质电泳图谱进行斑点检测和匹配,并... 详细信息

本研究应用双向凝胶电泳(2-DE)技术,对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳清蛋白质进行分离,用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色两种方法进行了染色,获得两种乳清蛋白质2-DE图谱,同时通过PDQuest 7.4软件对蛋白质电泳图谱进行斑点检测和匹配,并结合人工校正分析,应用质谱分析技术,对差异代表进行鉴定,得到如下结果。1、在等电点为3-10的区域内,检测到乳房炎奶牛乳清蛋白质硝酸银染色图谱111±6个蛋白质点,健康奶牛蛋白质样142±4个蛋白质点;考马斯亮蓝染色图谱检测到乳房炎奶牛蛋白质样80±4个蛋白质点,健康奶牛蛋白质样82±3个蛋白质点。且硝酸银染色和考马斯亮蓝染色两种方案所获得的图谱都具有良好的重复性和分辨率。2、对乳房炎奶牛与健康奶牛乳清蛋白质图谱匹配比较后发现:乳清蛋白质硝酸银染色图谱中有31个蛋白质点的表达存在明显差异(蛋白质差异表达量在3倍以上),其中乳房炎乳清中蛋白表达发生明显上调的蛋白点7个,明显下调的蛋白点有24个;考马斯亮蓝染色图谱中有13个蛋白质点的表达存在明显差异(蛋白质差异表达量在3倍以上),其中乳房炎乳清中蛋白表达明显上调的蛋白点6个,明显下调的蛋白点有7个。且硝酸银染色图谱匹配率为91.41%,考马斯亮蓝染色图谱匹配率为94.32%。3、应用质谱技术(MS)对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛乳清差异蛋白质进行MS鉴定,得出以下4种蛋白质:casocidin-I(casein-alpha s2 derived antibacterial peptide);α-乳白蛋白(Chain F, Crystal Structure Of Bovine Alpha-Lactalbumin);β-乳球蛋白(Chain B, Bovine Beta-Lactoglobulin, Lattice );乳铁蛋白(Structure Of Diferric Bovine Lactoferrin At 2.8 Angstroms Resolution)。

关键词：临床型奶牛乳房炎乳清蛋白质双向电泳质谱

吴忠地区奶牛乳房炎流行病学调查及干奶期乳头封闭剂应用研究

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吴忠地区奶牛乳房炎流行病学调查及干奶期乳头封闭剂应用研究

作者：钱军宁夏大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎主要是由多种非特定病原微生物感染乳房引起的一种疾病。其主要造成奶牛乳腺组织损失,改变乳汁品质,降低产奶量,治疗费用增加,对奶业生产造成重大的经济损失。在实际生产中抗生素的大量使用及耐药菌株出现等问题,对该病的防... 详细信息

奶牛乳房炎主要是由多种非特定病原微生物感染乳房引起的一种疾病。其主要造成奶牛乳腺组织损失,改变乳汁品质,降低产奶量,治疗费用增加,对奶业生产造成重大的经济损失。在实际生产中抗生素的大量使用及耐药菌株出现等问题,对该病的防控带来了挑战。因此,如何更好的预防奶牛乳房炎就显得格外重要。本研究调查了吴忠地区4个不同规模化牧场临床型奶牛乳房炎的发病情况、通过PCR鉴定调查临床型奶牛乳房炎主要病原菌的流行情况。同时在干奶期,将乳头封闭剂和抗生素联合使用,探讨其预防产后奶牛乳房炎的效果。首先,本研究通过调查吴忠地区4个不同规模化牧场,奶牛的临床型乳房炎发病情况,并分析该地区临床型奶牛乳房炎主要发病原因和发病规律。结果显示:吴忠地区临床型奶牛乳房炎的平均发病率为1.87%。在12月、1月和2月乳房炎发病率较高,1月份发病率最高,5月发病率最低。冬季发病率最高,为2.55%,春季发病率最低,为1.42%,说明奶牛乳房炎的发病与月份和季节有关。不同胎次奶牛乳房炎的发病随胎次先升高后降低,其中5胎次乳房炎发病的占比最高,为21.79%。左后和右后乳区发病率高于前方乳区的发病率,主要是后方乳区接触污染物的机会多,感染几率高。患病牛中在泌乳期90-150天时发病的占比最高,为22.95%。其次,本研究调查了吴忠地区临床型奶牛乳房炎乳样中的主要病原菌。从该地区4个牧场中共采集96份乳样,通过PCR对病原菌进行分离鉴定。结果显示:此次共分离出20个属,42种,147株病原菌,葡萄球菌属、埃希氏菌属、链球菌属、肠球菌属、乌拉尔菌属、假单胞菌属、克雷伯氏菌属等属的细菌分离率较高。其中主要病原菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的检出率最高,分离率分别为13.61%、11.56%、8.84%,表明金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌是吴忠地区最常见的病原菌。最后,为进一步研究干奶期使用乳头封闭剂预防产后乳房炎的效果,本研究通过检测干奶前和产后30天奶牛乳汁中的体细胞数,判断乳头封闭剂预防产后乳房炎的效果,以便为牧场预防乳房炎提供参考。结果显示:在干奶期,乳头封闭剂结合抗生素和单独使用抗生素相比较,使用乳头封闭剂能降低产后不同乳区的体细胞数,使用乳头内封闭剂和抗生素干奶疗法干奶后30天牛群的体细胞数降低了 71.76%,而只使用干奶疗法的牛群体细胞数则增加了 16.93%。试验表明,干奶期使用乳头封闭剂能降低产后奶牛的体细胞数,预防奶牛乳房炎的发生。综上所述,吴忠地区临床型奶牛乳房炎的流行与月份、季节、胎次、乳区和泌乳阶段存在密切的联系。引起吴忠地区临床型奶牛乳房炎病原微生物主要以金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌等为主。通过在干奶期使用乳头奶封闭剂结合抗生素干奶疗法,能显著降低产后30天乳汁中的体细胞数,预防乳房炎的发生。

关键词：临床型奶牛乳房炎流行病学调查病原微生物乳头封闭剂体细胞

奶牛乳房炎源性Helcococcus ovis分离鉴定及其致病性研究

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奶牛乳房炎源性Helcococcus ovis分离鉴定及其致病性研究

作者：刘凯云南农业大学

学位级别：硕士

奶牛乳房炎是导致畜牧业重大经济损失的一种疾病,其主要病因是细菌感染导致的炎症,其中典型致病菌有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌等,随着细菌分离或鉴别技术的进步,越来越多的新型病原菌被报道,如巴黎链球菌、牛支原体、凝固... 详细信息

奶牛乳房炎是导致畜牧业重大经济损失的一种疾病,其主要病因是细菌感染导致的炎症,其中典型致病菌有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌等,随着细菌分离或鉴别技术的进步,越来越多的新型病原菌被报道,如巴黎链球菌、牛支原体、凝固酶阴性葡萄球菌等,但也受制于诸多细菌的生理特征或其难以体外培养,仍有许多潜在的奶牛乳房炎病原菌尚待研究。羊创伤球菌在1999年首次在西班牙和英国山羊病例中被报道,此后研究发现诸多动物或人类感染性疾病均与该菌有关,如流产奶牛、奶牛产后子宫内膜炎、奶牛瓣膜性心内膜炎、马匹肺脓肿、羊胸膜肺炎及支气管肺炎以及人义眼化脓性感染,这不禁让人对该菌可能危及公共卫生安全担忧。本次我们从34份临床型奶牛乳房炎病料中分离到四株与化脓隐秘杆菌混合感染的羊创伤球菌,针对该四株菌的生理生化特征,我们对其进行了基于16S r RNA基因的系统进化分析,生化实验,测定生长曲线,药敏试验;在此基础上选定一株进一步构建小鼠乳房炎模型,分别构建羊创伤球菌单独感染及与化脓隐秘杆菌混合感染模型,对羊创伤球菌性乳房炎小鼠进行临床病理观察,制作小鼠乳腺病理组织切片与免疫组织化学检测,测定小鼠乳腺组织载菌量,检测小鼠血清炎性因子。最终,结果表明本次分离到的羊创伤球菌与先前报道的中国山羊病例及日本家猪病例分离株亲缘关系较近,其生长滞后期相对参考菌株长但平台期菌量多,未表现出明显耐药性,其生化反应与先前报道结果较一致;单独感染羊创伤球菌未导致小鼠产生典型的乳房炎症,但当其与化脓隐秘杆菌混合感染则加重小鼠乳房炎症。综合以上结果,羊创伤球菌在导致奶牛乳房炎的过程中并非起主导作用,但结合小鼠乳房炎模型,我们推测其在化脓隐秘杆菌致病过程中起到协同作用。

关键词：临床型奶牛乳房炎羊创伤球菌药敏试验系统进化分析致病性