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理化因子对谷皮菱形藻细胞密度及中性脂含量的影响

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生态学报 2015年第10期35卷 3349-3356页

作者：班剑娇冯佳王志强谢树莲山西大学生命科学学院太原030006

以高脂微藻谷皮菱形藻(Nitzschia palea NY025)为实验材料,探讨了利用光密度法和尼罗红荧光染色法测定细胞生长和细胞中性脂含量的可行性,进而研究了温度、光强及培养基中N、P、Si含量对藻细胞生长和中性脂积累的影响。结果表明:(1)谷... 详细信息

以高脂微藻谷皮菱形藻(Nitzschia palea NY025)为实验材料,探讨了利用光密度法和尼罗红荧光染色法测定细胞生长和细胞中性脂含量的可行性,进而研究了温度、光强及培养基中N、P、Si含量对藻细胞生长和中性脂积累的影响。结果表明:(1)谷皮菱形藻在675nm处存在最大吸收峰,细胞密度与OD675之间存在良好的线性关系,利用光密度法和尼罗红荧光染色法表征谷皮菱形藻生物量和中性脂含量操作简单,适用于高通量样品的测定;(2)谷皮菱形藻在20℃,光强160μmol m-2s-1时生长最快,在20℃,光强200μmol m-2s-1时,有利于中性脂积累;(3)培养基中N、P、Si浓度分别为80、120、100 mg/L时,有利于谷皮菱形藻细胞生长,其中,N元素影响最大,其次是P、Si,且N、P、Si三因子以及交互作用N×P与P×Si对藻株生长作用均为显著。培养基中N、P、Si浓度分别为80、120、50 mg/L时,利于中性脂积累,其中,N元素影响最大,其次是Si、P,且因子N、Si及交互作用N×P、N×Si作用均为显著;(4)可采用两步培养法,先使谷皮菱形藻细胞大量增殖,而后适当改变培养条件,以增加脂质合成。

关键词：谷皮菱形藻理化因子细胞密度中性脂

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HPLC-ELSD快速测定微藻中性脂

中国生物工程杂志 2015年第11期35卷 61-69页

作者：孟迎迎王海涛曹旭鹏薛松杨青王伟良中国科学院大连化学物理研究所海洋生物工程组大连116023 大连理工大学环境与生命科学学院大连116622 中国科学院大学北京100084 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

溶剂法提取微藻油脂不同于植物种子油脂,它是全细胞的提取物,成分非常复杂,存在与甘油三酯(TAG)在色谱保留性质上相近的低极性物质,干扰TAG的测定。建立了基于二醇基柱及蒸发光检测器、正己烷-异丙醇为流动相的快速测定微藻中性脂的方... 详细信息

溶剂法提取微藻油脂不同于植物种子油脂,它是全细胞的提取物,成分非常复杂,存在与甘油三酯(TAG)在色谱保留性质上相近的低极性物质,干扰TAG的测定。建立了基于二醇基柱及蒸发光检测器、正己烷-异丙醇为流动相的快速测定微藻中性脂的方法。对该方法进行评价,结果显示,测定的TAG、游离脂肪酸(FFA)、甘油二酯(DAG)、甘油一酯(MAG)线性相关系数均大于0.99,方法重复性好。湛江等鞭金藻及微拟球藻样品中TAG加标回收率为96.2%~113.1%,相对标准偏差(RSD)为0.46%~4.8%。将本方法测定湛江等鞭金藻及微拟球藻中TAG的含量并与传统的固相萃取(SPE)及常用的TLC/GC测定TAG的方法进行比较,相比上述两种方法,该方法前处理简单、灵敏度高,可快速准确测定微藻中TAG的含量。

关键词：中性脂 TAG定量湛江等鞭金藻微拟球藻 TLC/GC

10种海洋微藻总脂、中性脂和极性脂的脂肪酸组成

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水生生物学报 1999年第5期23卷 481-488页

作者：俞建江李荷芳周汉秋中国科学院海洋研究所青岛266071

研究了10种海洋微藻的总脂、中性脂和极性脂的脂肪酸组成特征。海洋微藻的脂肪含量均在15％以上。极性脂一般为海洋微藻的主要脂类,是长链多元不饱和脂肪酸的主要提供者。中性脂含短链脂肪酸较多,为主要的储存脂类。绿藻纲可以将高含量... 详细信息

研究了10种海洋微藻的总脂、中性脂和极性脂的脂肪酸组成特征。海洋微藻的脂肪含量均在15％以上。极性脂一般为海洋微藻的主要脂类,是长链多元不饱和脂肪酸的主要提供者。中性脂含短链脂肪酸较多,为主要的储存脂类。绿藻纲可以将高含量的16:4(n-3)和18:3(n-3)作为化学分类的标记脂肪酸,小球藻和微绿球藻有丰富的20:5(n-3),与绿藻纲显著不同,可能属于大眼藻纲。绿枝藻纲的脂肪酸组成与绿藻纲类似,绿胞藻纲以16:0、18:4(n-3)和20:5(n-3)为主要脂肪酸。脂肪酸组成可用于海洋微藻的分类学研究,并能指导利用海洋微藻生产高度不饱和脂肪酸。

关键词：海洋微藻脂肪酸组成中性脂极脂化学分类学

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酵母中性脂快速检测及积累动态分析

生物技术通报 2014年第8期30卷 208-214页

作者：杜秀秀房志家陈忠翔匡鑫黄志伟东华大学化学化工与生物工程学院上海201620

以油红O、苏丹黑B为染料,结合酸或碱热破壁萃取,建立了通过比色快速检测酵母中性脂含量的方法。其中油红O萃取效果较好,比色结果更加准确,苏丹黑B也可以作为一种替代的中性脂含量检测的染料。并用该方法初步研究了两种中性脂肪甘油三酯... 详细信息

以油红O、苏丹黑B为染料,结合酸或碱热破壁萃取,建立了通过比色快速检测酵母中性脂含量的方法。其中油红O萃取效果较好,比色结果更加准确,苏丹黑B也可以作为一种替代的中性脂含量检测的染料。并用该方法初步研究了两种中性脂肪甘油三酯代谢调控的关键基因磷脂酸磷酸酶(PAH1)和甘油三酯脂酶(triglyceride lipase,TGL)敲除突变体中性脂的变化。结果显示,前者甘油三酯显著降低,但总中性脂肪含量不变,后者甘油三酯及总中性脂肪含量均明显积累;同时,用该方法监测了酵母中性脂含量随生长周期的动态变化,表明指数生长期后有明显的积累。

关键词：出芽酵母中性脂亲脂染料脂肪代谢调控

五种微藻中性脂与脂肪酸组成及同位素组成研究

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五种微藻中性脂与脂肪酸组成及同位素组成研究

作者：郑宇中国海洋大学

学位级别：硕士

脂类化合物作为海洋生物标记物,被广泛应用于地球化学研究。从浮游植物合成到埋藏于沉积物中,脂类化合物的存在形态和含量等都受到很多因素影响。本研究通过对五种海洋微藻的实验室培养,测定了这几种藻在不同生长期的主要的脂类化合物组... 详细信息

脂类化合物作为海洋生物标记物,被广泛应用于地球化学研究。从浮游植物合成到埋藏于沉积物中,脂类化合物的存在形态和含量等都受到很多因素影响。本研究通过对五种海洋微藻的实验室培养,测定了这几种藻在不同生长期的主要的脂类化合物组成;比较了指数生长期和稳定期,细胞膜与细胞内脂类化合物组成的异同;分析不同时期的碳同位素组成,讨论不同生长期碳同位素的分布变化。主要结论如下: 1.五种微藻不同生长期的脂肪酸与中性脂组成五种微藻主要含有的脂肪酸是:14∶0、16∶3、16∶2、16∶1、16∶0、18∶ 3、18∶2、18∶1、18∶0、20∶5、22∶6。青岛大扁藻,盐藻,塔玛亚历山大藻指数生长期的脂肪酸含量都多于稳定期,其中16∶0,18∶0,22∶6变化范围最为显著,从几倍到几十倍;三角褐指藻和聚球藻的16∶0,16∶1,20∶5在稳定期的含量则是指数生长期的两倍左右。植醇主要存在于细胞膜物质中;聚球藻的烷烃只是作为能量储存物质存在。 2.细胞膜与细胞内脂类化合物组成的异同无论是指数生长期还是稳定期后期,胞内物质的脂肪酸含量明显要低于细胞膜组分,16∶0、18∶0脂肪酸是二者的主要组成脂类;14∶0在二者中也可以测出,但含量相对较低。指数生长期,细胞膜组分的脂肪酸种类要多于胞内物质;二者在指数生长期以饱和脂肪酸为主,不饱和脂肪酸种类及含量都相对较少。进入稳定期后期,五种微藻体内脂肪酸种类明显增多,藻体内可以发现很多不饱和脂肪酸。藻体细胞膜脂类的脂肪酸以16∶0及C18系为主,其中,以16∶0,18∶1含量较高。胞内物质的脂肪酸种类增多,不饱和脂肪酸浓度要高于饱和脂肪酸,但胞内物质的脂肪酸整体浓度分布仍要低于细胞膜脂类。 3.同位素组成变化青岛大扁藻、盐藻的胞内物质上,同种脂肪酸的δ13C值在指数生长期要高于稳定期后期;塔玛亚历山大藻、三角褐指藻和聚球藻中,同种脂肪酸的δ13C值在指数生长期要低于稳定期后期。从整体分布上看,该部分脂肪酸的δ13C值在稳定期相对较高。细胞膜上的多不饱和脂肪酸,20∶5、18∶2、16∶2等在指数生长期富集13C,δ13C值相对稳定期略高。盐藻和青岛大扁藻的主要饱和脂肪酸是在指数生长期富集13C;塔玛亚历山大藻、三角褐指藻和聚球藻的单不饱和及饱和脂肪酸在稳定期后期富集13C。中间产物在塔玛亚力山大藻、三角褐指藻及聚球藻的脂肪酸中主要是在稳定期后期富集13C。指数生长期的青岛大扁藻、盐藻,胞内物质的脂肪酸相对于磷脂来源的要富集13C;稳定期磷脂来源的饱和脂肪酸比能量物质的富集13C;不同来源脂肪酸的δ13C值相差0 1‰。稳定期的塔玛亚历山大藻在胞内物质中以C18、C20等长链脂肪酸中富集13C。指数生长期的三角褐指藻和聚球藻,细胞膜脂肪酸相对于胞内物质要富集13C,二者δ13C值相差0.5‰左右;稳定期后期,三角褐指藻膜上的18∶1,聚球藻的18∶0较胞内物质要亏损13C;同类物质在不同来源中的δ13C值相差0 4‰。

关键词：微藻脂肪酸中性脂同位素组成

中性脂在维持小鼠正常肺组织结构中作用的研究

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中性脂在维持小鼠正常肺组织结构中作用的研究

首届中国西部营养与健康、亚健康学术会议

作者：练雪梅李廷玉 Li Yang Cong Yan Hong Du 重庆医科大学营养与食品卫生学教研室重庆医科大学附属儿童医院美国辛辛那提儿童医院肺生物学研究室美国辛辛那提儿童医院肺生物学研究室美国辛辛那提儿童医院肺生物学研究室

目的探讨中性脂在维持肺的正常组织结构中所发挥的作用。方法以溶酶体酸性脂肪酶基因敲除小鼠(1al-/-)为模型,采用免疫组织化学的方法观察中性脂代谢被阻断的情况下,小鼠肺组织的病理变化;进而采用基因芯片技术筛选1al-/-小鼠与野生型... 详细信息

目的探讨中性脂在维持肺的正常组织结构中所发挥的作用。方法以溶酶体酸性脂肪酶基因敲除小鼠(1al-/-)为模型,采用免疫组织化学的方法观察中性脂代谢被阻断的情况下,小鼠肺组织的病理变化;进而采用基因芯片技术筛选1al-/-小鼠与野生型小鼠肺组织差异表达的基因,探讨中性脂代谢被阻断后 1al-/-小鼠肺病理变化可能的发生机制。结果 1．1al-/-小鼠存在明显的随年龄增长而逐渐加剧的慢性肺部炎症表现:肺泡Ⅱ型上皮细胞和巨噬细胞中性脂蓄积;肺泡区域中性粒细胞浸润;巨噬细胞增生,泡沫样改变;区域性肺气肿和区域性肺组织细胞增生、组织重建并存,以及气道 Clara 细胞反应性增生肥大。2．与组织病理改变相一致的是,基因芯片检测结果提示:与炎症反应密切相关的细胞因子/化学因子如:IL-1β,IL-6 和 TNF-α,以及与肿瘤迁移、组织重建相关的间质金属蛋白酶(MMP)如:MMP8,MMP9和 MMP12;的表达都异常升高。结论中性脂在维持肺稳态性、机体防御和损伤修复中发挥重要的作用。

关键词：溶酶体酸性脂肪酶中性脂基因芯片技术

来源： cnki会议评论

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儿童唾液中性脂成分的分离及定性

口腔医学 2005年第5期25卷 275-276页

作者：赵东方赵涯东张建国景娟卢宏波郑晓晖西安交通大学口腔医学院口腔内科西安710004 西安交通大学理学院化学系西安710061

目的探索儿童唾液中性脂成分的分离方法并定性.方法收集9～13岁儿童全唾液,汇集为100ml,用氯仿:甲醇=2:1提取脂质,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对唾液中性脂成分进行分离、分析.结果分离出4种中性脂组分,分别为三脂酰... 详细信息

目的探索儿童唾液中性脂成分的分离方法并定性.方法收集9～13岁儿童全唾液,汇集为100ml,用氯仿:甲醇=2:1提取脂质,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对唾液中性脂成分进行分离、分析.结果分离出4种中性脂组分,分别为三脂酰甘油酯、油酸、1,2-二棕榈酸甘油酯和胆固醇.结论采用本法可以将唾液中性脂成分进行有效的分离.

关键词：唾液中性脂高效液相色谱技术蒸发光散射检测器

基于细胞组学技术提高胶球藻C-169中性脂染色的有效性

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现代食品科技 2016年第9期32卷 20-27页

作者：魏东李露华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

本研究基于流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦扫描显微镜等细胞组学分析技术,系统研究了藻液细胞浓度、Nile Red浓度、助溶剂种类和浓度,以及染色温度、染色时间、振荡时间等对检测藻细胞中性脂相对含量（以平均荧光强度表示）的影响... 详细信息

本研究基于流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦扫描显微镜等细胞组学分析技术,系统研究了藻液细胞浓度、Nile Red浓度、助溶剂种类和浓度,以及染色温度、染色时间、振荡时间等对检测藻细胞中性脂相对含量（以平均荧光强度表示）的影响,提高了胶球藻C-169中性脂染色的有效性。结果表明,Nile Red荧光染色的最佳藻细胞浓度为106 mL,染料浓度在0.05-0.2μg/mL之间较适宜且不会产生过量的荧光干扰;添加15%-30%（V/V）丙三醇能显著增强染料进入细胞的通透性;25-40℃范围内胶球藻染色后的荧光强度较强但无显著差异（p〉0.05）;染色时间超过10 min及振荡时间超过30 s均未显著提高胶球藻C-169染色后的平均荧光强度。系统优化后的染色方法可从细胞水平上显著提高中性脂荧光检测的精确性,同时为其他微藻采用这一荧光探针快速测定中性脂含量提供了快速有效方法。

关键词：胶球藻C-169 细胞组学流式细胞术 Nile Red 中性脂

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山西地区高脂微藻的分离筛选

植物科学学报 2013年第4期31卷 415-421页

作者：班剑娇冯佳谢树莲山西大学生命科学学院太原030006

分别从山西省汾河流域、运城盐湖等水体采集水样,使用微挑法、平板涂布法对其中的微藻进行了分离纯化,并对分离得到的29株微藻和购买的3株微藻,进行了高脂藻株的筛选。结果表明:采用干重法对32株微藻的生长量进行测定,其干重介于48.9～4... 详细信息

分别从山西省汾河流域、运城盐湖等水体采集水样,使用微挑法、平板涂布法对其中的微藻进行了分离纯化,并对分离得到的29株微藻和购买的3株微藻,进行了高脂藻株的筛选。结果表明:采用干重法对32株微藻的生长量进行测定,其干重介于48.9～422.2 mg/L之间;采用氯仿甲醇法对32株微藻的总脂含量进行测定,其总脂含量介于5.4%DW～30.1%DW之间;采用尼罗红荧光染色法对32株微藻的中性脂相对含量进行测定,其单位体积的荧光值介于4.1～181.5之间。综合评价藻株的总脂产率,最终筛选到山西省NY017盐生杜氏藻(Dunaliella salina)、NY023线形菱形藻(Nitzschia linearis)以及NY025谷皮菱形藻(Nitzschia palea)为高脂藻株,油脂产率分别为3.25、3.03、2.11 mg.L-1.d-1,具有生产生物柴油的潜力。

关键词：微藻分离纯化生物量总脂中性脂生物柴油