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中心体与端粒酶在乳腺癌发生中的动态变化及相关性分析

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中心体与端粒酶在乳腺癌发生中的动态变化及相关性分析

作者：李哲山东大学

学位级别：硕士

目的：癌症的发生是一个多因素相互作用的及其复杂的过程。虽然迄今为止在癌症领域的研究已取得了令人可喜的成绩，但对其发病机理的了解仍相当有限。目前普遍认为肿瘤的发生与基因组不稳定密切有关，而与基因组不稳定... 详细信息

目的：癌症的发生是一个多因素相互作用的及其复杂的过程。虽然迄今为止在癌症领域的研究已取得了令人可喜的成绩，但对其发病机理的了解仍相当有限。目前普遍认为肿瘤的发生与基因组不稳定密切有关，而与基因组不稳定有关的耐药性的产生又是肿瘤治疗失败的主要原因。在众多可能引起基因组不稳定的相关因素中，中心体和端粒酶所起的作用较为重要，且已引起越来越广泛的关注。虽然中心体和端粒酶都在基因组不稳定和肿瘤发生方面起着重要作用，然而二者在肿瘤发生中的相关性研究却少有人涉足。本研究拟从三方面研究中心体与端粒酶的相关性：首先，研究中心体在乳腺癌发生中的动态变化，初步揭示其在癌发生中的作用;其次，测定端粒酶活性在乳腺癌发生中的变化，初步阐明其在癌发生中的相关性;最后，通过中心体与端粒酶在癌发生中的动态变化，结合其相关蛋白p53的改变，初步探讨中心体与端粒酶的相关性以及两者在肿瘤发生中可能的作用。材料和方法： 1 材料选用济南市中心医院病理科2001年至2006年乳腺肿瘤组织蜡块75例，其中正常乳腺组织12例，乳腺导管内乳头状瘤病18例，乳腺原位癌15例，乳腺浸润性导管癌30例。

关键词：乳腺癌中心体端粒酶 p53

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昆虫孤雌生殖中中心体的组装和意义

细胞生物学杂志 2008年第3期30卷 357-361页

作者：杨璞祝增荣商晗武程家安浙江大学昆虫科学研究所水稻生物学国家重点实验室杭州310029 中国计量学院杭州325600

中心体是动物细胞主要的微管组织中心(microtubule organizing center,MTOC),负责组织纺锤体。近年来,关于昆虫卵母细胞减数分裂后中心体形成的深入研究对阐明昆虫孤雌生殖的过程和机制以及了解孤雌生殖的进化和形成具有重要意义。综述... 详细信息

中心体是动物细胞主要的微管组织中心(microtubule organizing center,MTOC),负责组织纺锤体。近年来,关于昆虫卵母细胞减数分裂后中心体形成的深入研究对阐明昆虫孤雌生殖的过程和机制以及了解孤雌生殖的进化和形成具有重要意义。综述了第一次有丝分裂纺锤体的形成、中心体的装配以及中心体对于昆虫孤雌生殖的意义,表明昆虫孤雌生殖的普遍模式就是在没有精子提供中心粒的情况下,卵子通过新形成的中心体进行有丝分裂,中心体自我组装限制的解除可能是进行孤雌生殖的转折点。

关键词：孤雌生殖有丝分裂中心体纺锤体组装

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中心体异常和食管癌发生相关性的实验研究

中心体异常和食管癌发生相关性的实验研究

作者：官兵汕头大学

学位级别：硕士

背景与目的：中心体(centrosome)是一个微小的细胞器。Boveri作为中心体的先驱研究者首先将这个微小的细胞器置于聚光灯下，一个世纪以来，中心体这一微小的细胞器令无数细胞生物学家着迷。中心体由一对中心粒(centrioles)和中心粒周围... 详细信息

背景与目的：中心体(centrosome)是一个微小的细胞器。Boveri作为中心体的先驱研究者首先将这个微小的细胞器置于聚光灯下，一个世纪以来，中心体这一微小的细胞器令无数细胞生物学家着迷。中心体由一对中心粒(centrioles)和中心粒周围物质(pericentriolarmaterial, PCM)组成。中心粒由九组三联体(或双联体，或单体，取决于细胞类型)微管组成，形成开放的桶状结构，每组三联体微管相互之间斜向排列，略似风轮。各亚微管又由13根直径约4.5nm的原纤维组成，中心粒内无中央微管，也无特殊的臂。中心粒的直径约为100-150nm，长度约为100-400nm，成对并彼此相互垂直排列。中心粒周围环绕着中心粒周围物质(pericentriolar material, PCM)和高电子密度物质(electron-dense material)。中心体的主要功能是作为主要的微管组织中心(microtubule organizing centres, MTOCs)。作为主要的MTOCs，中心体在维持细胞有丝分裂的忠实性和细胞极性上起着重要的作用。当中心体的结构和功能异常时，可引起细胞有丝分裂异常和细胞极性紊乱，并导致细胞染色体不稳(chromosome instability, CIN)，最终导致恶性肿瘤的发生。本项实验通过对食管癌不同阶段中心体结构异常的研究，来探讨中心体结构异常在食管癌发生发展过程中的作用和意义，为临床医学提供诊断和治疗的基础理论依据。材料与方法：从所收取的食管癌标本中随机选取同1例标本中同时具有食管癌不同阶段的标本(即同时具有正常食管粘膜，食管不典型增生，食管原位癌和食管癌4个阶段)进行中心体特性的详细研究。一抗为抗中心体周围蛋白多克隆抗体(Polyclonal Antibodyagainst Pericentrin)，二抗分别为生物素化山羊抗兔IgG抗体(Biotinylafion Goat Anti-RabbitIgG Antibody)和FITC标记抗兔IgG抗体(Anti-Rabbit IgG Antibody, FITC Labeled)。中心体分别采用免疫组化和间接免疫荧光法进行染色。中心体分别采用免疫组化和间接免疫荧光

关键词：中心体中心粒食管癌免疫组化间接免疫荧光

P21Waf1-p27Kip1基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

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P21Waf1-p27Kip1基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

作者：姜丹丹青岛大学

学位级别：硕士

[目的]探讨外源性p21Waf1-p27Kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。 [方法]应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21Waf1、pIRES-p27Kip1、pIRES-p21Waf1-p27Kip1真核表达载体,转染入常规培养的人乳... 详细信息

[目的]探讨外源性p21Waf1-p27Kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。 [方法]应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21Waf1、pIRES-p27Kip1、pIRES-p21Waf1-p27Kip1真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21Waf1、p27Kip1基因蛋白表达情况;MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况。 [结果]Western免疫印迹法证实p21Waf1、p27Kip1、p21Waf1-p27Kip1基因转染24h后,其蛋白表达量明显增多（P＜0.01）,与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制（P＜0.01）,细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G1期和S期细胞比例依次为：（69.52±3.21）%、（18.38±2.51）%,（60.83±3.02）%、（24.52±1.89）%,（78.37±2.83）%、（15.27±1.74）%,对照组则为（47.28±2.25）%、（33.52±1.97）%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前（13.47±0.33）%明显减少：（5.07±0.38）%,（6.28±0.35）%,（3.47±0.23）%,两两比较差异显著（P＜0.01）。 [结论]外源性p21Waf1和p27Kip1基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著。提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21Waf1和p27Kip1在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21Waf1、p27Kip1基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21Waf1、p27Kip1基因不失为一种有效的治疗手段。

关键词：乳腺癌中心体细胞增殖 p21Waf1基因 p27Kip1基因

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中心体蛋白Nlp在宫颈癌中的表达及意义

肿瘤学杂志 2011年第2期17卷 90-92页

作者：马莹白萍宋咏梅詹启敏首都医科大学附属北京妇产医院北京100026 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所北京100021

[目的]探讨宫颈癌中中心体蛋白Nlp的表达情况及意义。[方法]采用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测并比较28例宫颈癌组织及18例正常宫颈组织中Nlp的表达情况,并分析Nlp表达与宫颈癌临床分期及分化程度的关系。[结果]42.9%(12/... 详细信息

[目的]探讨宫颈癌中中心体蛋白Nlp的表达情况及意义。[方法]采用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测并比较28例宫颈癌组织及18例正常宫颈组织中Nlp的表达情况,并分析Nlp表达与宫颈癌临床分期及分化程度的关系。[结果]42.9%(12/28)的宫颈癌细胞核旁和/或胞浆部位Nlp呈阳性表达,正常宫颈组织均不表达Nlp(P>0.05),宫颈癌组织中Nlp的阳性表达在不同临床期别和不同分化程度组中无统计学差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示Nlp宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常宫颈组织。Nlp表达阳性和表达阴性者中位生存时间分别为34个月和38个月。[结论]宫颈癌组织中Nlp在蛋白水平、mRNA水平都存在高表达。

关键词：宫颈肿瘤中心体 Nlp

中心体异常在咖啡因增强顺铂杀伤人肝癌细胞系中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 675-680页

作者：齐建国桑建利林海燕陈晓波王永潮北京师范大学生命科学院细胞生物学研究所北京100875

为了探讨咖啡因是否影响细胞周期检验点而增强顺铂杀伤肿瘤细胞及其作用机制 ,选取同步化于S期的肝癌细胞系SMMC 772 1,用顺铂和咖啡因进行不同方式的处理 ,包括顺铂处理、咖啡因处理以及先经顺铂 ,再用咖啡因处理 .利用相关方法对不同... 详细信息

为了探讨咖啡因是否影响细胞周期检验点而增强顺铂杀伤肿瘤细胞及其作用机制 ,选取同步化于S期的肝癌细胞系SMMC 772 1,用顺铂和咖啡因进行不同方式的处理 ,包括顺铂处理、咖啡因处理以及先经顺铂 ,再用咖啡因处理 .利用相关方法对不同处理的细胞进行了分析 ,包括细胞形态 ,细胞生长速率 ,多核细胞的形成与死亡 ,中心体的异常等 .结果显示 ,顺铂与咖啡因联合处理的细胞出现明显的多核化现象 ,多核细胞占总细胞的百分比可以达到 30 %以上 ,高于用顺铂或用咖啡因处理的细胞 .同时观察到多核细胞生存能力较差 ,它们会通过细胞凋亡的形式死亡 .抗中心体人自身免疫血清的免疫荧光结果显示 ,中心体异常与多核细胞的形成直接相关 .在部分多核细胞的核周围有多个不同强度的荧光点 ,在另部分多核细胞中 ,在其中央有一个大的荧光点 ,被多个细胞核围绕 ,荧光较强 .根据结果推测 ,由多个不完整的中心体导致的多极分裂形成多核细胞 ,随后多个中心体聚集到中央形成大的中心体 ,负责间期微管的组装 .结果表明 ,受到顺铂损伤的细胞由于检验点的作用而使细胞周期阻断 ,咖啡因可消除周期的阻断 ,使细胞在中心体未完成正常复制状态下进入有丝分裂 ,产生大量多核细胞 ,这些多核细胞最终发生凋亡 .

关键词：中心体顺铂咖啡因多核细胞

中心体蛋白centrin在大鼠精子发生过程中的表达

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解剖学报 2001年第3期32卷 255-259页

作者：孙晓冬马静葛烨华王永潮薛社普韩代书中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学研究室北京100005 北京师范大学生物系细胞增殖与调控开放实验室北京100875

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量... 详细信息

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量RT PCR检测centrin同源基因centrin1和centrin2mRNA的表达水平。　结果　间接免疫荧光和蛋白印迹显示精母细胞、圆形、长形精子细胞均有centrin蛋白存在 ,位于中心粒上 ,而在附睾的成熟精子中centrin则消失。RT PCR研究发现 ,centrin1在睾丸组织中特异性表达 ,centrin2在多种组织中均有表达。在睾丸中 ,centrin1仅在生精细胞进入减数分裂后转录 ,其mRNA水平在圆形精子细胞中最高 ,而centrin2在精原细胞中即有表达 ,减数分裂后其mRNA难以检测到。　结论　centrin蛋白在大鼠雄性配子的发育过程中最终丢失 ;该基因家族中同源基因centrin1和centrin2表达呈现组织特异性和发育阶段特异性 ,在精子发生过程中发挥不同功能 ,centrin1蛋白可能与减数分裂及鞭毛生成相关。

关键词： centrin 精子发生中心体大鼠

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蛋白磷酸酶4的中心体定位区分析

科学通报 2007年第16期52卷 1896-1902页

作者：黄秀清宁丽峰龙治涛孙玲玲张慧连慕兰桑建利北京师范大学生命科学学院细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所北京100230

蛋白磷酸酶4(PP4)是PPP家族中的重要成员,它参与了众多细胞功能的调控,包括中心体成熟、微管成核、剪切体组装、JNK通路激活等.与一些晶体结构已知的磷酸酶,如PP1和PP2B不同,目前对于PP4晶体结构的了解还非常少.已有的研究仅表明PP4有... 详细信息

蛋白磷酸酶4(PP4)是PPP家族中的重要成员,它参与了众多细胞功能的调控,包括中心体成熟、微管成核、剪切体组装、JNK通路激活等.与一些晶体结构已知的磷酸酶,如PP1和PP2B不同,目前对于PP4晶体结构的了解还非常少.已有的研究仅表明PP4有一个保守的磷酸酶区域,至于PP4结构区域的其他信息至今还不清楚,这也制约了关于PP4定位区的研究.同样,PP4作为一个在果蝇、线虫和哺乳动物细胞等许多物种中都定位于中心体上、在调节中心体功能上有保守作用的蛋白磷酸酶,与其他中心体蛋白不同,目前也没有关于PP4中心体定位序列信息的报道.本研究通过对一系列GFP标记的PP4缺失突变体定位研究,发现PP4至少存在两个中心体定位区68～136和134～220.它们能够独立行使定位功能以确保PP4在中心体正确定位.这个研究为PP4的结构区域和其他研究提供了新的研究结果和思路.

关键词： PP4 中心体定位结构域

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细胞骨架与中心体的分离过程

生命的化学 2008年第6期28卷 677-680页

作者：王闻起廖侃中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

中心体作为细胞微管组织中心,对于细胞的生理活动具有重要的调控作用。在G2期末和有丝分裂期开始阶段,复制之后的中心体需要向细胞核两端运动,到达形成双极纺锤体的位置。这一过程受到微管和微丝两个骨架系统的调控。在相关动力蛋白的... 详细信息

中心体作为细胞微管组织中心,对于细胞的生理活动具有重要的调控作用。在G2期末和有丝分裂期开始阶段,复制之后的中心体需要向细胞核两端运动,到达形成双极纺锤体的位置。这一过程受到微管和微丝两个骨架系统的调控。在相关动力蛋白的驱动下,两种骨架相互配合,共同完成中心体的分离过程,从而保证细胞顺利进入有丝分裂期。本文分析和比较了两种骨架蛋白对于中心体分离过程中所发挥的作用。

关键词：中心体中心体分离徵管微丝 cortactin