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水生生物学报 2013年第3期37卷 495-500页

作者：张效平李文祥艾桃山吴山功邹红王桂堂中国科学院水生生物研究所武汉430072 中国科学院大学北京100049 武汉中博水产生物技术有限公司武汉430207

指环虫病是严重影响鱼类养殖的寄生虫病。为了有效控制指环虫病,实验研究了寄生在金鱼(Carassius auratus)鳃部的中型指环虫(Dactylogyrus intermedius)卵、纤毛幼虫的形态,以及在离体条件下温度对其产卵和孵化的影响。成熟的中型指环... 详细信息

指环虫病是严重影响鱼类养殖的寄生虫病。为了有效控制指环虫病,实验研究了寄生在金鱼(Carassius auratus)鳃部的中型指环虫(Dactylogyrus intermedius)卵、纤毛幼虫的形态,以及在离体条件下温度对其产卵和孵化的影响。成熟的中型指环虫虫卵大部分为梨形,长30μm左右,后端有一个卵柄。纤毛幼虫呈圆筒状,两端稍尖,眼点两对;后吸盘具有若干对小锚钩;在前部、中部和尾部分别具有一圈纤毛。实验研究了4℃、10℃、22℃、30℃和35℃条件下中型指环虫的产卵和孵化情况,在4℃条件下,中型指环虫基本不产卵也不孵化;在其他4个温度条件下,产卵量随着温度的升高而增加,其平均产卵量分别为3.30、4.10、4.13和4.24枚/虫。统计结果显示:在35℃条件下的产卵量明显高于10℃(P中型指环虫的产卵速率随着温度的升高而加快,产卵维持的时间分别为4d、23h、15h和11h。孵化率在22℃时最高,为72.7%,在30℃和35℃的孵化率为50%左右,卡方检验显示:4种温度下的孵化率之间没有显著性差异(P>0.05);随着温度的升高,孵化速率逐渐加快,而孵化时间和纤毛幼虫的存活时间则缩短,平均孵化时间分别为24d、3d、42h和26h,纤毛幼虫的最长存活时间分别为4d、3d、56h和34h。结果显示,当水温为22℃时,中型指环虫的产卵数量和纤毛幼虫的存活时间都比较高,且孵化率最高,表明该温度条件较适合中型指环虫的种群增长。

关键词：单殖吸虫中型指环虫生活史温度产卵孵化

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中型指环虫的体外培养方法的建立

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江苏农业科学 2018年第23期46卷 187-189,195页

作者：郑瑞珠罗杨志张生元喻运珍张立强艾桃山武汉中博水产生物技术有限公司湖北武汉430070 武汉市农业科学技术研究院水产科学研究所湖北武汉430207

从培养液、抗生素、寄生载体3个方面摸索了中型指环虫体外培养的条件,成功建立了中型指环虫体外培养方法,中型指环虫成虫在体外成功存活6 d。结果表明,适合中型指环虫体外培养的寄生载体为EPC细胞,合适培养液浓度为用生理盐水等倍稀释的... 详细信息

从培养液、抗生素、寄生载体3个方面摸索了中型指环虫体外培养的条件,成功建立了中型指环虫体外培养方法,中型指环虫成虫在体外成功存活6 d。结果表明,适合中型指环虫体外培养的寄生载体为EPC细胞,合适培养液浓度为用生理盐水等倍稀释的M199培养基(含10%胎牛血清),抗生素工作浓度为50 U/mL的青霉素及50μg/mL的链霉素。本研究首次解决了指环虫无法离体长期存活的问题,对指环虫的基础理论研究、驱杀药物筛选均具有非常重要的指导作用。

关键词：中型指环虫体外培养 EPC细胞

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杀灭鱼类单殖吸虫药物筛选方法的建立

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第10期39卷 28-34页

作者：张超赵云奎凌飞王高学西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 汉中市水产实验站陕西汉中723003

【目的】建立活体杀灭鱼类单殖吸虫药物筛选及药效评价的方法。【方法】通过活体杀虫的方法,测试甲苯咪唑、吡喹酮对6种常见单殖吸虫(拟指环虫、坏鳃指环虫、中型指环虫、小鞘指环虫、鲢指环虫、伸展指环虫)的杀灭活性。首先用甲苯咪唑... 详细信息

【目的】建立活体杀灭鱼类单殖吸虫药物筛选及药效评价的方法。【方法】通过活体杀虫的方法,测试甲苯咪唑、吡喹酮对6种常见单殖吸虫(拟指环虫、坏鳃指环虫、中型指环虫、小鞘指环虫、鲢指环虫、伸展指环虫)的杀灭活性。首先用甲苯咪唑、吡喹酮、二硫氰基甲烷和氟甲砜霉素对试验鱼进行预处理,获得无虫鱼,以备感染试验用;然后对5种指环虫(坏鳃指环虫、中型指环虫、小鞘指环虫、鲢指环虫、伸展指环虫)进行纯化,再连同拟指环虫一并进行相应寄主感染试验,评价各种单殖吸虫的感染率和感染强度(以聚集指数表示);最后在不同的条件下对单殖吸虫进行活体保种试验,考察最佳的保种条件。【结果】自然条件下,寄生于金鱼的坏鳃指环虫、中型指环虫和寄生于欧洲鳗鲡的拟指环虫感染率均达到100%。药敏试验中,在相同质量浓度甲苯咪唑下,伸展指环虫、小鞘指环虫、坏鳃指环虫和鲢指环虫均比较敏感,在0.7mg/L时均被完全杀灭,中型指环虫和拟指环虫相对不敏感,在试验最高质量浓度0.8mg/L时仍未被完全杀灭,杀灭率分别为97.0%和90.5%;在相同质量浓度吡喹酮下,拟指环虫较其他5种指环虫更敏感,在2.2mg/L时即被完全杀灭,而中型指环虫、坏鳃指环虫、小鞘指环虫、鲢指环虫和伸展指环虫在试验最高质量浓度2.4mg/L时,仍未被完全杀灭,杀灭率分别为86.9%,82.7%,81.8%,81.4%和56.3%。感染试验中,拟指环虫对欧洲鳗鲡的感染率最高,达100%,聚集指数为5.9;其次是中型指环虫感染金鱼,感染率为97%,聚集指数为5.0。单殖吸虫保种试验表明,水温在20℃时各种单殖吸虫的感染率均能达到100%,且鱼的死亡率较低,是最佳的保种水温。【结论】选择体型小、价格低、易获得的金鱼及其寄生的中型指环虫作为药物筛选的指示生物,可进行杀灭鱼类单殖吸虫的药物筛选工作。

关键词：单殖吸虫杀虫药物筛选金鱼中型指环虫

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远志杀灭鱼类指环虫活性成分的研究

远志杀灭鱼类指环虫活性成分的研究

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作者：康玉军西北农林科技大学

学位级别：硕士

随着我国水产养殖模式向着高密度、集约化养殖转变,各类细菌性、寄生虫性等各类生物源性病害问题也日趋严重。其中指环虫病是水产养殖中最为常见的鱼类寄生单殖吸虫病之一,该病往往引起宿主鱼食欲不振、生长率下降和继发感染后的高死亡... 详细信息

随着我国水产养殖模式向着高密度、集约化养殖转变,各类细菌性、寄生虫性等各类生物源性病害问题也日趋严重。其中指环虫病是水产养殖中最为常见的鱼类寄生单殖吸虫病之一,该病往往引起宿主鱼食欲不振、生长率下降和继发感染后的高死亡率,从而对水产养殖造成严重的经济损失,更成为制约我国水产养殖业发展的重要因素之一。甲苯咪唑、阿苯达唑、吡喹酮、托曲珠利是目前水产养殖生产中用于防治寄生蠕虫病的常见药物。然而,长期使用这些药物导致病原生物对药物产生了普遍耐药,病原生物对药物产生了普遍耐药。耐药产生后药物使用量加大,如此反复恶性循环,使得药物在水产品中超标残留,同时养殖环境不断恶化,导致环境和食品安全问题。由于植物源药物在自然界中大多易降解,不会产生长期的积累对环境友好,因此从天然产物中寻求和筛选活性分子成为创制杀虫药物的一条重要途径。基于此,本研究针对中药远志进行了杀虫活性部位筛选、杀虫活性成分跟踪分离、活性成分结构鉴定和安全性评估等工作,取得了以下结果:1.按照极性从小到大得顺序,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇对远志进行热回流提取,获得远志的不同溶剂提取物。测定各提取物对寄生于金鱼鳃部的中型指环虫的杀灭活性,最终确定甲醇提取部位远志杀虫的最佳活性部位,其浓度为500.0mg/L时可100%杀灭金鱼鳃部寄生的中型指环虫,且对金鱼安全。2.对于具有杀虫活性的远志甲醇提取部位进行了预处理,从而得到水相萃取物(WPR)、正丁醇相萃取物(BE)和滤液浓缩物(FE)三个萃取处理产物。杀虫试验表明BE是杀虫活性的主要贡献部位,其在200 mg/L时的杀虫率达到100%。基于杀虫活性追踪分离的方法,对BE进行逐级柱层析分离,最终分离得到两个化合物:化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。其中化合物Ⅱ浓度为5 mg/L时,达到对指环虫的最佳杀虫浓度,杀灭率为88.6%,当浓度升高至10 mg/L,杀灭率可达100%。通过理化性质鉴定和波谱解析,结合文献数据,将化合物Ⅱ鉴定为3,4,5-三甲氧基肉桂酸。3.以金鱼为动物模型,采取室温静水法对远志甲醇提取物和分离得到的杀虫活性化合物进行了安全性评价。急性毒性实验结果表明,远志甲醇提取物对金鱼48 h的半数致死浓度(LC50)为775.5 mg/L;3,4,5-三甲氧基肉桂酸48 h内对金鱼的半数致死浓度(LC50)为 26.3 mg/L。

关键词：远志中型指环虫活性成分

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