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Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株B亚型Gag和Env蛋白在大肠杆菌中的表达

中国兽医学报 2001年第3期21卷 240-242页

作者：张锦霞金宁一方厚华罗坤郭焱邵一鸣殷震解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

将中国流行株型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAG... 详细信息

将中国流行株型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAGE电泳分析有重组蛋白表达。该蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加 ,4 h达到最大值。凝胶扫描结果显示 ,该蛋白表达量占菌体总蛋白的 1 0 .3 %。Western blotting检测 ,该重组蛋白可与中国流行株 HIV-1 B亚型阳性血清发生特异反应。重组表达质粒 p ETM1、p ETM2和 p ETM3仅在蛋白印迹中与 gp1 2 0单抗发生特异性反应而出现特异显色带 ,SDS-PAGE电泳分析未见表达蛋白带。

关键词： I型人免疫缺陷病毒表达核心蛋白膜相关蛋白中国流行株

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人群血清中抗流感病毒中国流行株抗体水平研究

人群血清中抗流感病毒中国流行株抗体水平研究

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作者：郭琦北京协和医学院

学位级别：硕士

流感病毒能够在人类和动物中引起严重的呼吸道疾病,甚至造成死亡。目前,流感已经成为世界性公共卫生问题,受到了全球的关注。人血清中抗流感病毒抗体在流感病毒入侵时对人体有一定的保护作用,其存在情况被视为流感病毒感染后是否获得免... 详细信息

流感病毒能够在人类和动物中引起严重的呼吸道疾病,甚至造成死亡。目前,流感已经成为世界性公共卫生问题,受到了全球的关注。人血清中抗流感病毒抗体在流感病毒入侵时对人体有一定的保护作用,其存在情况被视为流感病毒感染后是否获得免疫保护的证据。因此,通过研究人群血清抗流感病毒的抗体水平能够了解人群对流感病毒的群体免疫能力,进一步为流感病毒的防控提供理论指导。本研究收集健康体检不同年龄段的血清800多份,以当年中国流行株抗原血凝抑制试验检测抗体水平,发现人群血清中抗中国流行株H1N1、H3N2、Bv和By型抗体阳性率分别为少年组：51.11%、99.12%、4.44%、0%成年组：46.27%、97.85%、6.01%、4.55%老年组：24.15%、98.51%、5.08%、3.38%。其中抗A型流感病毒的抗体阳性率较抗B型流感病毒的抗体阳性率高,不同年龄组中青少年和老年人抗流感病毒抗体阳性率均较低,青少年和老年人依旧是流感病毒感染的高危人群,需要进行疫苗免疫。鉴于流感病毒自身变异较快,不同年份不同地区流感病毒的流行情况都会有所不同。因此,WHO每年都会根据对流感病毒变异的监测情况向世界各国推荐下一年度流感病毒疫苗生产毒株。为了解WHO提供的流感病毒毒株是否能准确地反应中国地区流感病毒抗原变异及流行情况,将流感病毒中国流行株表面抗原NA基因片段测序后与WHO推荐疫苗株进行比对并绘制进化树,发现流感病毒中国流行株表面抗原在进化上与WHO推荐流感病毒毒株存在一定差异。需要进一步采用中和试验评价疫苗免疫血清对中国流行株交叉中和抗体水平的差异,以决定是否有必要采用中国流行株制备流感疫苗。本研究通过观察人群中抗2014年度流感病毒中国流行株免疫力,为以中国流行株制备对中国人群免疫保护效果更好的流感疫苗奠定基础。此外,本论文还对人群中抗H5N1流感病毒免疫力进行了评价青少年、成人、老人组抗体阳性率分别为3.33%、7.86%、6.80%,抗体GMT分别为1：5.983、1：11.037、1：8.910。

关键词：流感病毒中国流行株抗体疫苗株

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甲型肝炎病毒中国流行株5’NCR核苷酸序列异质性研究

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浙江省医学科学院学报 2005年第2期16卷 195-197页

作者：陈勇洪艳杨连华陈念良倪崖凌志强余为群毛江森浙江省医学科学院生物工程研究所，杭州310013

目的了解甲型肝炎病毒中国流行株5’非编码区(5’NCR)核苷酸序列的异质性。方法选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本，以逆转录-套式聚合酶链反应(RT—nPCR)，扩增合成5’NCR高变区基因片段，并进行直接核苷酸序列... 详细信息

目的了解甲型肝炎病毒中国流行株5’非编码区(5’NCR)核苷酸序列的异质性。方法选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本，以逆转录-套式聚合酶链反应(RT—nPCR)，扩增合成5’NCR高变区基因片段，并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果所有甲型肝炎病毒株间5’NCR高变区核苷酸差异≤3nt；与美国株LA差异≥4nt；与澳大利亚株HM175差异≥11nt；差异的大小与基因型无关。结论甲肝病毒基因结构非常稳定，变异率极低。

关键词：甲型肝炎病毒中国流行株 NCR 异质性研究逆转录-套式聚合酶链反应核苷酸序列分析非编码区方法选择血清标本基因片段差异比较基因结构甲肝病毒高变区人粪便病毒株美国株澳大利基因型变异率

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HIV-1中国流行株的生物学表型与V3环序列变异相关性初步研究

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中华医学杂志 2004年第23期84卷 1968-1972页

作者：黑发欣洪坤学宋艳辉唐海丽彭虹徐建青邢辉邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病中心病毒免疫室北京100050

目的　分析我国HIV 1流行株的生物学表型及其与V3环序列变异的相关性。方法　采用传统的共培养方法从HIV 1感染者新鲜外周血单个核细胞 (PBMC)中分离病毒并在MT 2细胞上测定分离株的融合诱导性 ,用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GH... 详细信息

目的　分析我国HIV 1流行株的生物学表型及其与V3环序列变异的相关性。方法　采用传统的共培养方法从HIV 1感染者新鲜外周血单个核细胞 (PBMC)中分离病毒并在MT 2细胞上测定分离株的融合诱导性 ,用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST( 3)测定毒株的辅助受体利用情况 ,用巢式聚合酶链反应 (nest PCR)扩增V3环及两侧区序列并对其序列进行测定 ,用GCG软件分析氨基酸序列。结果　在所分析的 5个原代毒株中 ,LTG0 2 13和LTG0 2 14为合胞体诱导型 (SI) ,利用CXCR4辅助受体 ;XJN0 0 2 1、XJN0 0 91和SHXDC0 0 4 1为非合胞体诱导型 (NSI) ,利用CCR5辅助受体。X4 /SI病毒和R5 /NSI病毒在V3环氨基酸序列方面 ,存在明显的区别。CCR5表型中国株第 8、11、18及第 2 5位氨基酸的共同基序为 :8 TXXS/GXXXXXXR/QXXXXXXE/D 2 5 ,CXCR4表型株在这些位置出现碱性氨基酸取代 (第 2 5位除外 ) ,引进正电荷。结论　HIV 1中国流行株的生物学表型与V3环序列变异密切相关 ,V3环上第 8、11、18及第 2 5位积累碱性氨基酸 (或由酸性氨基酸转变为中性氨基酸 ) ,可以使病毒由NSI/R5表型转变为SI/X4表型。

关键词： HIV-1 中国流行株生物学表型 V3环序列变异相关性

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幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

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作者：毛雅琴浙江大学

学位级别：硕士

研究背景：目前研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在胃炎、胃溃疡及胃癌等疾病中的致病机制的主要方式是建立动物感染Hp的模型,模拟Hp在人体内的致病机制。现在国外Hp感染动物模型建立的技术相对成熟。人们成功的从不同动物及人... 详细信息

研究背景：目前研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在胃炎、胃溃疡及胃癌等疾病中的致病机制的主要方式是建立动物感染Hp的模型,模拟Hp在人体内的致病机制。现在国外Hp感染动物模型建立的技术相对成熟。人们成功的从不同动物及人胃中分离出多种螺杆菌,比如猫胃中分离出猫螺旋杆菌(Helicobacter felis,Hf)等。1997年Lee等人从临床分离出幽门螺杆菌悉尼株(Helicobacter pylori Sydney strain 1 SS1),此菌株能长期有效的定植在实验动物胃中,并成功的在实验动物胃中产生慢性炎症,萎缩性胃炎,肠上皮化生及不典型增生等病理变化。现在SS1菌株作为国际标准株,被广泛的应用到动物建模中。用来建立Hp感染模型的动物种类有很多,如沙鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、猫、无菌猪、恒河猴等,其中一些动物因价格昂贵、饲养条件高等原因限制其在试验中的广泛应用,目前蒙古沙鼠和小鼠较为常用。其中,蒙古沙鼠的Hp感染模型能较好复制Hp在人类的胃中的行为模式,但是蒙古沙鼠也有价格相对较高,饲养方法较复杂,能产生的抗体及引物有限,缺乏基因转换的特异性等缺陷。最易建立并且容易饲养的啮齿类动物模型为小鼠,尤其是C57BL/6及FVB小鼠,能够感染猫螺杆菌及不同种类的Hp,并表现为强烈的辅助性T细胞1(Helper T cell 1,Th1)应答反应,而BALB/c小鼠虽然负荷菌量和C57BL/6差不多,但是其感染后主要产生辅助性T细胞2(Helper T cell 2,Th2)细胞因子,对上皮的损伤较小。现阶段,SS1感染的C57BL/6小鼠已经成为标准模型。在国内,Hp感染相关的动物模型的建立仍处于初级阶段,建模成功率较低,动物模型多为SS1菌株感染C57BL/6小鼠或者BALB/c小鼠,还有部分蒙古沙鼠等。因为不同的菌株对于不同的宿主也会有不同的致病性,我国致病性较强的菌株为vac AS1、cagA、iceA1阳性的Hp菌株,若能建立一个我国流行菌株的标准动物模型,对于我国Hp相关消化道疾病的研究能够建立一个更好的研究平台。目的：本课题通过文献阅读确立空泡细胞毒素AS1 (vacAS1)、细胞毒素相关基因A (cagA)、表皮接触诱导基因A1 (iceAl)阳性的临床分离株为目前国内流行株。对6株临床HP菌株进行基因检测,选择vacAS1、cagA、iceAl阳性的菌株作为致病菌。选用无特殊病原体(Specifc pathogen free,SPF)的C57BL/6小鼠为研究对象,来建立国内幽门螺杆菌流行株的动物模型,研究vacAS1、cagA、 iceAl阳性的幽门螺杆菌流行株感染导致的小鼠胃粘膜改变,为进一步研究致病机制、药物治疗、疫苗研究提供更好的动物模型和研究平台。方法：先对临床分离的六株幽门螺杆菌行基因组检查,确认vacAS1、cagA、iceA1阳性的致病株,并进行培养扩增。取60只SPF级C57BL/6小鼠,随机分为对照组,模型组,每组30只。对照组正常饲养,模型组经口灌服vacAS1、cagA、iceAl阳性的Hp临床分离株,每周一次,连续灌服5周,距末次灌胃后5w,10,15w,20w,25w,30w分6批处死小鼠,每批次5只。取标本行快速尿素酶试验,Giemsa染色法观察幽门螺杆菌在胃黏膜上的定植情况,HE染色观察小鼠胃黏膜的病理变化。结果：对照组小鼠的胃窦、胃体及十二指肠粘膜的尿素酶试验,Giemsa染色结果均阴性,模型组在距末次灌胃后5w, 10w,15w,20w,25w,30w幽门螺杆菌定植率分60%、80%、100%、100%、100%、100%。至20w时模型组开始出现萎缩性炎症改变,至30w结束时模型组慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生、胃癌的发生率分别为100%、60%、0%、0%、0%。结论：本实验成功建立了幽门螺杆菌vacAS1、cagA、iceA1阳性的国内流行株感染C57BL/6小鼠的模型,并明确了其感染小鼠后各阶段的胃黏膜病理改变。

关键词：幽门螺杆菌中国流行株动物模型

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幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

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浙江医学 2015年第22期37卷 1846-1848页

作者：董书琪毛雅琴程浩姚云斌高敏杭州市萧山区第一人民医院消化内科 311200 浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科浙江大学医学院附属邵逸夫医院动物实验室

目的建立国内幽门螺杆菌(Hp)流行株的动物模型,研究Hp流行株感染小鼠的胃黏膜改变,为进一步治疗提供更好的动物模型。方法 60只SPF级C57BL/6小鼠,分为正常组和模型组,每组30只。模型组经口灌服VacAs1、CagA、iceA阳性的临床分离株,距末... 详细信息

目的建立国内幽门螺杆菌(Hp)流行株的动物模型,研究Hp流行株感染小鼠的胃黏膜改变,为进一步治疗提供更好的动物模型。方法 60只SPF级C57BL/6小鼠,分为正常组和模型组,每组30只。模型组经口灌服VacAs1、CagA、iceA阳性的临床分离株,距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周分6批处死,取标本行快速尿素酶试验,Giemsa染色法观察Hp在胃黏膜上的定植情况,HE染色观察小鼠胃黏膜的病理变化。结果正常组小鼠的胃窦、胃体及十二指肠黏膜的尿素酶试验,Giemsa染色结果均阴性,模型组在距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周Hp定植率分别为60%、80%、100%、100%、100%、100%,至30周模型组慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生、胃癌发生率分别为100%、60%、0%、0%、0%。结论成功建立了Hp VacAs1、CagA、iceA阳性的国内流行株感染C57BL/6小鼠的模型,并明确了其感染小鼠后各阶段的胃黏膜病理改变。

关键词：幽门螺杆菌中国流行株动物模型

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