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中国林蛙变态发育中舌鳃骨的形态变化

陕西师范大学学报（自然科学版） 2022年第5期50卷 122-126页

作者：裴跃斌王宏元梁刚陕西师范大学生命科学学院陕西西安710119

为揭示中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪变态发育中舌鳃骨的形态变化,采用改良的Toyal骨骼双染色法对Gosner(G)26~46期中国林蛙蝌蚪舌鳃骨进行染色,并观察、比较和采集图像。结果显示,中国林蛙蝌蚪的舌鳃骨由角舌骨、关联骨、鳃下骨板... 详细信息

为揭示中国林蛙(Rana chensinensis)蝌蚪变态发育中舌鳃骨的形态变化,采用改良的Toyal骨骼双染色法对Gosner(G)26~46期中国林蛙蝌蚪舌鳃骨进行染色,并观察、比较和采集图像。结果显示,中国林蛙蝌蚪的舌鳃骨由角舌骨、关联骨、鳃下骨板和鳃篮4部分构成。在变态发育中,舌鳃骨始终以软骨状态存在。G26期蝌蚪的舌鳃骨已具备完整结构,G26~G38期舌鳃骨各部分呈等速率生长,至G38期舌鳃骨达到最大;G39~G41期舌鳃骨开始自行吸收,形态略变小;G42期舌鳃骨形态已有较大变化;G43~G46期舌鳃骨的角舌骨、关联骨和鳃下骨板均发生变形与重塑,鳃篮逐渐消失,舌鳃骨发育为成体舌骨。为了适应生理功能的变化,中国林蛙蝌蚪舌鳃骨的形态结构经历了由小到大、又由大变小、最终在舌鳃骨原来位置重塑出成体舌骨的发育过程。

关键词：中国林蛙蝌蚪舌鳃骨变态发育

高氯酸钠和外源性T4对中国林蛙尾吸收和软骨内骨化的影响

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高氯酸钠和外源性T4对中国林蛙尾吸收和软骨内骨化的影响

作者：陈晓燕陕西师范大学

学位级别：硕士

近几十年来,全球范围内两栖动物的生存面临着巨大的威胁,种群数量急剧下降。生物入侵、环境污染、生存环境遭到破坏等是造成两栖类减少的重要原因。其中,一些内分泌干扰化合物已经被证明可以通过干扰两栖动物生命早期阶段体内的激素水平... 详细信息

近几十年来,全球范围内两栖动物的生存面临着巨大的威胁,种群数量急剧下降。生物入侵、环境污染、生存环境遭到破坏等是造成两栖类减少的重要原因。其中,一些内分泌干扰化合物已经被证明可以通过干扰两栖动物生命早期阶段体内的激素水平,进而影响两栖动物的生长发育。高氯酸盐是存在于自然环境中的一类化学污染物,作为钠-碘转运体(NIS)的有效抑制因子,可以减少或组织甲状腺激素的合成,导致两栖动物的发育和生长紊乱。外源性甲状腺素(T4)是一种促进发育的活性物质,可以增加两栖动物体内甲状腺激素水平,进而诱导幼体提前变态。但是,高氯酸钠和外源性T4这些内分泌干扰化合物是否可以通过改变体内甲状腺激素水平来影响两栖动物尾吸收以及骨骼发育,其研究知之甚少。本研究采用中国林蛙(Rana chensinensis)作为研究对象,选取临近变态期(Gs 40期),变态高峰期(Gs 42期)以及变态完成期(Gs 46期)三个时期,通过形态学,组织学以及转录组测序等方法,探讨高氯酸钠和外源性T4暴露对中国林蛙尾吸收分子机制以及软骨内骨化的影响。本研究包括两部分,第一部分探究250μg/L Na Cl O和5μg/L外源性T4暴露对蝌蚪生长发育以及尾吸收过程的影响。将Gs 28期蝌蚪分别置于对照、250μg/L Na Cl O和5μg/L T4溶液中饲养,首先检测不同溶液暴露对Gs 40、Gs 42和Gs 46期蝌蚪的形态学以及变态时间的影响,并通过Masson’s三色法染色检测Gs 40期和Gs 42期蝌蚪尾部的组织学变化。再运用同样的染色方法观察Gs 40、Gs 42和Gs 46期蝌蚪的甲状腺组织结构的改变。此外,通过转录组测序技术对中国林蛙尾吸收相关基因的表达水平进行分析。第二部分探讨250μg/L Na Cl O和5μg/L外源性T4暴露对中国林蛙蝌蚪软骨内骨化过程的影响。通过Masson’s三色法染色对Gs 40、Gs 42和Gs 46期蝌蚪股骨及胫腓骨切片进行染色分析。以及使用阿利新蓝-茜素红双染色法对样本进行染色,以探究不同溶液处理对蝌蚪骨化程度的影响。此外,通过转录组测序技术对中国林蛙软骨内骨化相关基因的表达水平进行分析。研究结果及结论如下:第一部分;1.形态学测量结果分析发现,与对照组相比,250μg/L Na Cl O暴露会延迟蝌蚪发育。而5μg/L T4处理显著降低蝌蚪Gs 40期以及Gs 42期的全长、体长、体重、后肢长以及尾长,并诱发蝌蚪提前变态。表明Na Cl O可抑制中国林蛙蝌蚪的变态,外源性T4可加速中国林蛙幼体的变态过程并减小幼体的体型。2.甲状腺组织学观察结果显示,250μg/L Na Cl O暴露组中国林蛙蝌蚪的甲状腺增大,滤泡增大,甲状腺滤泡上皮细胞厚度增加。5μg/L外源性T4暴露增强了Gs40和Gs 42期中国林蛙蝌蚪甲状腺萎缩,并导致卵泡大小、胶质面积和滤泡上皮细胞厚度减少。表明Na Cl O以及T4暴露会损伤中国林蛙蝌蚪的甲状腺组织学形态。3.尾组织学观察结果显示,在尾吸收过程中,快肌先行消失,且不受Na Cl O暴露的抑制作用。T4暴露会优先诱导肌肉束间结缔组织消失。Na Cl O暴露会延缓尾部脊索的崩塌,而T4暴露会加速尾脊索的皱褶。4.转录组测序结果表明,凋亡相关基因APAF1、BAX和CASP6在T4暴露组中表达水平较高。并且细胞组分降解相关基因MMP9和MMP13的表达在T4暴露下显著上调。此外,细胞中抗氧化酶SOD和CAT在Na Cl O暴露组中的表达更高。因此,外源性T4暴露诱导凋亡相关基因以及细胞组分降解相关基因上调,促进中国林蛙蝌蚪的尾部吸收。而SOD和CAT的高表达可以降低Na Cl O暴露下的ROS水平,从而延缓中国林蛙蝌蚪的尾部吸收。第二部分:1.后肢组织学观察结果显示,250μg/L Na Cl O和5μg/L T4暴露均抑制了股骨及胫腓骨的纵向生长以及骨宽度生长。已有研究证实异常的纵向生长和骨骼发育不良与TH水平的破坏密切相关。此外,一些外源性化合物可通过干扰全身激素调节而对骨强度产生不利影响。因此,250μg/L Na Cl O和5μg/L T4暴露改变幼体体内TH水平而破坏全身稳态,从而抑制蝌蚪后肢生长。2.骨骼双染色结果显示,250μg/L Na Cl O和5μg/L T4暴露均抑制多种骨骼的骨化程度。在250μg/L Na Cl O暴露组中,前臂、髂骨、股骨和胫腓骨的骨化率在Gs 40、Gs 42和Gs 46期中均低于对照组。而在5μg/L T4暴露组中,蝌蚪Gs42期及Gs 40期的全身骨骼完全未骨化。这表明甲状腺激素水平的改变可能会抑制蝌蚪的软骨内骨化过程。3.转录组测序结果表明,T4暴露后,Dio3、TRβ、Runx2、MMP9和MMP13的表达均上调。我们推测过量的THs可能会提高软骨内骨化相关基因的表达水平,对骨发育产生不利影响。综上所述,本实验的结果表明Na Cl O和

关键词：高氯酸钠外源性T4 尾吸收软骨内骨化中国林蛙

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九寨沟中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群差异分析

四川动物 2023年第4期42卷 439-445页

作者：黄飞云向朋尚可杨宇赵春霖岳碧松四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

通过16S rRNA高通量测序方法分析采自四川九寨沟国家级自然保护区的中华蟾蜍Bufo gargarizans和中国林蛙Rana chensinensis的肠道菌群结构,结果表明:中华蟾蜍和中国林蛙共有的扩增序列变体(ASV)数目为440,其中特有的ASV分别为313和539... 详细信息

通过16S rRNA高通量测序方法分析采自四川九寨沟国家级自然保护区的中华蟾蜍Bufo gargarizans和中国林蛙Rana chensinensis的肠道菌群结构,结果表明:中华蟾蜍和中国林蛙共有的扩增序列变体(ASV)数目为440,其中特有的ASV分别为313和539。在门级水平上,中华蟾蜍和中国林蛙肠道中疣微菌门Verrucomicrobiota、厚壁菌门Firmicutes和拟杆菌门Bacteroidota的总丰度分别为96.18%和79.00%。在属级水平上,丰富度0.1%以上的有17个属级单元,总丰度分别占中华蟾蜍和中国林蛙肠道菌群的69.82%和41.37%,其中阿克曼菌属Akkermansia最丰富,分别占48.35%和10.75%。在中国林蛙肠道中,拟杆菌属Bacteroides、另枝菌属Alistipes、脱硫弧菌属Desulfovibrio、丹毒杆菌属Erysipelatoclostridium、瘤胃球菌属Ruminococcus UBA1819、理研菌属Rikenella表现出更高的均匀度。研究结果为进一步深入研究中华蟾蜍和中国林蛙肠道微生物结构和功能提供了基础资料。

关键词：中华蟾蜍中国林蛙肠道微生物 16S rRNA测序阿克曼菌属

中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的测定

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生物工程学报 2009年第1期25卷 101-108页

作者：虞凤慧张丽芳李俊峰李晓帆付欣尚德静辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室辽宁师范大学生命科学学院大连116029

采用RT-PCR和3′RACE方法,从中国林蛙皮肤总RNA中克隆出了6条编码不同抗菌肽前体的cDNA序列,分别命名为:preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb、preprotemporin-1CEc、preprobrevinin-1CEa、preprobrevinin-1CEb和preprochensinin-1。cDNA碱基序列全长为289～315bp,编码59～65个氨基酸。6个抗菌肽前体由3部分结构域组成:22个氨基酸残基组成的信号肽、多个酸性氨基酸残基组成的中间序列、高度变异的成熟肽。preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb和preprotemporin-1CEc属于temporin-1家族抗菌肽前体,具有肽链短,C-端酰胺化的特点;preprobrevinin-1CEb和preprobrevinin-1CEa属于brevinin-1家族抗菌肽前体,在肽链的C-端含有RANA盒结构,可在2个半胱氨酸残基间形成二硫键,组成7肽环;preprochensinin-1在已知多种数据库中没有发现序列同源的多肽,被鉴定为新抗菌肽。人工合成temporin-1CEa、temporin-1CEb、brevinin-1CEa和chensinin-1四种中国林蛙皮肤抗菌肽,活性检测结果表明:它们对金黄葡萄球菌等3种革兰氏阳性细菌的生长具有明显抑制作用,同时抑制乳腺癌MCF-7细胞和宫颈癌HeLa细胞生长。

关键词：中国林蛙 cDNA克隆序列分析抗菌活性抗癌活性

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中国林蛙饵料仿生诱喂装置的研制

农业工程学报 2009年第2期25卷 104-106页

作者：史晓敏张艳春计青山石戈浙江海洋学院机电工程学院舟山316004 浙江海洋学院海洋科学学院舟山316004

为了实现中国林蛙工厂化养殖,降低养殖成本和养殖风险、改善养殖环境、提高林蛙的蛙油品质,设计研制了饵料仿生诱喂装置,对几种理论可行的装置方案进行试制和初步试验,确定了3轴不同相位凸轮传动的最佳方案,根据最佳方案设计和制作了样... 详细信息

为了实现中国林蛙工厂化养殖,降低养殖成本和养殖风险、改善养殖环境、提高林蛙的蛙油品质,设计研制了饵料仿生诱喂装置,对几种理论可行的装置方案进行试制和初步试验,确定了3轴不同相位凸轮传动的最佳方案,根据最佳方案设计和制作了样机并进行了林蛙取食试验,所设计的装置占用蛙池面积仅为每池0.48 m2,该装置制造成本低、操作简单,林蛙取食率最高达到了79.2%。试验结果表明:装置所产生的饵料仿生蠕动能够满足中国林蛙取食要求,取得了满意的结果。

关键词：运动仿生凸轮机构饲喂装置中国林蛙

温度对中国林蛙肠道菌群和脂质代谢以及骨骼发育的影响

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温度对中国林蛙肠道菌群和脂质代谢以及骨骼发育的影响

作者：任超璐陕西师范大学

学位级别：硕士

在两栖动物进化史中,全球气候一直在发生巨大波动。气候变化会导致水生环境长期变暖,影响两栖动物生长发育,存活和变态。两栖类变态是蝌蚪胚胎后最剧烈的发育过程,在这一过程中蝌蚪组织的结构和功能会发生极大变化,包括幼体特定器官(尾... 详细信息

在两栖动物进化史中,全球气候一直在发生巨大波动。气候变化会导致水生环境长期变暖,影响两栖动物生长发育,存活和变态。两栖类变态是蝌蚪胚胎后最剧烈的发育过程,在这一过程中蝌蚪组织的结构和功能会发生极大变化,包括幼体特定器官(尾巴和鳃)的退化以及成体特定器官(四肢)的发育。还有一些器官(脑、肝、肠、皮肤)会发生由幼体到成体类型的重塑以从根本上适应陆地环境。这些特定的变化直接或间接地受甲状腺激素(THs)的调控。本实验以中国林蛙(Rana chensinensis)为研究对象,在Gs26期将其暴露于低温(15°C)、室温(21°C)和高温(27°C)条件下。待其发育至Gs36、Gs40、Gs42、Gs46期采集样本,探讨温度对中国林蛙蝌蚪生长发育的影响。本实验主要包含两个部分:第一部分,温度对中国林蛙肠道菌群和脂质代谢的影响。测定Gs36期蝌蚪的形态学参数(全长、体长、体重、肠长、肠重),采用Masson三色法对肠道切片进行染色,分析肠组织病理学变化。通过16S r RNA基因高通量测序,观察不同温度蝌蚪肠道菌群结构和多样性变化。使用RT-q PCR对不同温度脂质消化吸收(CLPS、APOA-I、I-FABP和LIPASE)和短链脂肪酸(Muc2,GPR109A和HDAC1)相关基因m RNA表达水平进行评估。研究结果如下:1.形态学测量结果显示,与对照组相比,低温组Gs36期蝌蚪的全长、体长、体重、肠长、肠重均显著增大。表明温度会对中国林蛙蝌蚪体型大小产生影响。肠道组织学切片结果显示,与对照组相比,高温组出现严重的组织学损伤,如肠上皮细胞变性、上皮细胞形状不规则和核固缩。2.肠道菌群结果显示,与对照组相比,高温组肠道微生物群落的多样性和丰富度显著增加;不同温度处理组肠道菌群的组成存在较大差异;冗余分析(RDA)结果表明蝌蚪肠道菌群组成与宿主参数之间存在一定相关性;肠道微生物群功能预测结果表明,与对照组相比,脂质代谢的相对丰度在低温组显著增加,而在高温组显著下降,这表明低温可能促进蝌蚪脂质代谢,使蝌蚪充分地消化和吸收脂质,体重增加。3.RT-q PCR结果显示,与对照组相比,高温和低温组短链脂肪酸相关基因GPR109A和HDAC1的m RNA表达水平显著下降;脂质消化吸收相关基因LIPASE的m RNA表达水平在温度处理组中显著升高,APOA-I的m RNA表达水平显著下降,表明温度会破坏中国林蛙蝌蚪的肠道屏障,激活炎症和免疫反应,造成肠道结构损伤、肠道炎症和稳态紊乱。第二部分,温度对中国林蛙骨骼发育的影响。对Gs40、42和46期蝌蚪形态指标(全长、体长、体重、后肢长和最大跳跃距离)进行测定;使用Masson三色法对蝌蚪甲状腺、股骨和胫腓骨组织学切片进行染色并观察其组织学变化;使用阿利新蓝-茜素红双染色法观察蝌蚪的骨骼发育;对暴露于不同温度Gs42期蝌蚪进行转录组测序,其中具体研究了不同温度Dios、TRs、Sox9、BMP、VEGF和VEGFR等基因表达水平的变化对软骨内骨化过程的影响。研究结果如下:4.形态学结果显示,高温组Gs40、Gs42和Gs46期蝌蚪的全长显著降低,Gs40和Gs42期蝌蚪的体长显著降低,Gs42和Gs46期蝌蚪的后肢长度显著下降,表明蝌蚪的生长符合温度-大小规律(TSR),即饲养温度越高,幼体体型越小。5.甲状腺组织学切片结果显示,与对照组相比,高温组Gs40和Gs46期蝌蚪胶质大小、胶质面积和滤泡上皮细胞高度显著下降,Gs42和Gs46期蝌蚪甲状腺大小显著降低,表明高温会引起甲状腺组织学损伤,干扰甲状腺激素(THs)的产生,导致蝌蚪变态延迟。股骨、胫腓骨组织学切片结果显示,与对照组相比,高温组Gs42和Gs46期股骨皮质骨厚度、骨内膜直径、骨膜宽显著下降,Gs40和Gs46期蝌蚪胫腓骨皮质骨厚度、骨内膜直径、骨膜宽显著下降,表明高温会通过干扰THs水平,影响蝌蚪的骨骼发育。6.骨骼双染色结果显示,Gs40、Gs42和Gs46期蝌蚪的前臂、髂骨、股骨和胫腓骨的骨化程度在低温下最高,其次是室温,最后是高温;骨骼长度测量结果显示,与对照组相比,高温组Gs40、Gs42和Gs46期蝌蚪前臂、髂骨、股骨和胫腓骨的长度显著减少,表明高温会抑制蝌蚪的软骨内骨化进程。7.转录组测序结果显示,不同温度处理组与软骨内骨化相关的差异表达基因(DEGs)具有不同的基因表达模式。在高温处理组,Dio2、TRβ、Sox9、BMP3、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFR-1和VEGFR-2的m RNA表达水平显著上调,表明高温可能会抑制变态高峰期蝌蚪的软骨内骨化进程。综上所述,本文将中国林蛙蝌蚪暴露于不同温度处理组中,运用形态学、组织学等检测技术,测定发育至不同时期蝌蚪的各项指标。结果表明,高温暴露可能会影响蝌蚪变态过程的肠道重塑以及骨骼发育,例如引起肠道组织学损伤、肠道菌群失调和肠道稳态紊乱,干扰甲状腺激素水平,

关键词：温度甲状腺激素肠道微生物软骨内骨化中国林蛙

中国林蛙变态蝌蚪对pH、盐度和碱度的适应性

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应用生态学报 2004年第8期15卷 1411-1415页

作者：杨富亿邵庆春李景林陈国双中国科学院东北地理与农业生态研究所长春130012

在水温 16～ 18℃的野外条件下 ,采用单因子急性毒性实验法 ,研究了水环境中pH、盐度和碱度对中国林蛙 (Ranachensinensis)变态蝌蚪的毒性效应 .结果表明 ,中国林蛙变态蝌蚪对 pH的适应范围为4 3～ 9 7,最低耐受限 3 6 ,最高耐受限 10 ... 详细信息

在水温 16～ 18℃的野外条件下 ,采用单因子急性毒性实验法 ,研究了水环境中pH、盐度和碱度对中国林蛙 (Ranachensinensis)变态蝌蚪的毒性效应 .结果表明 ,中国林蛙变态蝌蚪对 pH的适应范围为4 3～ 9 7,最低耐受限 3 6 ,最高耐受限 10 7;对盐度的最高耐受限为 9 98g·L-1,适应盐度上限 7 14 g·L-1,安全盐度上限 1 70g·L-1;对碱度的最高耐受限为 19 96mmol·L-1,适应碱度上限 8 76mmol·L-1,安全碱度上限 2 4 1mmol·L-1.野外变态蝌蚪饲养池水体 pH应控制在 6 5～ 8 5 ,盐度控制在 2 0 g·L-1以下 ,碱度不超过 4 0mmol·L-1.中国林蛙变态蝌蚪是一种狭酸碱、低耐盐、低耐碱生物 .

关键词：中国林蛙变态蝌蚪 pH 盐度碱度适应性

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一种中国林蛙抗菌肽的光谱研究

高等学校化学学报 2007年第6期28卷 1064-1068页

作者：周杰孟庆繁田晓乐程瑛琨姜福佳李青山滕利荣吉林大学生命科学学院长春130021

从中国林蛙皮中纯化得到了一种抗多种临床多重耐药菌的抗菌肽(RTCⅠ),初步氨基酸组成分析结果表明其不含碱性氨基酸,此抗菌肽在276·5和356·5nm波长光的激发下发射出448nm的荧光,利用傅里叶变换红外光谱、拉曼光谱、电子吸收光谱及荧... 详细信息

从中国林蛙皮中纯化得到了一种抗多种临床多重耐药菌的抗菌肽(RTCⅠ),初步氨基酸组成分析结果表明其不含碱性氨基酸,此抗菌肽在276·5和356·5nm波长光的激发下发射出448nm的荧光,利用傅里叶变换红外光谱、拉曼光谱、电子吸收光谱及荧光光谱等技术研究了此特定荧光产生的结构依据.此抗菌肽的主要组成是Tyr,Asn(Asp)和Glu(Gln),抗菌肽特殊的荧光光谱和电子吸收谱与Tyr的酚羟基和Asn侧链的强氢键有关.这一特殊的荧光(448nm)及圆二色谱(259,263和267nm)信号为进一步在分子水平上研究此抗菌肽的抗菌机理提供了依据.

关键词：中国林蛙抗菌肽荧光结构

双酚A诱导雄性中国林蛙肝细胞雌激素受体表达和卵黄蛋白原合成

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Zoological Research 2011年第3期32卷 317-322页

作者：白瑶张育辉翟丽丽李忻怡杨君洪燕燕陕西师范大学生命科学学院陕西西安710062

为探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雄性两栖动物肝细胞中雌激素受体(estrogenreceptor,ER)表达和卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)合成的影响,将中国林蛙(Ranachensinensis)雄性成体分别持续暴露于10-7、10-6、10-5mol/LBPA水体中10、20、30d,设10-9、10-8mol/L雌二醇(E2)为阳性对照。用原位杂交技术检测ERmRNA在肝细胞中的表达定位,用免疫组织化学技术检测肝细胞中ER和VTG蛋白的表达。结果显示,各BPA和E2处理组肝细胞中均有ERmRNA阳性反应,ER和VTG蛋白的表达相对值均显著高于空白对照组。在同一暴露时间,ER和VTG表达值是随着BPA浓度的增加呈增高趋势。在同一BPA浓度,VTG表达值是随暴露时间的延长呈增高趋势,而ER表达值则无显著性变化。这些表明BPA可以通过诱导雄性中国林蛙肝细胞的ER高调导致VTG合成,但其效应远低于E2。

关键词：双酚A 肝细胞雌激素受体卵黄蛋白原中国林蛙