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中国恒河猴(Macaca mulatta)外周血CD4^+CD25^+T淋巴细胞的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第8期23卷 734-736页

作者：杨贵波赵辉邱趁丽邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京100050

目的:研究中国恒河猴外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞亚群及其分布频率。方法:利用流式细胞术对50只中国恒河猴外周血CD4+CD25+T淋巴细胞进行了分析。结果:发现所有被检测的恒河猴个体中均存在明显的CD4+CD25+T淋巴细胞亚群;CD4+CD25+T淋巴... 详细信息

目的:研究中国恒河猴外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞亚群及其分布频率。方法:利用流式细胞术对50只中国恒河猴外周血CD4+CD25+T淋巴细胞进行了分析。结果:发现所有被检测的恒河猴个体中均存在明显的CD4+CD25+T淋巴细胞亚群;CD4+CD25+T淋巴细胞大约占CD4+T淋巴细胞的9.1%(变化范围为2.6%～18.1%);其中CD4+CD25highT淋巴细胞约占2.5%(0.3%～5.5%)。对不同年龄和性别个体中CD4+CD25+T淋巴细胞频率的初步分析未发现统计学上有年龄或性别差异。结论:中国恒河猴可用于与CD4+CD25+T细胞相关的人类疾病的研究中。

关键词：中国恒河猴调节性T淋巴细胞 CD4^+CD25^+T淋巴细胞 CD4^+CD25^high T淋巴细胞

中国恒河猴(Macaca mulatta)外周血Th17细胞及其在SHIV感染后的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 217-220页

作者：邱趁丽赵辉杨贵波中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京100050

目的:对正常中国恒河猴(Macaca mulatta)及嵌合猿猴/人免疫缺陷病毒(SHIV)感染过的中国恒河猴外周血中CD4+IL-17A+和CD4-IL-17A+T淋巴细胞的分布频率进行初步观察。方法:用荧光染料标记的单克隆抗体(mAb)对10只中国恒河猴的外周血或PMA+... 详细信息

目的:对正常中国恒河猴(Macaca mulatta)及嵌合猿猴/人免疫缺陷病毒(SHIV)感染过的中国恒河猴外周血中CD4+IL-17A+和CD4-IL-17A+T淋巴细胞的分布频率进行初步观察。方法:用荧光染料标记的单克隆抗体(mAb)对10只中国恒河猴的外周血或PMA+Ionomycin刺激后的PBMC细胞表面的CD3、CD4、CD8及细胞内IL-17A进行免疫荧光染色。用FACScalibaur获取染色后的样品,所得数据用CellQuest进行分析。结果:在6只正常中国恒河猴个体中均能检测到IL-17A+淋巴细胞,未经刺激培养的样品中IL-17A+细胞频率很低,但在短期刺激培养后淋巴细胞中具有约1.4%的淋巴细胞为IL-17A+细胞,明显多于刺激前的IL-17A+淋巴细胞;在短期刺激培养后CD3+CD4+淋巴细胞中大约有2.7%的IL-17A+细胞或CD4+Th17细胞。对4只SHIV感染个体中Th17细胞的初步分析未发现它们与正常个体间的统计学差异。结论:与人类相似,中国恒河猴的外周血中也存在一定比例的Th17细胞,为进一步利用恒河猴AIDS动物模型分析HIV/AIDS与Th17细胞的关系提供了基础。

关键词：中国恒河猴外周血单个核细胞 IL-17A^+细胞 CD4^+Th17 猿猴/人免疫缺陷病毒感染

中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第5期30卷 489-492页

作者：姚文荣杨贵波中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行... 详细信息

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。

关键词：中国恒河猴 C型凝集素9家族A成员树突状细胞自然杀伤细胞凝集素受体1 树突状细胞 C型凝集素样结构域

中国恒河猴感染SIV后T淋巴细胞初始、记忆亚群的变化

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中国免疫学杂志 2012年第6期28卷 483-488页

作者：陈颂吴小闲卢耀增潘菊华王阶黄世敬赖春辉郭卫中孙丽华鲍琳琳卢葳广州中医药大学热带医学研究所广州510405 中国医学科学院&北京协和医学院医学实验动物研究所北京100021 中国中医科学院广安门医院北京100053 法国发展研究院-UMI233中国部

目的:对中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒(SIV)后CD4T初始、记忆亚群的细胞进行分析,了解各亚群的变化规律以及在AIDS发病过程中的意义。方法:使用SIVmac239毒株感染20只中国恒河猴,观察18个月;在感染前、后各时间点,使用实时荧光定量PCR(T... 详细信息

目的:对中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒(SIV)后CD4T初始、记忆亚群的细胞进行分析,了解各亚群的变化规律以及在AIDS发病过程中的意义。方法:使用SIVmac239毒株感染20只中国恒河猴,观察18个月;在感染前、后各时间点,使用实时荧光定量PCR(TaqMan探针法)进行病毒载量的检测;使用CD3/CD4/CD28/CD95表面标记的组合,进行CD4及其初始/记忆亚群比例的流式分析,并结合血常规检测的结果计算CD4及其各亚群的绝对数。结果:得到了CD4各个亚群在SIV感染后的变化曲线;并发现SIV感染后CD4减少的主体是中央型记忆(CM)CD4+T细胞;而初始型CD4+T在半数动物逐渐缓慢减少,但个体间差异较大。此外,还发现快速进展型RM449猴在死亡前其初始型及CM CD4仍较高,但其初始型CD4细胞在流式图上存在着类似"转化阻滞"的现象。结论:本研究展示了CD4细胞的初始、记忆亚群在感染SIV后的变化规律;对其进行细分研究,有助于更准确地了解体内免疫状态的变化,为临床疗效观察、免疫状态评估等提供参考。

关键词：猴免疫缺陷病毒中国恒河猴 T细胞记忆细胞亚群

中国恒河猴Mamu-B*1703/EGFP在K562和B16细胞中的表达及分布

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 874-878页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学生物工程研究所广州510632

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562... 详细信息

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562和B16细胞,细胞收集后以W6/32单克隆抗体或抗Mamu-B*1703抗血清及PE标记二抗染色,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析Mamu-B*1703复合体在细胞内和细胞表面的表达。结果在K562和B16细胞的细胞质内均可观察到与Mamu-B*1703重链基因融合表达的绿色荧光蛋白激发后的绿色荧光,即2种细胞均可表达外源Mamu-B*1703重链分子;但通过藻红蛋白标记的抗MHCⅠ类分子复合体抗体染色显示,Mamu-B*1703复合体仅表达于K562细胞表面,而不表达于B16细胞表面。结论Mamu-B*1703重链可与人K562细胞而不能与小鼠B16细胞内的βm轻链结合组装成复合体,表达于细胞表面,提示研究恒河猴的MHCⅠ分子表达应利用人类的细胞株。

关键词：主要组织相容性复合体Ⅰ类分子 Mamu-B*1703 中国恒河猴转染

中国恒河猴SHIVKU-1艾滋病模型中枢神经系统的病理研究

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中国病原生物学杂志 2019年第8期14卷 896-900页

作者：余倩肖前浩张晶王勇鲜巧阳程健曦庄柯武汉大学动物实验中心/ABSL-3实验室湖北武汉430071 武汉生物制品研究所有限责任公司病研二室

目的建立中国恒河猴SHIVKU-1艾滋病模型,观察感染SHIVKU-1的中国恒河猴中枢神经系统损伤的病理改变特点。方法用SHIVKU-1感染2只中国恒河猴(编号WSH01和WSH02),分别于感染后第72周和第70周出现严重艾滋病症状时执行安乐死。取脑组织的... 详细信息

目的建立中国恒河猴SHIVKU-1艾滋病模型,观察感染SHIVKU-1的中国恒河猴中枢神经系统损伤的病理改变特点。方法用SHIVKU-1感染2只中国恒河猴(编号WSH01和WSH02),分别于感染后第72周和第70周出现严重艾滋病症状时执行安乐死。取脑组织的不同部位行常规病理切片,进行HE染色检查和免疫组织化学染色检查。结果 WSH01恒河猴感染晚期出现站立困难、行动迟缓、左半身控制能力丧失等明显的神经艾滋临床症状。WSH02恒河猴感染晚期全身耗竭,严重腹泻。HE染色检查WSH01恒河猴小脑、脑干、枕叶中可见多核巨细胞浸润和神经胶质小结形成;大脑皮层小胶质细胞增生;海马回神经元细胞减少、排列无序。病理诊断为艾滋病脑炎。WSH02猴仅在脑组织中观察到部分小胶质细胞结节,未见其他明显的神经病理损伤。免疫组化检查观察到在实验猴脑组织有两种主要的损伤形式,分别为典型的血管周病变和弥散性病变;大量活化巨噬细胞和小胶质细胞浸润和激活,多核巨细胞形成(CD68,CD163,Iba-1);损伤部位SHIVKU-1病毒蛋白P28强阳性(SIV p28);WSH01恒河猴海马回神经元细胞明显减少且排列无序(MAP2)。结论中国恒河猴SHIVKU-1感染导致中枢神经系统损伤,脑组织各部位表现出不同程度的病理改变,以大量巨噬细胞/小胶质细胞浸润、激活,并伴有病毒显著增殖为主。

关键词： SHIVKU-1 神经艾滋病中国恒河猴病理改变

SIVmac239毒株经静脉及直肠感染中国恒河猴的比较

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中国医学科学院学报 2008年第2期30卷 156-160,I0001页

作者：陈颂赖春辉吴小闲卢耀增卢葳中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所法国发展研究院145研究所中国部北京100730

目的研究猴免疫缺陷病毒SIVmac239毒株经静脉及直肠途径感染中国恒河猴后的生物学特性和症状表现，并比较由感染途径不同导致的差异，为该模型系统的应用提供依据。方法以SIVmac239毒株经静脉感染19只中国恒河猴，经直肠感染6只中国恒... 详细信息

目的研究猴免疫缺陷病毒SIVmac239毒株经静脉及直肠途径感染中国恒河猴后的生物学特性和症状表现，并比较由感染途径不同导致的差异，为该模型系统的应用提供依据。方法以SIVmac239毒株经静脉感染19只中国恒河猴，经直肠感染6只中国恒河猴，观察至感染后232或168d，比较其抗猴免疫缺陷病毒（SIV）特异性抗体滴度、CD4＋T细胞数量、血浆病毒载量、淋巴结病理改变以及临床表现的变化。结果所有猴均出现SIV抗体阳转。在静脉感染猴，感染后10d检测到SIV特异的IgM，而直肠感染猴始终未能检测到。在感染后168d，静脉感染猴的SIV特异性IgG的平均水平较直肠感染猴高10倍。在观察期内，直肠感染组的CIM＋T细胞数下降不如静脉感染组显著。所有猴的血浆SIV载量均在感染后10—14d达到高峰（10^7拷贝／ml左右），约2个月后降至平台期（10^3-10^4拷贝／ml）。2只静脉感染猴及1只直肠感染猴在感染后150—210d死于猴免疫缺陷综合征，呈快速进展型改变。结论 SIVmac239毒株静脉及直肠感染接种中国恒河猴，均可建立慢性的SIV感染，其特征与人感染人类免疫缺陷病毒后的改变相似，均可以作为良好的研究获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的动物模型，尤其有助于预防性或治疗性AIDS疫苗的研究。

关键词：猴免疫缺陷病毒 SIVmac239 中国恒河猴

SIVmac251感染中国恒河猴外周血免疫学及病毒学指标动态变化

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第3期32卷 193-198页

作者：何金洋符林春刘亚敏沈强邓文娣周映云广州中医药大学热带医学研究所 510405 广州中医药大学温病学教研室

目的观察中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒（simianimmunodeficiencyvirus，sIV）后病毒学和免疫学基本指标的变化规律，探讨中国恒河猴用于艾滋病模型时外周血白细胞（WBC）和CD4＋T细胞比例的标准。方法以SIVmac251感染36只中国恒河猴，... 详细信息

目的观察中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒（simianimmunodeficiencyvirus，sIV）后病毒学和免疫学基本指标的变化规律，探讨中国恒河猴用于艾滋病模型时外周血白细胞（WBC）和CD4＋T细胞比例的标准。方法以SIVmac251感染36只中国恒河猴，于感染前1天及感染后1—8周每周及感染后第10周分别采集外周静脉血，检测血常规、外周血淋巴细胞亚群和病毒载量。结果除WBC计数变化不显著外，其余检测指标均在感染后第1、2周时变化最为剧烈；WBC计数在（4—10）×10^6个／ml之间结合外周血CD4＋T细胞比例高于25％的可作为艾滋病模型的选猴标准。结论为应用中国恒河猴进行艾滋病研究提供了有益的信息。

关键词：中国恒河猴 SIVmac251 免疫学病毒学

中国恒河猴SIV急性感染期模型CD4细胞和MBL的变化

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中国艾滋病性病 2017年第3期23卷 181-185页

作者：陈剑涛熊思艺张清仲张苗苗周红燕符林春广州中医药大学热带医学研究所广州510405

目的研究中国恒河猴猴免疫缺陷病毒(SIV)mac239急性期感染模型外,周血CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)、淋巴结CD4细胞和血清甘露糖结合凝集素(MBL)的变化情况,探索感染早期固有免疫与适应性免疫的病理变化。方法选用5只健康中国恒河猴,静... 详细信息

目的研究中国恒河猴猴免疫缺陷病毒(SIV)mac239急性期感染模型外,周血CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)、淋巴结CD4细胞和血清甘露糖结合凝集素(MBL)的变化情况,探索感染早期固有免疫与适应性免疫的病理变化。方法选用5只健康中国恒河猴,静脉接种SIVmac239病毒株,分别于感染前、感染后2周、4周和10周检测血常规、血浆病毒载量,流式细胞仪分析外周血淋巴细胞亚群,免疫组织化学染色法观察淋巴结CD4细胞,酶联免疫吸附试验法检测血清MBL。结果感染后CD4细胞比值较感染前降低27.3%(P<0.05),CD8细胞比值较感染前升高44.3%(P<0.05),外周血CD4细胞绝对数下降23.6%,淋巴结CD4细胞上升14.9%,但是差异无统计学意义。血清MBL在感染后10周内持续下降至感染前水平的24.5%(P<0.01)。结论 SIV急性感染期固有免疫破坏显著,适应性免疫主要表现为体液免疫与细胞免疫的失衡。

关键词：甘露糖结合凝集素淋巴结细胞急性期中国恒河猴猴免疫缺陷病毒