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中华鳖源按蚊伊丽莎白菌的分离鉴定及药敏特性研究

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水生生物学报 2024年第4期48卷 683-693页

作者：王玉柱蒋巍巍刘文舒路晶晶唐艳强肖海红郭小泽李思明江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 四川农业大学动物科技学院成都611130

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究。在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆... 详细信息

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究。在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆后接种在LB培养基上,分离得到优势菌株EJX2021。对该菌株进行形态学观察、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定以鉴定菌株种类;进行人工回归感染、组织病理学观察、毒力因子分析和抗生素药物敏感性试验研究其致病能力和药物敏感性特征。从患病中华鳖中分离出一株优势菌株EJX2021,结合其表型特征、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定,确定其为按蚊伊丽莎白菌。在人工回归感染后,该菌株对中华鳖15d的LD50为1.62×10^(8)CFU/mL,95%置信区间为(0.78—3.37)×10^(8)CFU/mL;组织病理学观察肠道、肺脏、脾脏、肝脏等组织出现不同程度病变。毒力因子分析显示该菌株包含246个潜在毒力基因。药物敏感性试验显示该菌株为多重耐药菌株,对多西环素、米诺环素、卡那霉素、哌拉西林、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,对头孢曲松、头孢哌酮中度敏感,对新霉素等15种抗生素具有耐药性。研究证明了按蚊伊丽莎白菌是能够导致中华鳖病害的一种病原菌,为该细菌导致中华鳖病害的检测、鉴别和防治提供科学依据。

关键词：按蚊伊丽莎白菌分离鉴定药敏特性中华鳖

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中华鳖5个养殖群体肌肉营养成分分析与评价

广东海洋大学学报 2024年第2期44卷 54-61页

作者：吴聪聪姜群张晓君李伟纪利芹刘晓莉朱新平陈辰扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广东广州510380

【目的】分析和评价国内中华鳖(Pelodiscus sinensis)主要养殖群体的肌肉营养品质,为中华鳖品质性状遗传改良及相关配合饲料的研发提供依据。【方法】测定东莞、高要、萧山、郓城和余姚5个群体的肌肉常规营养成分、氨基酸和脂肪酸含量,... 详细信息

【目的】分析和评价国内中华鳖(Pelodiscus sinensis)主要养殖群体的肌肉营养品质,为中华鳖品质性状遗传改良及相关配合饲料的研发提供依据。【方法】测定东莞、高要、萧山、郓城和余姚5个群体的肌肉常规营养成分、氨基酸和脂肪酸含量,并进行营养评价。【结果】(1)各群体之间粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分存在显著差异(P中华鳖肌肉具有高蛋白(19.63%~21.42%)、低脂肪(0.37%~0.95%)的营养特点,可作为优质食物蛋白来源。不同养殖群体中华鳖的肌肉营养组成基本一致,但含量和营养价值存在差异,其中,萧山群体表现出较为突出的高蛋白、低脂肪营养特性,而东莞群体脂肪和脂肪酸质量分数较高,可能具有更好的风味和口感。

关键词：中华鳖养殖群体肌肉营养成分氨基酸脂肪酸

Sox8基因过表达诱导中华鳖ZW性腺的雄性分化

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水生生物学报 2024年第3期48卷 454-460页

作者：庄天依沈佳东楼灵媛王金霓孙伟肖玲葛楚天浙江万里学院动物性别与发育重点研究所宁波315100 浙江万里学院生物与环境学院宁波3151003 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8。通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50%的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含... 详细信息

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8。通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50%的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调。实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用。

关键词： Sox8 过表达雄性分化中华鳖

中华鳖IGF2和IGF2R基因克隆及其功能研究

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南方农业学报 2024年第4期55卷 1181-1193页

作者：曾丹李林严峰陈欣成吴成瑶李菁菁涂洋洋王晓清湖南文理学院生命与环境科学学院湖南常德415000 水产高效健康生产湖南省协同创新中心/水产生物资源与环境生态湖南省工程研究中心/常德市农业生物大分子研究中心湖南常德415000 湖南农业大学水产学院湖南长沙410128

【目的】探索胰岛素样生长因子2基因(IGF2)和胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)在中华鳖生长过程中发挥的作用,为揭示IGFs系统在中华鳖异速生长及两性生长差异中的作用机制打下基础。【方法】采用RACE克隆中华鳖IGF2和IGF2R基因c DNA序... 详细信息

【目的】探索胰岛素样生长因子2基因(IGF2)和胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)在中华鳖生长过程中发挥的作用,为揭示IGFs系统在中华鳖异速生长及两性生长差异中的作用机制打下基础。【方法】采用RACE克隆中华鳖IGF2和IGF2R基因c DNA序列,利用BioEdit、ExPASy、TMHMM Server v2.0、SignalP及SMART等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR分析IGF2和IGF2R基因在雌雄中华鳖不同组织、不同表型及不同性类固醇激素处理下的表达变化。【结果】中华鳖IGF2基因cDNA序列全长1180 bp,共编码222个氨基酸残基;IGF2蛋白相对分子量为24.84 kD,理论等电点(pI)为9.00,属于跨膜蛋白,含有1个IIGF结构域。中华鳖IGF2R基因cDNA序列全长8765bp,共编码2443个氨基酸残基;IGF2R蛋白相对分子量为271.92kD,pI为5.64,属于跨膜蛋白,含有14个重复的CIMR结构域和1个FN2结构域。基于IGF2和IGF2R氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示,中华鳖与龟鳖类的亲缘关系最近,与鱼类和两栖动物的亲缘关系相对较远。IGF2和IGF2R基因在中华鳖体内具有广泛的组织表达谱,IGF2基因在精巢中的相对表达量显著高于卵巢(P中华鳖生长快个体肝脏中的相对表达量显著高于生长慢个体,IGF2R基因的表达模式则相反。在雌二醇(E2)处理下,除雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量在注射6 h时显著升高外,IGF2和IGF2R基因在雌雄个体肝脏中的相对表达量整体上呈下降趋势;MT处理对雄性个体肝脏中IGF2基因的表达无显著影响(P>0.05),但在注射48 h后显著提高雌性个体肝脏中的IGF2基因相对表达量,且显著下调雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量。【结论】IGF2和IGF2R基因参与调控中华鳖性腺的发育及成熟,且IGF2R可能通过内化降解IGF2而对中华鳖的生长起负调控作用。此外,IGF2和IGF2R基因会通过下调表达量来响应外源激素的刺激,进而实现对中华鳖生长的调控。

关键词：中华鳖 IGF2基因 IGF2R基因生长差异性类固醇激素

sox9基因在中华鳖雄性性腺分化中的功能研究

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水产学报 2024年

作者：梁肖金琳李攀杨邦赛钱国英葛楚天孙伟浙江万里学院生物与环境学院浙江万里学院动物性别与发育重点研究所上海海洋大学水产与生命学院

为了探究sox9基因在中华鳖胚胎性腺性别分化中的功能，实验通过将构建的慢病毒sox9-shRNA干扰和过表达载体系统引入性别分化启动前的胚胎，从组织学和分子研究水平分析了sox9基因异常表达后性腺的性逆转情况。功能缺失实验结果显示，敲... 详细信息

为了探究sox9基因在中华鳖胚胎性腺性别分化中的功能，实验通过将构建的慢病毒sox9-shRNA干扰和过表达载体系统引入性别分化启动前的胚胎，从组织学和分子研究水平分析了sox9基因异常表达后性腺的性逆转情况。功能缺失实验结果显示，敲低sox9后的ZZ胚胎性腺外形和内部结构明显雌性化，生殖细胞呈现雌性分布模式，雄性特异性基因dmrt1和amh的mRNA表达显著降低，雌性特异性基因foxl2的mRNA表达则明显升高，DMRT1蛋白的表达信号几乎消失，FOXL2蛋白被激活大量表达，性腺发生了雄性向雌性完全性逆转（逆转率：87.9%）；功能获得实验结果显示，42.5%过表达sox9的ZW胚胎转向雄性分化方向，dmrt1和amh表达上升，foxl2表达下降，在性腺中同时检测到DMRT1和FOXL2蛋白的荧光信号，性逆转不彻底。上述研究表明，sox9是中华鳖早期睾丸形成的必需关键基因，参与调控雄性分化过程。

关键词： sox9基因性别分化性逆转雄性中华鳖

孵化湿度对胚胎期中华鳖裙边外部形态和胶原沉积的影响

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水产科学 2024年第3期43卷 445-452页

作者：傅凯琳陈培恒杨明康吴俊涛李彩燕浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315000

为探究孵化湿度对中华鳖营养品质的影响,采集5龄中华鳖所产的同批次受精卵[(3.05±0.05)g],在相对湿度65%和85%下于实验室全裸孵化箱中进行无接触式孵化,分别取18、20、22、24、26期胚胎各20枚,迅速解剖出裙边组织,用于荧光定量PCR分析... 详细信息

为探究孵化湿度对中华鳖营养品质的影响,采集5龄中华鳖所产的同批次受精卵[(3.05±0.05)g],在相对湿度65%和85%下于实验室全裸孵化箱中进行无接触式孵化,分别取18、20、22、24、26期胚胎各20枚,迅速解剖出裙边组织,用于荧光定量PCR分析测定胶原蛋白含量,并用天狼星红染色法进行组织学分析,研究2种孵化湿度对胚胎期中华鳖外部形态和胶原物质积累的影响。试验结果显示:随着胚胎发育,背甲指数(背甲质量/体质量)、裙边指数(裙边质量/体质量)、背甲比值(背甲长/体长)和裙边比值(体长/裙边宽)等性状总体上呈增加趋势。相对湿度85%下孵育的中华鳖胚胎在大多数发育阶段的外部形态特征性指标显著优于相对湿度65%(P中华鳖发育过程中胶原蛋白的沉积和相关优良性状的形成。试验结果可为中华鳖生产实践中改善孵化湿度调控裙边性状发育提供基础数据。

关键词：中华鳖裙边孵化湿度胶原蛋白

微塑料对中华鳖稚鳖形态、行为和生理特征的影响研究

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南京师大学报（自然科学版） 2024年第1期47卷 68-81页

作者：沈雯佳鲍亦然井木子陈炼高朔李宏南京林业大学生命科学学院江苏南京210037 生态环境部南京环境科学研究所江苏南京210042 南京师范大学生命科学学院江苏南京210023

微塑料是指直径小于5 mm的塑料碎片,较难降解,对生态系统具有潜在的危害.目前,关于微塑料对淡水水生生物的毒理效应研究大多集中于浮游动物、鱼类、甲壳类和双壳类等.本研究在实验室条件下评估中华鳖(Pelodiscus sinensis)在胚胎发育期... 详细信息

微塑料是指直径小于5 mm的塑料碎片,较难降解,对生态系统具有潜在的危害.目前,关于微塑料对淡水水生生物的毒理效应研究大多集中于浮游动物、鱼类、甲壳类和双壳类等.本研究在实验室条件下评估中华鳖(Pelodiscus sinensis)在胚胎发育期间,向孵化基质中添加不同浓度微塑料对中华鳖稚鳖的形态、行为、生理特征及生长的影响.结果表明,喂食不同浓度(0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L)的微塑料,对中华鳖稚鳖14 d龄、1月龄、3月龄和6月龄的形态指标(背甲和体重)和行为表现无显著影响.通过比较摄入不同浓度微塑料14 d的中华鳖稚鳖的肠道菌群组成,发现变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidota)和厚壁菌门(Firmicutes)是构成肠道菌群的核心菌群,多样性未发生显著变化,而摄入0.1 mg/L微塑料的中华鳖稚鳖肠道菌群的丰度显著降低.此外,摄入不同浓度的微塑料还会改变某些条件致病菌以及消化有关的菌群富集,如拟杆菌属(Bacteroides)、气单胞菌属(Aeromonas)、管道杆菌属(Cloacibacterium)等.本研究为评估微塑料对淡水爬行动物的毒性效应及微塑料对其潜在的生态毒理风险提供科学理论参考.

关键词：微塑料中华鳖形态行为肠道微生物

不同介质、温度对中华鳖胚胎发育与幼鳖形态特征及运动机能的影响

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云南农业大学学报（自然科学版） 2024年第4期39卷 38-44页

作者：左之良彭治桃田璐吴启藩李成高峰肖何威向劲湖南省水产原种场湖南长沙410153 湖南省水产科学研究所湖南长沙410153

【目的】探究介质和温度对中华鳖胚胎发育、初生幼鳖形态特征及运动机能的影响,优化孵化环境参数,为人工繁育和种质资源保护工作提供理论依据与技术参考。【方法】通过正交试验设置了3组温度(28、30、32℃)和3种介质(蛭石、沙子、无介... 详细信息

【目的】探究介质和温度对中华鳖胚胎发育、初生幼鳖形态特征及运动机能的影响,优化孵化环境参数,为人工繁育和种质资源保护工作提供理论依据与技术参考。【方法】通过正交试验设置了3组温度(28、30、32℃)和3种介质(蛭石、沙子、无介质),采用双因素方差分析温度和介质对中华鳖孵化率、孵化期、幼鳖质量、背甲长、背甲宽、背甲高和游泳速度的影响。【结果】随着温度的升高,孵化率显著升高(P鳖质量、背甲长和游泳速度均显著提升(P鳖质量、背甲长、背甲宽、背甲高和游泳速度均产生显著影响(P鳖质量和游泳速度有显著影响(P中华鳖孵化率最高,孵化期最短,孵出的幼鳖个体相对较大,并表现出较强的运动机能。

关键词：中华鳖温度介质胚胎发育交互作用

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鄱阳湖中华鳖裙边性状及形成机制研究

鄱阳湖中华鳖裙边性状及形成机制研究

作者：翟瑞祥南昌大学

学位级别：硕士

“裙边”是中华鳖(Pelodiscus sinensis)背甲外周组织的显著特征,常被视为衡量中华鳖种质状况的标准之一,不同品系中华鳖裙边的宽厚特征不同,实践上培育裙边更加宽厚的中华鳖品系一直是特种水产遗传育种领域的热门研究方向。鄱阳湖水系... 详细信息

“裙边”是中华鳖(Pelodiscus sinensis)背甲外周组织的显著特征,常被视为衡量中华鳖种质状况的标准之一,不同品系中华鳖裙边的宽厚特征不同,实践上培育裙边更加宽厚的中华鳖品系一直是特种水产遗传育种领域的热门研究方向。鄱阳湖水系中华鳖作为江西省的地方特有品系,其特点是产卵多且裙边宽,深受市场欢迎。本研究以鄱阳湖中华鳖为主要研究对象,以中华鳖“黄沙品系”和“日本品系”为参照,从形态学、生理组分和转录组三个层面分析探讨了鄱阳湖中华鳖裙边性状及形成机制。主要结果如下:1.三种品系中华鳖的生长性能研究为了评估鄱阳湖中华鳖、“黄沙品系”、“日本品系”三种品系中华鳖生长性能,本研究在3日龄、30日龄、300日龄和600日龄四个生长阶段,同等养殖条件下对这些品系进行了性状指标的持续跟踪测量与记录,并加以分析。结果确定了对它们的体重影响较大的性状主要与背、腹甲长有关,在3-30日龄阶段,三种品系的中华鳖体重均受背甲长的影响较大,而在300日龄阶段,三种品系的中华鳖体重主要受腹甲长的影响;鄱阳湖中华鳖、黄沙品系和日本品系3-600日龄的日均体重增长速度分别为1.667 g/d,2.201 g/d,1.761 g/d,鄱阳湖中华鳖生长速度相对较慢,而裙边宽度方面相较另外两品系呈现出明显的优势,特别是在成鳖阶段。2.中华鳖背甲脊组织观察及裙边结构差异研究为了研究中华鳖发育过程和生理组分差异,通过解剖观察和石蜡切片技术,对上述品系的胚胎发育过程以及裙边组织的形态和组成进行了详细比较研究。结果显示,这些品系中,胚胎发育进程基本同步,裙边均由背甲脊组织发育而来;在裙边的组织结构和成分上,结果也相似,裙边由被覆上皮和结缔组织构成,主要成分是胶原纤维和少量弹性纤维;而这些品系的胶原纤维形态、排列方式、密度存在一定差异。其中胶原纤维密度分别为:鄱阳湖中华鳖69.641±7.028%,黄沙品系65.333±7.407%和日本品系63.149±8.985%,但相互间未表现出显著差异。3.中华鳖裙边主要营养成分研究为了研究中华鳖裙边主要成分差异,对选取的三种中华鳖品系裙边组织进行了基础营养成分测定和胶原蛋白提取与检测。结果显示,它们的基础营养成分相近,差异主要表现在蛋白和脂肪含量上,其中,鄱阳湖中华鳖蛋白和脂肪含量分别为32.35±0.85%和0.21±0.08%,黄沙品系分别为30.79±1.40%和0.33±0.05%,日本品系分别为29.52±1.29%和0.35±0.06%;裙边胶原蛋白得率方面,分别为鄱阳湖中华鳖71.18±3.43%,黄沙品系63.36±1.54%和日本品系62.25±1.64%。鄱阳湖中华鳖裙边的蛋白质与胶原蛋白含量显著高于其他两个品系(P中华鳖裙边的主要成分为I型胶原蛋白,具有相同的三螺旋结构但微观结构等方面上存在差异。4.中华鳖裙边转录组学研究为深入发掘中华鳖裙边组织形成过程中的关键信号通路和基因,本研究针对鄱阳湖中华鳖胚胎期背甲脊组织和成鳖期裙边组织进行了转录组测序工作,对差异表达基因进行KEGG富集分析发现,显著富集在包括PI3K-Akt、MAPK和Wnt信号通路等多个信号通路中,这些信号通路参与调控细胞的增殖分化以及生长存活等多个生物学过程。结合已有研究,发现这些信号通路与中华鳖的裙边形成密切相关,随后本研究针对PI3K-Akt信号通路进行分析,富集到Fgf4、Fgf6、Igf1等多个在裙边形成中发挥着包括调控细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡以及细胞形态结构等关键作用的差异表达基因,可能在裙边形成中发挥调控背甲脊组织细胞增殖分化,最终转化为裙边组织等重要作用。

关键词：中华鳖裙边生长性能胶原蛋白转录组学