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无锡轻工大学学报（食品与生物技术） 2000年第4期19卷 319-321页

作者：张灏孙震承拥军无锡轻工大学食品学院江苏无锡214036

机体在大剂量、长时间摄取两歧双歧杆菌后才能在其血清中检出特异性抗体 ,而非正常寄居菌———沙门氏菌经口摄取后 ,机体在很短时间内就产生较高水平的特异性抗体 ,并维持较长的时间 .进一步的研究表明 ,在体外诱导脾细胞产生免疫应答... 详细信息

机体在大剂量、长时间摄取两歧双歧杆菌后才能在其血清中检出特异性抗体 ,而非正常寄居菌———沙门氏菌经口摄取后 ,机体在很短时间内就产生较高水平的特异性抗体 ,并维持较长的时间 .进一步的研究表明 ,在体外诱导脾细胞产生免疫应答的细胞数量上 ,双歧杆菌的数量是沙门氏菌的 2 0倍 .由此推论 ,两歧双歧杆菌经口服后具有较弱的免疫原性 .

关键词：两歧双歧杆菌免疫应答口服动物实验

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稀土元素对两歧双歧杆菌生长的影响

中国微生态学杂志 2001年第5期13卷 254-256页

作者：刘兰曹郁生黄筱萍洪亦武曹勇戴育成江西省科学院微生物研究所南昌330029 江西省医学院南昌330006

目的 :报道不同浓度稀土元素铈和镧 (1～ 10 0 0μg/ ml)对两歧双歧杆菌生长的影响。方法 :试管培养与连续厌氧培养法。结果 :当两种稀土元素浓度大于 30 0μg/ m l时 ,双歧杆菌的生长明显受到抑制 ,当稀土元素浓度在 10 0～ 2 0 0μg/ ... 详细信息

目的 :报道不同浓度稀土元素铈和镧 (1～ 10 0 0μg/ ml)对两歧双歧杆菌生长的影响。方法 :试管培养与连续厌氧培养法。结果 :当两种稀土元素浓度大于 30 0μg/ m l时 ,双歧杆菌的生长明显受到抑制 ,当稀土元素浓度在 10 0～ 2 0 0μg/ m l时 ,对双歧杆菌生长有轻微抑制 ,低浓度的稀土元素对双歧杆菌无刺激生长作用。稀土元素 (10 0μg/ ml)对厌氧连续培养的双歧杆菌同样有明显的抑制作用 ,随着稀土元素被洗脱 ,细胞的生长才逐渐缓慢恢复。试管培养中加入一定浓度稀土元素 (10 0μg/ m l) ,连续取样检查 ,也可观察到稀土元素对双歧杆菌的抑制情况。结论 :一定浓度稀土元素钅市和镧对双歧杆菌生长有促进作用。

关键词：稀土元素两歧双歧杆菌生长影响

苦豆籽粕-双歧杆菌合生元对肉鸡生产性能及肠道黏膜形态结构的影响

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中国兽医学报 2015年第3期35卷 497-506页

作者：王雪飞班慧王炼邸静杨斌杨英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古乌海市疾病预防控制中心内蒙古乌海016000 河南牧业经济学院河南郑州450011 宁夏银川市贺兰县农牧渔业局宁夏银川750200

将420只1日龄肉仔鸡随机分为6组,每组2个重复,每个重复35只,试验期为42d,试验将苦豆籽粕-双歧杆菌合生元混于肉仔鸡饲料中,每周龄末清晨7:00空腹称量体质量,计算平均日增重;结算饲料消耗量,计算平均日采食量;根据试验期增重量和耗料量,... 详细信息

将420只1日龄肉仔鸡随机分为6组,每组2个重复,每个重复35只,试验期为42d,试验将苦豆籽粕-双歧杆菌合生元混于肉仔鸡饲料中,每周龄末清晨7:00空腹称量体质量,计算平均日增重;结算饲料消耗量,计算平均日采食量;根据试验期增重量和耗料量,计算料肉比;分别于7、14、21、28、35、42日龄每组随机抽取10只剖杀,制作小肠各肠段组织切片,测量肠黏膜绒毛高度、隐窝深度和黏膜厚度。结果显示:苦豆籽粕-双歧杆菌合生元能显著提高肠黏膜绒毛高度、黏膜厚度和V/C值(绒毛高度/隐窝深度)、降低隐窝深度(P双歧杆菌合生元可以改善肉仔鸡的肠道组织结构的形态发育,从而提高肉鸡的生产性能。

关键词：苦豆籽粕两歧双歧杆菌合生元生产性能肠道黏膜

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葛粉双歧杆菌发酵饮料发酵条件的研究

食品科学 2009年第21期30卷 294-296页

作者：顾仁勇银永忠吉首大学化学化工学院食品科学与工程系湖南吉首416000

以两歧双歧杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌(1:1:1混合)为发酵菌种,采用单因素试验和正交试验对葛粉发酵饮料的发酵条件进行优化。优选出的发酵条件为:葛粉乳液中添加牛乳70%、葡萄糖1.5%、蔗糖5.0%、混合菌种接种量6.0%、发酵温度40... 详细信息

以两歧双歧杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌(1:1:1混合)为发酵菌种,采用单因素试验和正交试验对葛粉发酵饮料的发酵条件进行优化。优选出的发酵条件为:葛粉乳液中添加牛乳70%、葡萄糖1.5%、蔗糖5.0%、混合菌种接种量6.0%、发酵温度40℃、发酵时间10h。在此条件下产品发酵酸度为5.20%,活菌数7.14×107CFU/ml,口感良好。

关键词：两歧双歧杆菌葛粉发酵

苦豆籽粕—双歧杆菌合生元对AA+肉仔鸡肠道微生态系统影响的研究

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苦豆籽粕—双歧杆菌合生元对AA+肉仔鸡肠道微生态系统影响的研究

作者：邸静内蒙古农业大学

学位级别：硕士

为研发安全、绿色饲用微生态添加剂,本研究以内蒙古道地中药材苦豆子,在提取其主要药物成分苦参碱后所剩余的渣粕-苦豆籽粕,与两歧双歧杆菌作为本实验的主要材料。试验将苦豆籽粕与微胶囊化两歧双歧杆菌混合后添加于肉仔鸡饲料中,研究其... 详细信息

为研发安全、绿色饲用微生态添加剂,本研究以内蒙古道地中药材苦豆子,在提取其主要药物成分苦参碱后所剩余的渣粕-苦豆籽粕,与两歧双歧杆菌作为本实验的主要材料。试验将苦豆籽粕与微胶囊化两歧双歧杆菌混合后添加于肉仔鸡饲料中,研究其对AA肉仔鸡肠道内双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌数量的影响。从而为进一步开发新型微生态制剂提供理论依据。试验将1日龄420只AA肉仔鸡按体重随机分为6组,第1组为空白对照组,饲喂基础日粮;2-6组为试验组,第2组在基础日粮上添加0.02%双歧杆菌冻干菌粉,第3组基础日粮添加2%浓度的苦豆籽粕,第4、5、6组分别在基础日粮上添加0.5%、1.0%、2.0%浓度的合生元(苦豆籽粕+两歧双歧杆菌微胶囊)。整个试验期完全不含抗生素,每组从1日龄开始饲喂相应日粮,自由采食,自由饮水,试验期为42天。分别于7、14、21、28、35、42日龄每组随机抽取十只称重后,颈静脉放血致死后剖杀,取左侧盲肠,迅速冷冻于-80℃,分别用选择性培养基进行筛菌,并挑取菌落进行菌种鉴定;取盲肠内容物提取其总DNA并利用荧光定量PCR技术进行双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌量的测定。结果如下: 7日龄时,合生元各组对AA肉仔鸡肠道内的的双歧杆菌数有显著提高(P杆菌数的影响不明显(P>0.05);苦豆子粕组能够明显的抑制肠道内大肠杆菌的生长(P杆菌数量显著较对照组增加(P双歧杆菌数有显著提高(P杆菌数的影响不明显(P>0.05);各剂量组对大肠杆菌数量的影响不明显(P>0.05)。 21日龄时,双歧杆菌组、1%合生元组和2%合生元组对AA肉仔鸡肠道内的的双歧杆菌数有显著提高(P杆菌有明显的提高作用(P杆菌数量有明显的抑制作用(P杆菌数的影响不明显(P>0.05);苦豆子粕组大肠杆菌的数量较对照组显著降低(P双歧杆菌组、1%合生元组和2%合生元组对AA肉仔鸡肠道内的的双歧杆菌数有显著提高(P双歧杆菌组、0.5%合生元组和1%合生元组对乳酸杆菌有明显的提高作用(P杆菌数量均有增加(P双歧杆菌数量提高,但并不显著(P>0.05);双歧杆菌组、1%合生元组和2%合生元组对乳酸杆菌有明显的提高作用(P杆菌数量均有增加(P双歧杆菌合生元能够提高鸡肠道内双歧杆菌和乳酸杆菌的数量,同时能够降低大肠杆菌的数量。其中不同的剂量对这三种菌数量的改变也不同,1%的苦豆籽粕-双歧杆菌合生元效果最好,对肉鸡肠道内的微生态平衡有着积极的作用。 2通过对肉仔鸡肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌进行分离鉴定,表明肉仔鸡肠道内的双歧杆菌主要有短双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌;乳酸杆菌主要有路乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌和鸡乳杆菌。

关键词：苦豆籽粕两歧双歧杆菌合生元肠道内环境微生态系统

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内源乳化法制备双歧杆菌微胶囊的研究

内源乳化法制备双歧杆菌微胶囊的研究

作者：王庆卫江南大学

学位级别：硕士

双歧杆菌，以其具有提高人体机能和健康水平的保健功能，被广泛应用于食品、医药等领域。但在实际应用过程中，双歧杆菌对外界的不利环境极为敏感，特别是进入消化道后难以承受胃部的酸性环境和小肠上部的高胆盐环境，限制了其生理作用... 详细信息

双歧杆菌，以其具有提高人体机能和健康水平的保健功能，被广泛应用于食品、医药等领域。但在实际应用过程中，双歧杆菌对外界的不利环境极为敏感，特别是进入消化道后难以承受胃部的酸性环境和小肠上部的高胆盐环境，限制了其生理作用的发挥。针对此问题，本课题建立了双歧杆菌微胶囊包埋体系，旨在提高双歧杆菌的稳定性及耐受胃酸、胆盐等方面的能力。首先，以海藻酸钠为壁材，采用内源乳化法制备两歧双歧杆菌微胶囊。以平均粒径、粒径分散度和包埋产率为指标，采用单因素优化，确定了载有两歧双歧杆菌的海藻酸钠微胶囊的制备条件：洗涤介质为1%（v/v）的Tween80溶液，乳化剂Span80添加量为油相体积的1%（v/v），水相和油相体积比30:100，搅拌速度400r/min，碳酸钙和海藻酸钠的质量比7.5:40，冰醋酸和碳酸钙的摩尔比3.5:1。该条件下制得的微胶囊呈规整的球形结构，平均粒径为116μm，粒径分散度为0.95，包埋产率为89.8%。与未微胶囊化的两歧双歧杆菌相比，微胶囊化使其在模拟胃液和连续的胃肠液处理过程中存活量分别提高了2个和3个对数值;经模拟肠液处理60min，微胶囊全部崩解，具有良好的肠溶性;4oC储藏4周后，微胶囊中活菌数仍能保持在6.15Log cfu/g，具有良好的储藏稳定性。针对海藻酸钠微胶囊对两歧双歧杆菌有限的保护效果，采用壳聚糖、乳清蛋白和海藻酸钠对微胶囊进行二次包衣，研究三种包衣材料对两歧双歧杆菌包埋效果的影响。研究发现，相对于单纯的海藻酸钠微胶囊，经壳聚糖、乳清蛋白和海藻酸钠二次包衣的微胶囊粒径分别增加了39，56和10μm。同时三种微胶囊的包埋产率均维持在50%左右，相互之间无显著性差异。在模拟胃液的处理过程中，壳聚糖的保护效果最好，经模拟胃液消化120min后，两歧双歧杆菌的存活量仍能维持在5.21Log cfu/g;在连续的模拟胃肠液的处理过程中，壳聚糖包衣的微胶囊显著提高了两歧双歧杆菌的存活量，经模拟肠液消化60min和120min后，存活量分别为5.65Log cfu/g和5.42Log cfu/g;三种微胶囊在模拟胃液中均能保持完整的球形结构，而在模拟肠液中能够溶解，将两歧双歧杆菌释放于肠道中，具有良好的肠溶性。考察了壳聚糖分子量、浓度及pH值对载有两歧双歧杆菌的壳聚糖-海藻酸钠微胶囊胃液耐受性及肠溶性的影响。结果表明，当壳聚糖分子量为400kDa，浓度为0.4%，pH值为5.0时制得的微胶囊经模拟胃液消化120min后，两歧双歧杆菌的存活量为5.53Logcfu/g，经模拟肠液消化4h后两歧双歧杆菌的活菌数不再发生变化，达到完全释放。通过扫描电镜（SEM）对壳聚糖-海藻酸钠微胶囊的表面结构进行观察，结果发现将壳聚糖引入海藻酸钙体系后，在其表面形成致密的壳聚糖-海藻酸钠聚电解质复合膜，形成“核壳”结构，使得微胶囊表面更为致密、裂纹分布更少，从而起到了很好的保护作用。通过傅立叶变换红外光谱仪（FTIR）和X-射线衍射仪（XRD）等分析方法，确定了壳聚糖与海藻酸钠之间的静电相互作用为载有两歧双歧杆菌的壳聚糖-海藻酸钠微胶囊形成的主要驱动力。为了进一步提高微胶囊对两歧双歧杆菌的保护效果，采用抗性淀粉作为辅助壁材制备壳聚糖-海藻酸钠/淀粉微胶囊。结果显示，淀粉的加入并没有提高微胶囊对两歧双歧杆菌的保护效果。将制得的微胶囊添加到酸奶体系中，结果表明微胶囊的加入对酸奶的pH值及可滴定酸度（oT）影响较小，但其对两歧双歧杆菌具有很好的保护效果，4oC储藏21天后存活量维持在8.04Log cfu/g。

关键词：两歧双歧杆菌微胶囊内源乳化法海藻酸钠壳聚糖

实时荧光定量PCR技术分析CGMP对小鼠肠道双歧杆菌种属结构的影响

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实时荧光定量PCR技术分析CGMP对小鼠肠道双歧杆菌种属结构的影响

作者：李俊洁天津商业大学

学位级别：硕士

双歧杆菌是哺乳动物肠道中一类重要的原籍菌群,具有多种生理功能:营养功能,调节肠道微生物的组成,抑制有害菌群的生长,对肠道的免疫调节作用,还具有防便秘、保护肝脏及抗衰老等功能。由于其众多生理功效,人们给予了双歧杆菌更多的关注... 详细信息

双歧杆菌是哺乳动物肠道中一类重要的原籍菌群,具有多种生理功能:营养功能,调节肠道微生物的组成,抑制有害菌群的生长,对肠道的免疫调节作用,还具有防便秘、保护肝脏及抗衰老等功能。由于其众多生理功效,人们给予了双歧杆菌更多的关注。酪蛋白糖巨肽(CGMP)是一种功能性多肽,已被证实具有多种生理功能。为了深入研究多肽CGMP对小鼠肠道双歧杆菌种属的作用,我们选择健康的BALB/c雄性小鼠作为实验动物,将其分为5个组:安慰组(每天早上灌胃0.2mL的生理盐水)、CGMP低中高3个剂量组(每天早上分别灌胃0.2mL不同浓度的CGMP)、对照组(既不灌胃生理盐水,也不灌胃CGMP,正常饮食),灌胃周期为2周。分别在灌胃的第0、3、5、7、9、11、13、15、21天取各组小鼠的新鲜粪便,进行DNA的提取。在g-Bifid-F/g-Bifid-R、Bif164-f/Bif662r、lm26/Lm3r、B350-1/B350-2、B230-1/B230-2共5对引物中,选择一对作为检测小鼠肠道双歧杆菌的合适引物。用实时荧光定量PCR技术结合选择的引物对各组小鼠肠道内的双歧杆菌属进行定性定量检测,并用普通PCR结合选择的9对引物对小鼠肠道中双歧杆菌各种进行检测。研究结果显示:(1)大量参考文献,并经过实验分析,最终确定lm26/Lm3r作为检测小鼠肠道双歧杆菌属的引物;(2)低剂量组与高剂量组的CGMP对小鼠肠道中的双歧杆菌没有明显的作用,且与安慰组和日食组相比不存在显著差异(P>0.05);而中剂量组的CGMP对小鼠肠道中的双歧杆菌具有促进作用,且在灌胃的第11天双歧杆菌的数量达到最大值,与安慰组和日食组相比存在显著性差异(P双歧杆菌种引物中,只有两歧双歧杆菌出现了特异性片段,其他8种均未出现阳性信号。

关键词：双歧杆菌实时荧光定量PCR 酪蛋白糖巨肽 16S rRNA lm26/Lm3r 两歧双歧杆菌

双歧杆菌的快速鉴别方法研究-属、种特异性引物的设计与验证

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双歧杆菌的快速鉴别方法研究-属、种特异性引物的设计与验证

作者：郑雨茜武汉轻工大学

学位级别：硕士

人类的肠道菌群及其代谢物在不仅在预防和干预治疗肠易激综合征、糖尿病、肥胖症等慢性代谢和免疫系统疾病方面均具有有益的效果,甚至与神经系统疾病密切相关,这进一步刺激相关益生菌产品市场的繁荣。而双歧杆菌(Bifidobacterium)作为... 详细信息

人类的肠道菌群及其代谢物在不仅在预防和干预治疗肠易激综合征、糖尿病、肥胖症等慢性代谢和免疫系统疾病方面均具有有益的效果,甚至与神经系统疾病密切相关,这进一步刺激相关益生菌产品市场的繁荣。而双歧杆菌(Bifidobacterium)作为益生菌中的大热门,国内外均出现大量相关双歧杆菌产品包括:食品、保健品、宠物食品、饲料产品等,但仍然缺乏在各方面均准确可靠的鉴定方法。面对日益火爆的益生菌市场需求和多元化产品,我们目前的技术跟不上实际工作需求,急需完善相关技术和检验标准,所以本研究的重点是鉴别双歧杆菌属及我国2010年印发的《可用于食品的菌种名单》中该属内6个种的快速准确鉴定方法。以源自广东省微生物菌种保藏中心的6株标准株(两歧双歧杆菌*** GDMCC 1.1256、长双歧杆菌婴儿亚种*** *** GDMCC1.1258、长双歧杆菌*** GDMCC 1.248、青春双歧杆菌*** GDMCC 1.278、动物双歧杆菌*** GDMCC 1.169、短双歧杆菌*** GDMCC 1.206)为试材,以看家基因(tuf、gro EL、atp D)为目的片段用软件Primer Premier5设计了十余对特异性引物(p1-p14),之后对以上所设计出的引物进行特异性筛选;用这14对特异性引物,对受试菌株6个标准株及实验室分离或保存的乳酸菌为主的大量标准株和分离株,提取DNA进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增,以验证这些引物的属种特异性。本研究主要结果如下:(1)基于双歧杆菌核心基因gro EL所设计的的特异性引物p7,在所有双歧杆菌6个种的标准株均具有显著扩增条带,而乳酸菌等其他益生菌,还有与其生态位相似的肠杆菌类微生物均无扩增,证实该引物适合快速鉴别区分双歧杆菌属与其他属微生物;(2)tuf基因的特异性引物p1仅动物双歧杆菌GDMCC 1.206产生586bp的特异性扩增条带,其他双歧杆菌属内5个种的标准株均无扩增,具有鉴别属内动物双歧杆菌种的特异性;p2引起青春双歧杆菌的特异性扩增,p4可以得到长双歧杆菌其中包括长双歧杆菌婴儿亚种的特异性扩增,p5,p6分别引两歧双歧杆菌、短双歧杆菌特异性扩增,结果显示通过这种分析方法,所设计的特异性引物可将双歧杆菌鉴定到属、种的水平,且结果稳定,特异性好。本研究建立双歧杆菌属及我国2010年印发的《可用于食品的菌种名单》中该属内6个种的快速准确鉴定的PCR方法,结果显示该方法从基因水平可在一定程度上提高双歧杆菌的鉴别效率,提供一种高效、低成本的分析方法。

关键词：双歧杆菌属动物双歧杆菌青春双歧杆菌长双歧杆菌短双歧杆菌两歧双歧杆菌长双歧杆菌婴儿亚种属种特异性引物 Primer Premier5 看家基因tuf、groEL、atpD

两株潜在益生菌拮抗幽门螺杆菌的作用机制研究及其乳品工艺初探

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两株潜在益生菌拮抗幽门螺杆菌的作用机制研究及其乳品工艺初探

作者：郭怡麟南昌大学

学位级别：硕士

幽门螺杆菌(Helicobecter pylori)可引发诸多消化道疾病,包括胃溃疡甚至胃癌,被世界卫生组织(WHO)归为I类致癌因子。针对清除幽门螺杆菌的标准克拉霉素三联治疗法在1996年被提出并广泛应用,但也逐渐引发了幽门螺杆菌难以根除、抗药性升... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobecter pylori)可引发诸多消化道疾病,包括胃溃疡甚至胃癌,被世界卫生组织(WHO)归为I类致癌因子。针对清除幽门螺杆菌的标准克拉霉素三联治疗法在1996年被提出并广泛应用,但也逐渐引发了幽门螺杆菌难以根除、抗药性升高、发生不良反应等问题。诸多研究表明,益生菌具有减弱抗菌药副作用并调节消化道微生态平衡等多种功能,能够辅助治疗幽门螺杆菌引发的疾病,对其干预幽门螺杆菌感染的研究受到学术界以及产业界的广泛关注。本研究选取经过相关益生性评价的两株潜在益生菌菌株:植物乳杆菌ZDY2013(Lactobacillus plantarum ZDY2013)及两歧双歧杆菌WBIN03(Bifidobacterium bifidum WBIN03),分析和评价二者拮抗抑制幽门螺杆菌的机制,并研究其作为益生菌食品在乳品中的应用,主要研究结果如下:从细胞形态学角度及生理学角度考察两株潜在益生菌对幽门螺杆菌的抑制作用。ZDY2013和WBIN03单菌及二者混合菌均能显著降低幽门螺杆菌SS1的尿素酶活性(P两株菌发酵上清液处理后的幽门螺杆菌细胞形态均发生变化,完整性受到影响。经过分时段共培养活菌计数实验确定发酵上清液中主要抑菌物质为代谢产物中的有机酸;通过高效液相色谱法测定出,两株菌可通过产生乳酸、乙酸对幽门螺杆菌的生长产生抑制作用。从非特异性及特异性粘附角度共同探究ZDY2013和WBIN03拮抗幽门螺杆菌对人胃腺癌细胞(AGS细胞系)粘附与相关细胞因子的相对表达水平的影响。通过非特异性粘附实验发现,二者自聚性均良好,4 h的自聚百分比分别达到36.20%、43.78%;ZDY2013疏水百分比达到40.62%,显著高于WBIN03的22.72%(P两株菌均可通过竞争、替代、排阻三种模式有效抑制幽门螺杆菌的粘附,其中以竞争方式效果最好,WBIN03与ZDY2013的抑制率分别高达74.26%、54.46%。此外,通过q-PCR分析得出,经WBIN03、ZDY2013及二者混合菌液处理后,TNF-α相对表达水平与幽门螺杆菌处理组相比均显著下降(P杆菌处理组的TNF-α相对表达水平分别是潜在益生菌处理组与预处理组的1.67倍、7.95倍、21.73倍、7.94倍、12.37倍和16.78倍。由此,ZDY2013和WBIN03可有效拮抗幽门螺杆菌SS1粘附于人胃腺癌细胞,并调节其诱导产生的相关细胞因子相对表达水平。以发酵乳pH、粘度、活菌数及保藏期内的活菌数变化这四项指标作为综合评判标准,利用ZDY2013研制发酵乳产品。经测定,按1.5%比例接种,奶粉浓度15%,发酵温度42℃,发酵时间11 h为最适工艺条件。

关键词：幽门螺杆菌植物乳杆菌两歧双歧杆菌拮抗发酵乳