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PLXDC2调控丝状伪足形成促进胃癌侵袭转移的机制研究

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陆军军医大学学报 2022年第8期44卷 774-781页

作者：吴彬王俊杰任志祥刘佳佳钱锋陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军普通外科中心微创胃肠外科中心重庆400038

目的观察PLXDC2(plexin-domain containing 2)对胃癌侵袭转移的作用,并探讨其机制。方法收集TCGA-STAD数据库中胃癌患者资料,统计分析PLXDC2表达与胃癌临床病理参数及患者预后的关系。构建PLXDC2敲低/过表达胃癌细胞,用Matrigel-trans... 详细信息

目的观察PLXDC2(plexin-domain containing 2)对胃癌侵袭转移的作用,并探讨其机制。方法收集TCGA-STAD数据库中胃癌患者资料,统计分析PLXDC2表达与胃癌临床病理参数及患者预后的关系。构建PLXDC2敲低/过表达胃癌细胞,用Matrigel-transwell侵袭实验和小鼠腹膜转移模型评估PLXDC2对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。Western blot、免疫荧光检测PLXDC2在胃癌中发挥作用的潜在机制。结果 PLXDC2在胃癌组织中高表达(P丝状伪足的形成。结论 PLXDC2通过调控丝状伪足的形成促进胃癌细胞的侵袭转移,可作为胃癌潜在的预后标志物和治疗靶点。

关键词： PLXDC2 胃癌转移丝状伪足

子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其通过Rac1调控子宫颈癌细胞丝状伪足的形成

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临床与实验病理学杂志 2022年第7期38卷 783-788页

作者：木叶斯尔·买买提聂磊徐梦伟吕单单王伟旭吴姝言林晨新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830017 新疆医科大学第六附属医院乌鲁木齐830002 新疆医科大学第一临床医学院乌鲁木齐830017 新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830017

目的探讨子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其临床意义,探究miR-101通过调控靶基因Rac1在子宫颈癌细胞丝状伪足形成中的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测18例子宫颈癌患者和20例健康体检者血清中miR-101的表达量。采用qRT-PCR法检测正... 详细信息

目的探讨子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其临床意义,探究miR-101通过调控靶基因Rac1在子宫颈癌细胞丝状伪足形成中的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测18例子宫颈癌患者和20例健康体检者血清中miR-101的表达量。采用qRT-PCR法检测正常对照组、NC mimic组、miR-101 mimic组子宫颈癌SiHa细胞内miR-101的表达水平,并验证其转染效率。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-101与Rac1的靶向关系,并通过Western blot、qRT-PCR和免疫荧光实验检测Rac1 mRNA和蛋白表达水平。miR-101 mimic与Rac1 mimic共转染至SiHa细胞后电镜下观察丝状伪足的形成,罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察F-actin的表达。结果miR-101在子宫颈癌血清(0.54±0.06)和细胞(0.93±0.03)中低表达(P丝状伪足数减少(39±3)(P丝状伪足形成(57±3)(P丝状伪足的形成。

关键词：子宫颈肿瘤 miR-101 Rac1 丝状伪足

人源Krt5促进斑马鱼成纤维细胞丝状伪足形成和伤口愈合

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2023年第3期44卷 227-237页

作者：陈凯星尉菲菲吴文惠严继舟上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海海洋大学食品学院上海201306 上海海洋大学海洋生物系统和神经科学研究所上海201306

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察K... 详细信息

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化;细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力;转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核,在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜;过表达Krt5增加鬼笔环肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成,并加快细胞迁移愈合;转录组分析显示,Krt5明显增加Rac2/Rhov、NF-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录,降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录,同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致;IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b,Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足,重塑细胞因子受体结构与巨噬细胞极化因子的相互作用。

关键词：角蛋白5(Krt5) mRNA 巨噬细胞极化因子丝状伪足 Myh9b Myh10 斑马鱼成纤维细胞

一种基于磁性微珠DNA和丝状伪足拉伸及扫描成像的方法

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一种基于磁性微珠DNA和丝状伪足拉伸及扫描成像的方法

作者：曾秋灵华南理工大学

学位级别：硕士

生物分子和细胞器的结构和形态通常会因机械拉伸或刺激而发生变化,这些变化和反应会进一步触发机械化学耦合或信号转导。捕捉这些细微变化和反应对于揭示生物反应机制具有重要意义。近年来,单分子技术已经成为研究单个生物分子力学性质... 详细信息

生物分子和细胞器的结构和形态通常会因机械拉伸或刺激而发生变化,这些变化和反应会进一步触发机械化学耦合或信号转导。捕捉这些细微变化和反应对于揭示生物反应机制具有重要意义。近年来,单分子技术已经成为研究单个生物分子力学性质和分子间相互作用机制的有力工具之一。单分子成像技术能够通过操纵单个分子来观察其结构和形态的变化,然而现阶段的技术大多需要一些复杂的样品前处理方法或处理设备。本论文开发了一种操作简单且无需荧光标记的方法,用于观察拉伸后的单分子精细结构。论文主要分两个部分,第一部分是对DNA分子拉伸和成像的实验:首先构建底板-DNA分子-磁珠的拉伸体系,在磁场中通过磁珠拉伸DNA;经过样品前处理,再用扫描电子显微镜(SEM)观察样品。使用磁镊设备优化单分子连接条件,使用三种不同粒径的磁珠研究磁珠粒径和拉伸DNA可见长度的相关性。第二部分是对细胞上的丝状伪足拉伸和成像的实验:首先在磁珠表面孵育GRGDNP多肽,让磁珠与Jurkat细胞孵育结合形成玫瑰花结;在玻璃底板孵育相同的多肽使细胞粘附在基底上,通过细胞与磁珠上多肽的结合,移动永磁铁操控磁珠从细胞上膜基部拉出微米级别的丝状伪足,并在SEM下观察。使用微管吮吸技术确认多肽GRGDNP与Jurkat细胞之间的有效结合作用,并初步研究不同实验条件(磁力、多肽浓度、磁珠-细胞数量比)下伪足的生长情况。根据SEM的拍摄结果显示,拉伸后的DNA分子沿磁场方向排列成近似直线状,拉伸后的DNA长度与磁珠粒径大小相关,磁珠粒径越大,DNA可见长度也越长,建立磁珠粒径与DNA可见长度的关系式。细胞实验中,使用微管吮吸技术得到一定时间内GRGDNP多肽与Jurkat细胞上的粘附率,相比对照组得出多肽与Jurkat细胞之间的有效结合,该结合可用于构建底板-细胞-磁珠的拉伸体系。随着拉伸时间延长丝状伪足逐渐被拉长成直线状细丝,最长甚至可达41.3μm,并且在一定条件下随着GRGDNP多肽浓度、磁力、磁珠-细胞数量比的增大,丝状伪足的长度也初步显示出随之增长的趋势。该方法无需构建复杂的功能化表面,可用可控的磁力拉伸或扭转单分子后,以纳米级别的分辨率显示长达数百微米的分子结构。同时,该方法可帮助研究生物分子的结构与功能关系,对于在无法使用衍射的情况下的相关机械生物学和细胞生物学的研究给予一些启示。

关键词： DNA 丝状伪足扫描电子显微镜拉伸成像

miR-101-3p-Rac1/Cdc42在宫颈癌细胞丝状伪足形成中的调控作用研究

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miR-101-3p-Rac1/Cdc42在宫颈癌细胞丝状伪足形成中的调控作用研究

作者：木叶斯尔·买买提新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨宫颈癌患者血清mi R-101-3p的表达及其临床意义,以及mi R-101-3p靶向Ras相关C3肉毒素底物(Rac1)在宫颈癌细胞丝状伪足形成中的调控作用。方法:1.采用q RT-PCR法检测30例宫颈癌患者和30例健康体检者血清mi R-101-3p的表达量;2.... 详细信息

目的:探讨宫颈癌患者血清mi R-101-3p的表达及其临床意义,以及mi R-101-3p靶向Ras相关C3肉毒素底物(Rac1)在宫颈癌细胞丝状伪足形成中的调控作用。方法:1.采用q RT-PCR法检测30例宫颈癌患者和30例健康体检者血清mi R-101-3p的表达量;2.上调mi R-101-3p后采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-101-3p与Rac1的靶向关系、通过Western-blot、q RT-PCR和免疫荧光法检测Rac1的表达水平;3.通过si RNA、免疫共沉淀和免疫荧光法检测Rac1与Cdc42蛋白的相互作用;4.采用Cdc42活性抗体检测试剂盒检测Cdc42蛋白活性;Western-blot、q RT-PCR法检测Cdc42下游信号通路蛋白NWASP、Arp2/3的表达水平及磷酸化水平;通过免疫荧光和激光共聚焦显微镜观察F-actin在细胞内聚合情况、采用扫描电镜观察各组细胞丝状伪足情况。结果:1.q RT-PCR检测结果显示:与健康体检者组相比,宫颈癌患者组血清mi R-101-3p表达明显降低(P0.05);免疫荧光和共聚焦显微镜观察:相同激发光下,与NCmimic组相比,mi R-101-3pmimic组F-actin蛋白荧光表达降低,丝状伪足明显减少(P丝状伪足明显增多(P丝状伪足数减少(P丝状伪足数无明显变化(P>0.05)。结论:1.血清mi R-101-3p水平可以作为判断宫颈癌预后的备选分子指标,但还需今后扩大样本量和补充随访资料进一步研究。2.mi R-101-3p通过靶向Rac1以及Cdc42及其下游细胞骨架信号通路调控宫颈癌细胞丝状伪足的形成。

关键词： miRNA 宫颈癌 Rac1 Cdc42 丝状伪足

二甲双胍通过作用丝状伪足抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移的研究

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中华转移性肿瘤杂志 2022年第4期05卷 326-330页

作者：马晓梅缪国英刘健吴慧芳王建凯王琴蔡宏懿甘肃省人民医院妇产科兰州730000 甘肃省人民医院放疗科兰州730000

目的探讨二甲双胍对宫颈癌细胞侵袭、迁移能力以及丝状伪足形成的影响。方法实验细胞(Hela)分为对照组和二甲双胍处理组。利用CCK8法检测细胞增殖;流式法检测细胞周期和凋亡;利用Transwell和划痕实验法检测细胞侵袭和迁移能力;用异硫氰... 详细信息

目的探讨二甲双胍对宫颈癌细胞侵袭、迁移能力以及丝状伪足形成的影响。方法实验细胞(Hela)分为对照组和二甲双胍处理组。利用CCK8法检测细胞增殖;流式法检测细胞周期和凋亡;利用Transwell和划痕实验法检测细胞侵袭和迁移能力;用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽染色细胞骨架,观察二甲双胍对HeLa细胞丝状伪足形成的影响。结果10 mmol/L的二甲双胍处理HeLa细胞24 h时,不会抑制细胞增殖,对细胞周期分布和细胞凋亡率均无影响(P>0.05)。Transwell和划痕实验结果证实二甲双胍对HeLa细胞的侵袭、迁移能力均有抑制作用(P丝状伪足的数量和长度。结论10 mmol/L的二甲双胍处理HeLa细胞24 h时可显著抑制其侵袭和迁移能力,机制在于抑制了宫颈癌细胞丝状伪足的形成。

关键词：二甲双胍侵袭和迁移丝状伪足宫颈癌细胞

白癜风发病特点临床研究及肌球蛋白X对人角质形成细胞丝状伪足形成的影响

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白癜风发病特点临床研究及肌球蛋白X对人角质形成细胞丝状伪足形...

作者：李乃浩大连医科大学

学位级别：硕士

目的：进行白癜风发病特点临床研究，并探讨肌球蛋白Ⅹ对人角质形成细胞丝状伪足形成的影响。方法：1．通过白癜风临床观察表对白癜风的发病特点进行临床研究。2．借助小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）介导的RNA干扰（RNAinte... 详细信息

目的：进行白癜风发病特点临床研究，并探讨肌球蛋白Ⅹ对人角质形成细胞丝状伪足形成的影响。方法：1．通过白癜风临床观察表对白癜风的发病特点进行临床研究。2．借助小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）介导的RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术，采用MyoⅩ基因siRNA转染处理HaCat细胞，并以RT-PCR和Western印迹方法观察转染处理前后HaCat细胞中MyoⅩ基因的mRNA和蛋白水平的变化。3．扫描电镜观察MyoⅩ基因siRNA转染处理前后HaCat细胞丝状伪足的形态特征的变化。结果：1．200例白癜风患者的临床观察中，86%患者都伴有微量元素的缺乏，其中以铜、硒缺乏为多。2．所设计的siRNA能有效下调MyoⅩ基因mRNA及蛋白表达水平。3．扫描电镜观察siRNA转染下调MyoⅩ基因表达后HaCat细胞丝状伪足数量减少。结论：1．白癜风的发病与微量元素的缺乏相关。2．MyoⅩ参与HaCat细胞的丝状伪足的形成过程，抑制MyoⅩ在HaCat细胞中的表达，可以减少HaCat丝状伪足的形成。

关键词：白癜风肌球蛋白Ⅹ（MyoⅩ）丝状伪足 HaCat细胞

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细胞内扩散动力学与胞内空间维度的关系

北京师范大学学报(自然科学版) 2023年第5期59卷 758-762页

作者：高博周宇萱张明丽李辉北京师范大学系统科学学院非平衡系统研究所北京100875

扩散对于细胞内生物分子的运输至关重要,是各种生命过程的物理基础.由于细胞内部微环境的复杂性,其内部生物大分子的扩散呈现出异常扩散、空间异质性、各向异性等新奇动力学特性.然而,细胞内扩散动力学与胞内微环境空间维度之间的关系... 详细信息

扩散对于细胞内生物分子的运输至关重要,是各种生命过程的物理基础.由于细胞内部微环境的复杂性,其内部生物大分子的扩散呈现出异常扩散、空间异质性、各向异性等新奇动力学特性.然而,细胞内扩散动力学与胞内微环境空间维度之间的关系并不清楚.利用活细胞单分子荧光跟踪技术研究了细胞内量子点探针的扩散,定量分析了细胞内准二维扩散和丝状伪足内准一维扩散的动力学特征.研究发现相比于细胞内的准二维扩散,丝状伪足内的扩散速度更快,且扩散加速现象与丝状伪足的直径成反比,表明丝状伪足提供了一种更加有效的胞内物质运输途径.本研究不仅阐明了细胞内扩散动力学与胞内空间维度的关系,而且揭示了细胞通过亚细胞结构调控生物大分子运输的复杂机制.

关键词：扩散空间维度丝状伪足单分子跟踪

KCTD12缺失促进Rac1依赖性的宫颈癌细胞转移

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KCTD12缺失促进Rac1依赖性的宫颈癌细胞转移

作者：薛美江西农业大学

学位级别：硕士

研究目的:宫颈癌早期肿瘤细胞的转移仍然是宫颈癌复发的主要原因。然而,其作用的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究寻找宫颈癌转移和复发的关键分子标志物,并且为降低宫颈癌术后复发率和死亡率寻求新的突破口。方法:前期研究发现,KCTD12... 详细信息

研究目的:宫颈癌早期肿瘤细胞的转移仍然是宫颈癌复发的主要原因。然而,其作用的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究寻找宫颈癌转移和复发的关键分子标志物,并且为降低宫颈癌术后复发率和死亡率寻求新的突破口。方法:前期研究发现,KCTD12(钾通道四聚化结构域)基因表达与宫颈癌的临床分期和淋巴转移呈负相关。进一步的研究表明,阻断KCTD12可促进宫颈癌细胞的体内外转移,同时增加宫颈癌细胞丝状伪足的密度和长度。然后,研究者通过差异蛋白质组学筛选发现,KCTD12缺失后,肌动蛋白丝生物过程中动力转换机制RHO家族蛋白(RHOA、RAC1、CDC42)蛋白水平发生变化,后续对其RHO家族蛋白的活性形式进行深入研究,发现RHO家族蛋白中RAC1的活性提升可以促进肌动蛋白丝的生长以此来控制细胞形状重排。同样,高表达的KCTD12在抑制宫颈癌细胞的转移中发挥作用,这也依赖于RAC1的活性。结果:KCTD12阻断可促进转移,增强丝状伪足的密度和长度,而丝状伪足的形成依赖于RHO家族蛋白中RAC1的活性形式来控制细胞形状重排。

关键词：宫颈癌 KCTD12 RAC1 转移丝状伪足