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丝氨酸/苏氨酸激酶对猪链球菌2型应激和毒力的影响

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江苏农业学报 2016年第3期32卷 593-600页

作者：祝昊丹倪艳秀茅爱华周俊明俞正玉吕立新何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为阐明丝氨酸/苏氨酸激酶(STK)对猪链球菌2型强毒株的应激耐受和毒力的影响,比较了亲本株SS2-1及其丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株Δstk在各种应激环境(热、酸、氧化应激和高渗应激)中的生长能力,利用HEp-2细胞模型比较各菌株的黏附能力,... 详细信息

为阐明丝氨酸/苏氨酸激酶(STK)对猪链球菌2型强毒株的应激耐受和毒力的影响,比较了亲本株SS2-1及其丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株Δstk在各种应激环境(热、酸、氧化应激和高渗应激)中的生长能力,利用HEp-2细胞模型比较各菌株的黏附能力,比较各菌株在猪全血中的存活能力,利用仔猪模型评价STK基因缺失前后细菌的毒力差异。结果表明,丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失后,细菌在各种应激环境中的生存能力明显减弱,对HEp-2细胞的黏附能力减弱,在猪全血中的存活能力显著降低,对仔猪的致病力明显降低。此外,缺失株Δstk在仔猪体内各器官的定殖能力也显著降低。说明丝氨酸/苏氨酸激酶与猪链球菌的应激和毒力密切相关。

关键词：猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸激酶应激毒力

清脑益智方对血管性痴呆大鼠海马区NogoA和丝氨酸/苏氨酸激酶表达的影响

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中国临床药理学杂志 2018年第9期34卷 1081-1084页

作者：朱金墙岳少乾李霖秦秀德天津中医药大学中医药研究院天津市现代中药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地天津300193 广州中医药大学附属深圳市中医院广东深圳518000

目的研究清脑益智方(QNYZF)对血管性痴呆(VaD)大鼠大脑海马区Nogo A和丝氨酸/苏氨酸激酶(ROCK)表达的影响。方法用双侧结扎颈总动脉(2-VO)法建立大鼠VaD模型。按照体重将雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只:假手术组,模型组,对照组和低、中... 详细信息

目的研究清脑益智方(QNYZF)对血管性痴呆(VaD)大鼠大脑海马区Nogo A和丝氨酸/苏氨酸激酶(ROCK)表达的影响。方法用双侧结扎颈总动脉(2-VO)法建立大鼠VaD模型。按照体重将雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只:假手术组,模型组,对照组和低、中、高3个剂量实验组。假手术组与模型组灌服等体积0.9%NaCl;对照组给予盐酸多奈哌齐0.52 mg·kg^(-1)·d^(-1);低、中、高3个剂量实验组分别灌服QNYZF 3,6,12 g·kg^(-1)·d^(-1),连续灌胃给药4周。取大脑组织,用免疫组化法和反转录PCR法分别检测海马区Nogo A和ROCK-2蛋白表达水平。结果大鼠海马区NogoA^+细胞相对灰度值:假手术组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组分别为435.30±127.98,5365.94±1351.96,1585.92±360.64,1953.77±653.58,2300.94±742.25,1681.35±437.87,模型组与假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05)。大鼠海马区ROCK-2^+细胞相对灰度值:假手术组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组分别为68.11±12.58,556.79±141.85,130.20±31.05,357.24±100.07,193.39±40.79,503.64±219.87,模型组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 QNYZF可通过抑制NogoA-NgR/Rho-ROCK信号通路而发挥促神经元突触重塑的作用。

关键词：清脑益智方血管性痴呆海马丝氨酸/苏氨酸激酶

猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株的构建及其致病性

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江苏农业学报 2014年第6期30卷 1360-1368页

作者：祝昊丹倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小... 详细信息

为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小鼠的致病能力降低;体内定植试验结果表明缺失株△stk在小鼠体内各器官的定植能力显著降低。这些数据表明STK与猪链球菌2型(SS2)的致病性相关。

关键词：猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸激酶毒力

猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因功能的实验研究

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猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因功能的实验研究

作者：杜骁杰南京师范大学

学位级别：硕士

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人兽共患病病原菌,根据其表面荚膜多糖(Capsular polysaccharide, CPS)的抗原性,可以分为1/2、1-31和33共33个血清型,其中2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)毒力最强,临床检出率最高。近年来多次出现S.suis2感染人事件,尤其是1998年和2005年,分别在江苏海安和四川资阳暴发了大规模的S.suis2感染人疫情,患者出现高比例的、国内外罕见的链球菌中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome, STSS)症状,病情凶险,致死率高。然而猪链球菌的致病机制仍不清楚。信号转导系统是有机体对不断变化的外界环境做出反应的一个重要机制。在细菌中,磷酸化信号转导系统在这一过程中发挥着重要作用。对其深入的研究主要集中在二元信号转导系统(two-component signal transduction system,TCSTS)中,即组氨酸和天冬氨酸残基的磷酸化。随着基因组学研究的不断深入和分子生物学技术的不断发展,一种新发现的丝氨酸／苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,STK)引起了越来越多研究者的兴趣。该激酶与真核生物丝／苏氨酸激酶具有一定的同源性,并已发现在包括链球菌在内的多种原核生物中广泛存在。丝／苏氨酸激酶与相邻的丝／苏氨酸磷酸酶(serine-threonine phosphatase, STP)协同作用,通过对丝氨酸、苏氨酸残基可逆的磷酸化调节细胞的一系列生理活动,包括生长、代谢、分化以及对外界环境变化的适应。本研究通过对S.suis2中国强毒株05ZYH33的全基因组序列分析,发现和其它致病性链球菌同源的stk基因和stp基因,生物信息学分析和实验证实了两者共转录,该发现为S.suis2的致病机制提供了新的研究方向。利用同源重组原理成功构建了stk基因敲除突变株△stk。与野毒株相比,△stk的表型发生了明显的变化,细菌的链状结构变长。生物学特性研究显示,细菌生长迟缓,全血存活能力减弱,对氧化应激压力的敏感性减弱,然而抵抗细胞溶解的能力增强。体外细胞实验表明,△stk对人喉癌上皮细胞的黏附能力以及对鼠巨噬细胞的抗吞噬能力明显下降。小鼠毒力实验表明,Astk的致病能力减弱。转录组学研究表明,stk的缺失导致占基因组24.8%的544个基因差异表达,其中511个基因表达下调,包括一些毒力相关基因以及二元信号转导系统编码基因等。综上所述,猪链球菌stk在表型、生长、毒力等方面具有重要的作用,是一个全局性的表达调控因子,在猪链球菌中主要起着正调控作用。

关键词： 2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶毒力转录组测序

陆地棉一个丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白基因的克隆与表达分析

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棉花学报 2006年第3期18卷 140-144页

作者：杨郁文倪万潮张保龙沈新莲张香桂徐英俊姚姝江苏省农业科学院农业生物遗传生理研究所江苏南京210014

通过RTPCR获得一个编码棉花丝氨酸／苏氨酸激酶类似蛋白全长的cDNA片段，其编码的氨基酸序列与拟南芥ATPK3的相似度达到82％，这个基因暂被命名为GhPK1。基因全编码区包括1038个核苷酸，编码346个氨基酸的蛋白。GhPK1的编码产物在265～... 详细信息

通过RTPCR获得一个编码棉花丝氨酸／苏氨酸激酶类似蛋白全长的cDNA片段，其编码的氨基酸序列与拟南芥ATPK3的相似度达到82％，这个基因暂被命名为GhPK1。基因全编码区包括1038个核苷酸，编码346个氨基酸的蛋白。GhPK1的编码产物在265～270个氡基酸处有一个跨膜区并可能结合在内质网膜上。GhPK1在种子和纤维中的表达水平较其它组织高。另外，GhPK1的表达量在受到盐胁迫后上升，说明GhPK1可能参与了盐胁迫反应。

关键词：陆地棉丝氨酸/苏氨酸激酶基因表达盐诱导

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中西医结合肝病杂志 2016年第3期26卷 173-175,F0003页

作者：韩丹李炜王倩上海市曙光医院急诊内科上海201203 上海市龙华医院肿瘤科

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。... 详细信息

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。结果:Aurora-A在正常肝组织、早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率分别为0、30%、60%、76%;Aurora-A在肝癌组织中的阳性表达和肝癌是否存在淋巴结转移紧密相关,在没有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率显著低于存在淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率(P0.05);低分化肝癌组织中Wnt2阳性表达率高于中、高分化肝癌组织(P0.05);C-myc在有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肝癌组织(P<0.05);C-myc在低分化、中分化肝癌组织中的阳性表达率均高于高分化的肝癌组织(P<0.05)。结论:Aurora-A、Wnt2及C-myc的过表达跟肝癌的发生、侵袭和转移、分化高度相关。通过综合检测Aurora-A、Wnt2和C-myc蛋白的表达对肝癌的早期诊断及预后判断具有重要价值。

关键词：丝氨酸/苏氨酸激酶 Wnt2通路相关蛋白 C-myc基因肝癌

螺旋藻丝氨酸/苏氨酸激酶基因家族的克隆与表达分析

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螺旋藻丝氨酸/苏氨酸激酶基因家族的克隆与表达分析

作者：田李中国科学院研究生院（海洋研究所）

学位级别：硕士

钝顶螺旋藻(Spirulina platensis),是丝状不形成异型胞的蓝藻,由于其所蕴涵的高品质营养成分而成为具有重要经济价值的微藻。丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinases,STK)系统在蓝藻的信号转导中发挥了重要作用,推测该系统可能参... 详细信息

钝顶螺旋藻(Spirulina platensis),是丝状不形成异型胞的蓝藻,由于其所蕴涵的高品质营养成分而成为具有重要经济价值的微藻。丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinases,STK)系统在蓝藻的信号转导中发挥了重要作用,推测该系统可能参与了钝顶螺旋藻的信号转导并在其环境适应中起重要作用。温度是钝顶螺旋藻大规模养殖的主要限制性因素。本文根据6株丝状蓝藻STK基因的保守区设计简并引物,克隆了钝顶螺旋藻的一个STK基因序列,并初步从STK激酶基因家族的角度探索了钝顶螺旋藻对42℃高温和15℃低温环境的适应。主要结果如下: 1.以本实验室构建的螺旋藻基因组草图为基础,在基因组水平上研究了钝顶螺旋藻STK基因家族的特点。本地同源性搜索发现钝顶螺旋藻草图中STK基因家族共包含33个基因,这些基因基于蛋白结构域分析可以分为三大类群。序列保守性分析发现,钝顶螺旋藻STK激酶具有与真核STK激酶相同的保守域,此外钝顶螺旋藻STK激酶还具有特有的保守氨基酸。 2.构建了插入片段为1-2kb的螺旋藻基因组文库。基于该文库用简并引物PCR的方法得到了一条钝顶螺旋藻STK基因的5′端长度为504bp的基因组序列。 3.跨膜蛋白是信号转导的第一阶段,我们设置了42℃高温和15℃低温来诱导螺旋藻,对其中7个跨膜STK基因进行了初步半定量RT-PCR分析,结果显示STK2103在不同温度下表达量不同,推测该蛋白参与了螺旋藻温度相关的信号转导过程。本文将生物信息学分析与实验验证相结合,为螺旋藻的信号转导研究提供了线索。

关键词：钝顶螺旋藻丝氨酸/苏氨酸激酶基因文库克隆 RT-PCR

丝氨酸/苏氨酸激酶通路参与促红细胞生成素保护帕金森病大鼠的实验研究

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中国临床神经科学 2014年第6期22卷 601-607页

作者：戚辰干静吴娜宋璐袁伟恩刘振国上海交通大学医学院附属新华医院神经内科上海交通大学药学院 200092

目的观察促红细胞生成素(EPO)对帕金森病(PD)模型大鼠的保护作用并探讨其机制。方法实验大鼠分为3组,1 PD组:6-羟基多巴(6-OHDA)定向注射至右侧前脑内侧束建立PD模型;2 EPO组:在模型制备前持续1周给予腹腔注射EPO 10 000 U·kg-1·d-1;... 详细信息

目的观察促红细胞生成素(EPO)对帕金森病(PD)模型大鼠的保护作用并探讨其机制。方法实验大鼠分为3组,1 PD组:6-羟基多巴(6-OHDA)定向注射至右侧前脑内侧束建立PD模型;2 EPO组:在模型制备前持续1周给予腹腔注射EPO 10 000 U·kg-1·d-1;3假手术组:大鼠脑内立体定向注射生理盐水。采用ELISA法检测大鼠脑脊液EPO含量变化,术后3周评估大鼠行为学改变,免疫组化学、免疫荧光及蛋白印迹法分别检测酪氨酸羟化酶(TH)、EPO受体(EPO-R)及丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)磷酸化(Ser473)的表达。结果 1 EPO组脑脊液内EPO含量[(416.59±9.34)μU·L-1]增加,与假手术组[(2.20±1.92)μU·L-1]比较,差异有统计学意义(P<0.05);2 EPO组的行为学改善,黑质多巴胺能神经元的丢失减少,黑质EPO-R的表达增加,与PD组及假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);3 EPO组黑质Akt磷酸化(Ser473)的表达明显增加,与PD组及假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO腹腔注射可以改善PD大鼠的运动症状,与EPO增加PD大鼠的磷酸化Akt(Ser473)表达可能有关。

关键词：帕金森病促红细胞生成素酪氨酸羟化酶丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化

基于生物信息学探究“养血活血安胎”法指导下当归-白芍调节PI3K/AKT改善复发性流产母胎界面血管生成的机制

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中国药学杂志 2023年第12期58卷 1093-1101页

作者：蒋婴钱诚张蔚苓常淑华钱旭武浙江中医药大学附属宁波市中医院妇科浙江宁波315010 浙江药科职业大学中药学院浙江宁波315100

目的基于生物信息学结合动物实验探究“养血活血安胎”法指导下当归-白芍通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)改善复发性流产(RSA)母胎界面血管生成... 详细信息

目的基于生物信息学结合动物实验探究“养血活血安胎”法指导下当归-白芍通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)改善复发性流产(RSA)母胎界面血管生成的作用机制。方法基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)获取RSA相关基因芯片,并通过R软件limma包进行差异表达分析。通过人类基因数据库(GeneCards)得到血管生成相关基因,并通过Venn在线制图工具将其与得到的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)取交集。应用基因富集分析在线工具进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。建立正常妊娠小鼠模型和Clark经典RSA模型,将正常妊娠小鼠模型作为正常对照组(n=10),将RSA小鼠随机分为模型组、黄体酮组、高剂量、中剂量和低剂量当归-白芍水煎剂组,并于妊娠第1天开始给予相应药物灌胃,每日1次,共给药15 d;正常对照组给予等体积等频次生理盐水灌胃,于末次给药后12 h处死小鼠并取材。采用免疫组织化学法测定各组小鼠蜕膜组织中内皮抑素(endostain,ES)和微血管密度(micro vessel density,MVD)标记物白细胞分化抗原34(cluster of differentiation,CD34)的阳性表达,免疫印迹(Western blotting)法检测蜕膜组织中PI3K、AKT、ES和CD34的水平。结果芯片GSE113790被纳入本研究,从中共获得704个RSA相关的差异表达基因。此外,通过Genecards数据库共获得1258个血管生成相关基因。两者交集共有65个基因,此即为RSA血管生成异常相关DEGs。富集分析结果显示65个DEGs共参与45个信号通路的调控(P<0.05),其中PI3K/AKT富集最为显著。免疫组化结果表明,与对照组相比,模型组ES水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,当归-白芍中剂量、高剂量组CD34水平显著升高,ES水平显著下降(P<0.05)。Western blotting结果表明,模型组ES水平显著升高,CD34、PI3K、pAKT/AKT水平显著下降(P<0.05),而黄体酮组及当归-白芍各剂量组ES水平均显著下降,pAKT/AKT水平显著上升;黄体酮组CD34水平显著上升;黄体酮组及当归-白芍高剂量组PI3K水平显著上升。结论RSA母胎界面存在血管生成障碍,在“养血活血安胎”法指导下,当归-白芍药对可促进RSA小鼠母胎界面血管生成,并与激活PI3K/AKT通路相关。

关键词：复发性流产母胎界面血管生成养血活血安胎磷脂酰肌醇3-激酶丝氨酸/苏氨酸激酶当归-白芍