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丝/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70 S6K信号通路在口腔鳞癌中的表达及临床意义

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华西口腔医学杂志 2014年第5期32卷 504-508页

作者：贾洁茹梁爽刘济远赵君唐休发口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院头颈肿瘤外科(四川大学) 成都610041

目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70 S6K信号通路在口腔鳞癌组织中的表达情况,为口腔鳞癌的早期诊断和治疗提供参考。方法收集口腔鳞癌标本51例,癌旁黏膜组织10例,正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学SP... 详细信息

目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70 S6K信号通路在口腔鳞癌组织中的表达情况,为口腔鳞癌的早期诊断和治疗提供参考。方法收集口腔鳞癌标本51例,癌旁黏膜组织10例,正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学SP法检测口腔鳞癌、癌旁黏膜组织及正常口腔黏膜中p-Akt、p-mTOR及p70S6K的表达情况,分析三者相互之间表达的相关性。结果 p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌组中的表达显著高于正常口腔黏膜组和癌旁黏膜组的表达。p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌的表达与患者的年龄、性别及临床分期无相关性,但与口腔鳞癌的分化程度及有无淋巴结转移有相关性。p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌的表达相互之间具有较强的正相关关系。结论 Akt/mTOR/p70 S6K信号通路分子在口腔鳞癌中表达活跃,提示可能与口腔鳞癌的发生发展具有重要的相关性。

关键词：丝/苏氨酸蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 p70 S6K 口腔鳞癌免疫组织化学

丝/苏氨酸蛋白激酶DNA甲基化在同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡中的作用

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实用医学杂志 2019年第5期35卷 709-714页

作者：车双双徐华郭伟孙磊张鸣号杨晓玲姜怡邓刘志宏宁夏医科大学公共卫生与管理学院银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004

目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(MST1)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),用100μmol/L Hcy干预48 h。MTT法检测HUVECs的存活率;Hoechst染色观察HUVECs的凋亡情况;Western blo... 详细信息

目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(MST1)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),用100μmol/L Hcy干预48 h。MTT法检测HUVECs的存活率;Hoechst染色观察HUVECs的凋亡情况;Western blot检测MST1、Bcl-2、BAX和DNMT1的蛋白表达;巢式降落式PCR(nMS-PCR)法检测MST1启动子区DNA甲基化改变。结果与正常对照组相比,Hcy处理后HUVECs的存活率明显降低(P 蛋白表达增加了1.23倍,而Bcl-2的蛋白表达及Bcl-2/BAX明显下调(P 蛋白表达升高(P 蛋白表达下降(P <0.01)。结论 MST1表达增高可能在Hcy致HUVECs凋亡中发挥重要作用,而DNMT1表达下调引起的MST1启动子区DNA低甲基化可能是其表达增高的重要机制。

关键词：同型半胱氨酸丝/苏氨酸蛋白激酶 DNA甲基化凋亡

针刺激活轴抑制蛋白1、腺苷酸活化蛋白激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶信号通路对失神经骨骼肌萎缩大鼠的保护作用

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安徽医药 2022年第5期26卷 913-917,I0001页

作者：刘祥华罗湘筠李文倩湖南中医药高等专科学校附属第一医院(湖南省直中医医院)针灸科湖南株洲412000

目的研究针刺对失神经骨骼肌萎缩大鼠骨骼肌细胞丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、轴抑制蛋白1(Axin1)表达水平的影响。方法将48只SD大鼠采用简单随机分组分为空白对照组、假手术组、模型组和针刺组各12只。模型组和... 详细信息

目的研究针刺对失神经骨骼肌萎缩大鼠骨骼肌细胞丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、轴抑制蛋白1(Axin1)表达水平的影响。方法将48只SD大鼠采用简单随机分组分为空白对照组、假手术组、模型组和针刺组各12只。模型组和针刺组大鼠采用手术切断坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型,假手术组只暴露坐骨神经,空白对照组不做任何处理。针刺组在造模后进行电针治疗(“足三里”和“承山”穴),每次10 min,连续治疗3周。治疗后,检测各组大鼠绯肠肌组织的湿重比、肌纤维横截面积及肌细胞直径比;HE染色检测各组大鼠绯肠肌损伤;TUNEL染色检测各组大鼠绯肠肌细胞凋亡;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测p-AKT、AKT、p-AMPK、AMPK、Axin1、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、活化胱天蛋白酶(cleavedcaspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果与空白对照组和假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌湿重比(0.38±0.06)、肌纤维截面积比(0.52±0.12)和肌纤维直径比(0.53±0.16)均明显下降(P<0.05),细胞凋亡率(30.85±5.74)%明显升高(P<0.05),Bcl-2(0.40±0.03)、Bax(0.53±0.05)、cleavedcaspase-3(0.58±0.06)、PCNA(0.44±0.05)、p-AKT/AKT(0.54±0.06)、p-AMPK/AMPK(0.73±0.04)和Axin1(0.41±0.05)的表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠腓肠肌湿重比(0.52±0.07)、肌纤维截面积比(0.64±0.11)和肌纤维直径比(0.66±0.15)均明显增加(P<0.05),细胞凋亡率(21.39±3.87)%明显下降(P<0.05),Bcl-2(0.61±0.05)、PCNA(0.72±0.08)、p-AKT/AKT(0.82±0.09)和Axin1(0.62±0.06)的表达明显上调(P<0.05),Bax(0.33±0.04)、cleavedcaspase-3(0.34±0.04)和p-AMPK/AMPK(0.51±0.03)的表达明显下调(P<0.05)。结论针刺可能通过调控Axin1/AMPK/AKT的表达,延缓失神经大鼠骨骼肌的萎缩。

关键词：周围神经损伤失神经骨骼肌萎缩大鼠丝/苏氨酸蛋白激酶腺苷酸活化蛋白激酶轴抑制蛋白1

草菇丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因的克隆及序列分析

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食用菌学报 2011年第2期18卷 1-4页

作者：汪虹陈明杰鲍大鹏农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

根据担子菌丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因编码的氨基酸序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇(Volvariella volvacea)丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因(vv-stpk1)的保守片段,然后通过基因组步行的方法获得了vv-stpk1全长序列。vv-st... 详细信息

根据担子菌丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因编码的氨基酸序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇(Volvariella volvacea)丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因(vv-stpk1)的保守片段,然后通过基因组步行的方法获得了vv-stpk1全长序列。vv-stpk1全长为2 003 bp,含有8个内含子,长度分别为72、57、53、54、45、50、55和48 bp,可编码522个氨基酸残基的多肽。推定的氨基酸序列与玉米黑粉菌(Ustilagomaydis)、木糖发酵酵母(Pichia stipitis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)中与细胞形态发生相关的丝/苏氨酸蛋白激酶Orb6的相似性分别为81%、77%和76%,对VV-STPK1蛋白的系统发生学分析的结果表明,VV-STPK1与Orb6同源蛋白聚在同一进化枝上,这些数据都支持VV-STPK1蛋白为与细胞形态发生相关同源蛋白的推定。

关键词：草菇丝/苏氨酸蛋白激酶克隆序列分析

古菌Sulfolobus tokodaii中丝/苏氨酸蛋白激酶与FHA底物的互作研究

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古菌Sulfolobus tokodaii中丝/苏氨酸蛋白激酶与FHA底物的互作研究

作者：王斌华中农业大学

学位级别：硕士

蛋白质磷酸化是细胞应对外界刺激最通常的反应机制,在细胞信号传导中发挥着重要的作用。然而,在古菌中,我们对磷酸化反应涉及的蛋白激酶以及相应的磷酸化底物知之甚少。在本论文研究中,我们从古菌Sulfolobus tokodaii str.7中第一次鉴... 详细信息

蛋白质磷酸化是细胞应对外界刺激最通常的反应机制,在细胞信号传导中发挥着重要的作用。然而,在古菌中,我们对磷酸化反应涉及的蛋白激酶以及相应的磷酸化底物知之甚少。在本论文研究中,我们从古菌Sulfolobus tokodaii str.7中第一次鉴定出一个典型的真核型丝／苏氨酸蛋白激酶(STPK) ST1565以及它的作用底物——-FHA结构域包含蛋白ST0829,并对磷酸化反应的条件以及二者保守结构域中的关键氨基酸位点进行了分析,主要取得了以下几个方面的结果：(1)通过细菌双杂交和Pull-down/western等试验证实了ST1565与ST0829能发生物理的相互作用。(2)蛋白激酶ST1565的自磷酸化与底物磷酸化过程均以Mn2+为最佳辅助因子,最适反应温度为45℃,最佳反应pH范围为5.5-7.5。(3)通过一系列定点突变对蛋白激酶功能结构域和FHA结构域的关键位点进行了分析和鉴别,发现多数保守氨基酸残基的突变使磷酸化反应的活性下降,其中T-329是激酶的主要活性位点,而T-326则是负调控位点。(4)ST0829的保守FHA结构域上一些氨基酸的替代突变使其丧失了与ST1565的物理相互作用,并且在进一步的ST0829的FHA结构域的空间模型构建中发现这些突变位点均位于蛋白质的边缘,可能组成潜在的互作结构域与蛋白激酶ST1565发生相互作用。本研究首次在第三域生命——古菌中发现了一个典型的类真核STPK能够相互作用并磷酸化它的FHA蛋白底物,这些结果不仅提高了我们对古菌激酶以及FHA蛋白结构和功能的认识,而且也增强了我们对整个三域生命中根本的磷酸化信号传导机制的理解。

关键词：丝/苏氨酸蛋白激酶 FHA结构域包含蛋白磷酸化

以PLK1 PBD为靶点小分子抑制剂的筛选及抗肿瘤活性研究

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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药学学报 2017年第3期52卷 409-415页

作者：姜玉环张晶陈云雨王艳宏司书毅黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150000 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

采用荧光偏振高通量筛选的方法进行PLK1 PBD小分子抑制剂的筛选,对筛选出的阳性化合物F083-0063进行体外抗肿瘤活性研究,以期为寻找抗肿瘤药物提供先导化合物。模型筛选获取一个对PLK1 PBD抑制率较高的化合物F083-0063,其在10μg·mL^(... 详细信息

采用荧光偏振高通量筛选的方法进行PLK1 PBD小分子抑制剂的筛选,对筛选出的阳性化合物F083-0063进行体外抗肿瘤活性研究,以期为寻找抗肿瘤药物提供先导化合物。模型筛选获取一个对PLK1 PBD抑制率较高的化合物F083-0063,其在10μg·mL^(-1)时的抑制率达(99.7±0.4)%;利用软件Graphpad Prism 5计算IC_(50)为1.9±0.1μmol·L^(-1);噻唑蓝比色法(MTT)研究该化合物对不同细胞系增殖的影响,结果显示F083-0063能抑制多种肿瘤细胞系的增殖;流式细胞仪检测发现,其能促进细胞凋亡且能导致细胞G2/M期阻滞;划痕实验测定F083-0063对细胞迁移的影响,结果显示其能抑制He La细胞迁移,在20μmol·L^(-1)时,迁移率低至(37.6±0.7)%。利用分子连接技术探讨化合物与PLK1 PBD结构域的亲和力,发现F083-0063与PLK1 PBD有较好的亲和性;免疫印迹法(Western blotting)检测显示F083-0063可以引发周期相关蛋白表达的增加。综上所述,化合物F083-0063有明显的抗肿瘤活性,并有望成为靶向PLK1 PBD的抗肿瘤先导化合物。

关键词：抗肿瘤药荧光偏振法 PLK1 PBD抑制剂丝/苏氨酸蛋白激酶保罗样激酶

Polo like激酶在细胞分裂中的功能研究进展

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生理科学进展 2002年第1期33卷 45-47页

作者：佟超范衡宇李满玉陈大元孙青原中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100080 中国农业大学动物医学院北京100094

pololike激酶 (plks)是广泛存在于真核生物中的一类丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,其结构和功能都十分保守 ,许多研究表明 ,plks家族成员在细胞分裂过程中发挥着重要作用。细胞分裂开始时 ,plks可以推动细胞完成G2 /M期转化 ,很可能是细胞开始分... 详细信息

pololike激酶 (plks)是广泛存在于真核生物中的一类丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,其结构和功能都十分保守 ,许多研究表明 ,plks家族成员在细胞分裂过程中发挥着重要作用。细胞分裂开始时 ,plks可以推动细胞完成G2 /M期转化 ,很可能是细胞开始分裂的开关之一 ,并有望成为抑制癌症的靶位点。它的作用涉及到中心体的成熟 ,纺锤体的组织 ,以及成熟促进因子 (MPF)的激活。当细胞分裂进入中后期时 ,plks又能够激活后期促进复合体 (APC) ,降解cycling蛋白 ,促进姐妹染色体分开 ,使分裂进入后期。当细胞分裂进入末期时 ,plks又能促进胞质分裂。本文拟对

关键词：成熟促进因子后期促进复合体胞质分裂细胞分裂功能丝/苏氨酸蛋白激酶

斯氏副柔线虫CAMK/TSSK蛋白激酶基因的克隆及其蛋白质结构与抗原表位预测分析

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畜牧兽医学报 2018年第3期49卷 644-651页

作者：王文龙赵学亮孙柯冯陈晨白丽艳王姝懿王梦雅刘春霞内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学动物科学学院呼和浩特010018 内蒙古自治区综合疾病预防控制中心呼和浩特010018 内蒙古农业大学生命科学学院呼和浩特010018

为分析并预测斯氏副柔线虫免疫相关基因CTPK编码蛋白结构、功能以及其作为疫苗候选抗原的可能性,通过提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增CTPK基因的CDS区,并利用生物信息学软件对CTPK进行蛋白质结构分析和抗... 详细信息

为分析并预测斯氏副柔线虫免疫相关基因CTPK编码蛋白结构、功能以及其作为疫苗候选抗原的可能性,通过提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增CTPK基因的CDS区,并利用生物信息学软件对CTPK进行蛋白质结构分析和抗原表位预测。生物信息学分析表明,CTPK基因cDNA序列全长共519bp,具有完整的开放阅读框(519bp),编码173个氨基酸,相对分子质量和等电点大小分别为20.264ku和9.53。结构分析发现,蛋白质无跨膜区,无规则卷曲构成二级结构的主要组分,亲水性氨基酸比例超过60%;抗原表位预测表明,CTPK蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,既含有较多潜在的B细胞抗原表位又存在较多的T细胞抗原表位。推测CTPK有望用作斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原,本研究为骆驼斯氏副柔线虫生前诊断方法iELISA的建立和DNA疫苗的研究奠定了理论基础。

关键词：斯氏副柔线虫 CTPK基因抗原表位蛋白质结构预测生物信息学分析丝/苏氨酸蛋白激酶

GmSTK12基因转化大豆及对转化体生物量影响的研究

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东北农业大学学报 2021年第9期52卷 10-18,46页

作者：柏锡陈云杨雪焦爽杨亚男黄荣梅东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

大豆GmSTK12基因编码丝/苏氨酸蛋白激酶。研究通过同源克隆方法获得大豆GmSTK12基因,并成功构建基因植物表达载体,利用农杆菌介导的子叶节转化法对大豆品种东农50作遗传转化,测定获得的3份GmSTK12基因过量表达大豆T1及T2代材料生长情况... 详细信息

大豆GmSTK12基因编码丝/苏氨酸蛋白激酶。研究通过同源克隆方法获得大豆GmSTK12基因,并成功构建基因植物表达载体,利用农杆菌介导的子叶节转化法对大豆品种东农50作遗传转化,测定获得的3份GmSTK12基因过量表达大豆T1及T2代材料生长情况。结果表明,GmSTK12基因过量表达使大豆叶片长宽比、侧根数量、根长显著高于对照品种;叶面积从V6期开始增加,约为对照品种2倍;GmSTK12基因过量表达使植株地上部分鲜重与干重、根鲜重与干重显著高于对照品种;GmSTK12基因过量表达使植株单株粒数、单株荚数及百粒重显著高于对照品种;叶绿素含量显著提高。研究表明,GmSTK12基因具有增加大豆生物量功能。

关键词：大豆 GmSTK12基因功能研究生物量丝/苏氨酸蛋白激酶