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东北野猪耳皮成纤维细胞系的建立及生物学特征

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 428-431页

作者：李忠秋刘春龙马红付博马建章刘娣东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江哈尔滨150086 中国科学院东北地理与农业生态研究所黑土生态重点实验室黑龙江哈尔滨150081

研究了东北野猪耳皮组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特性,并对培养细胞进行了污染检测及冷冻保存和复苏培养观察。结果显示:原代培养在接种5d组织块边缘开始游离出单个细胞,到10d细胞生长旺盛;用酶消化法和差速贴壁法得到... 详细信息

研究了东北野猪耳皮组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特性,并对培养细胞进行了污染检测及冷冻保存和复苏培养观察。结果显示:原代培养在接种5d组织块边缘开始游离出单个细胞,到10d细胞生长旺盛;用酶消化法和差速贴壁法得到纯化的东北野猪成纤维细胞;冷冻前和复苏后的细胞活率分别为96.7%和92.7%,差异不显著(P>0.05);分离纯化的东北野猪成纤维细胞生长曲线正常;支原体和病毒检测呈阴性;成功建立东北野猪成纤维细胞系。

关键词：东北野猪成纤维细胞分离培养生物学特征

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东北野猪受选择基因筛选与分析

黑龙江畜牧兽医 2022年第12期 46-49,126,127页

作者：王文涛刘娣张冬杰何鑫淼龚林明田明赵跃坤黑龙江省农业科学院畜牧研究所哈尔滨150086 伊春宝宇农业科技有限公司黑龙江伊春153000 黑龙江省农业科学院成果产业处哈尔滨150086

为了研究东北野猪受选择基因情况,试验对4头东北野猪基因组进行了重测序,采用滑窗法、基因功能和信号通路富集分析等方法筛选4头东北野猪基因组中的受选择基因,并对其功能和参与信号通路进行了富集分析。结果表明:东北野猪基因组中大约... 详细信息

为了研究东北野猪受选择基因情况,试验对4头东北野猪基因组进行了重测序,采用滑窗法、基因功能和信号通路富集分析等方法筛选4头东北野猪基因组中的受选择基因,并对其功能和参与信号通路进行了富集分析。结果表明:东北野猪基因组中大约有29.81 Mb的区间受到了选择,涉及到411个基因,其中279个基因有功能注释;γ-氨基丁酸受体1(gamma-aminobutyric acid receptor 1,GABAR1)基因、硫氧还蛋白2(thioredoxin 2)基因、激素肽3(tachykinin 3)基因、5-羟色胺受体(5-hydroxytryptamine receptor)基因与神经系统有关,干扰素-欧米伽2(interferon-omega-2)基因、钙调素6(calmodulin like 6)基因与免疫相关,鱼精蛋白1(protamine 1)基因与雄性生殖相关;279个受选择基因作为细胞组分主要与突触后膜、突触膜、突触后成分细胞连接、神经元投射、质膜区有关,具有中链脂肪酸辅酶A连接酶活性、γ-氨基丁酸受体活性、形成碳氧键连接酶活性、神经递质受体活性、突触后神经递质受体活性、钙依赖性磷脂结合等分子功能,参与了多巴胺分泌、多巴胺分泌调节、药物反应等生物学过程;受选择基因在分子功能方面富集不显著[错误发现率(FDR)>0.05]),在生物学过程和细胞定位方面均显著富集(FDR≤0.05);受选择基因在KEGG、Rectome、Wiki数据库的信号通路中均不能显著富集(FDR>0.05),在3个数据库的信号通路中都涉及到了γ-氨基丁酸受体信号途径,在KEGG通路和Wiki通路中都出现了铁死亡途径。说明东北野猪与神经系统、免疫系统相关基因受到了选择。

关键词：东北野猪受选择基因选择性清除 GO富集分析分子功能生物学过程细胞定位

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东北野猪的起源与分化

江苏农业科学 2005年第5期33卷 92-94页

作者：张冬杰杨国伟刘娣东北农业大学动物科学技术学院黑龙江省农业经济职业技术学校黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086

应用PCR方法对黑龙江省小兴安岭东北野猪的D-loop基因序列进行克隆测序,参考GenBank上提供的中国6个地方猪种、2个引进猪种和3个野猪猪种的D-loop序列,利用DNAStar软件构建了系统进化树。推测东北野猪与藏猪血缘关系最近,与日本野猪和... 详细信息

应用PCR方法对黑龙江省小兴安岭东北野猪的D-loop基因序列进行克隆测序,参考GenBank上提供的中国6个地方猪种、2个引进猪种和3个野猪猪种的D-loop序列,利用DNAStar软件构建了系统进化树。推测东北野猪与藏猪血缘关系最近,与日本野猪和中国的地方家猪都起源于同一个祖先。

关键词：东北野猪 D—loop 系统进化树起源

东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体核型和显带研究

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东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体核型和显带研究

作者：顾志刚东北农业大学

学位级别：硕士

本项实验对东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体核型、C带、G带和高分辨G带进行了研究。找到了二者淋巴细胞的最适培养条件，得到了各自的染色体核型，应用常规方法得到了它们的染色体C带和290条左右带纹的G带，应用微量秋水仙素法得到了... 详细信息

本项实验对东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体核型、C带、G带和高分辨G带进行了研究。找到了二者淋巴细胞的最适培养条件，得到了各自的染色体核型，应用常规方法得到了它们的染色体C带和290条左右带纹的G带，应用微量秋水仙素法得到了二者410条左右带纹的高分辨G带。本项实验旨在初步确定东北野猪的分类地位，为研究家猪的起源进化、品种形成和野猪基因定位提供染色体核型和显带方面的基础数据。实验结果如下： 1．东北野猪淋巴细胞最适培养液PH为7.2～7.4，杂种猪的是7.0～7.2;东北野猪及其与家猪杂种猪淋巴细胞的最适秋水仙素浓度是0.05μg/ml，作用时间为3h;在37℃、0.075mol/L的KCl低渗液中，二者淋巴细胞的最佳低渗时间都是20min。 2．通过添加谷氨酰胺，应用微量秋水仙素法和胰酶-EDTA法可获得较为理想的东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体高分辨G带。 3．东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体数与家猪相同，也是2n=38，其核型与家猪的没有明显差别。 4．东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体C带有多态性，而且杂种猪C带的数量比东北野猪的多。 5．东北野猪及其与家猪杂种猪的染色体G带、高分辨G带的大部分带纹与家猪相同;在有差异的带纹中，杂种猪与东北野猪相同的较多，与家猪相同的较少;三者之间G带带纹的差别，表现在个别染色体特定带纹的位置、宽窄以及有无等方面，而且其大部分差异也会在高分辨G带带纹中显现出来。

关键词：东北野猪杂种猪染色体核型显带

亮甲酚蓝染色筛选及曲古抑菌素A对东北野猪核移植胚发育的影响

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农业生物技术学报 2012年第8期20卷 907-914页

作者：付博刘娣马红何鑫淼吴赛辉马建章安铁洙黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江省农业科学院博士后科研工作站东北林业大学博士后科研流动站

体细胞克隆的效率一直较低,这可能与成熟前卵母细胞的质量有关。猪卵母细胞主要来源于屠宰场的废弃卵巢,这暗示,卵母细胞可能处于发情周期的各个阶段。因此,体细胞核转移之前有必要筛选优质卵母细胞。本研究旨在探讨亮甲酚蓝染色筛选及... 详细信息

体细胞克隆的效率一直较低,这可能与成熟前卵母细胞的质量有关。猪卵母细胞主要来源于屠宰场的废弃卵巢,这暗示,卵母细胞可能处于发情周期的各个阶段。因此,体细胞核转移之前有必要筛选优质卵母细胞。本研究旨在探讨亮甲酚蓝染色筛选及曲古抑菌素A(TSA)对东北野猪(Sus scrofa ussuricus)核移植胚发育的影响。卵丘卵母细胞复合体经亮甲酚蓝(BCB)染色后分三组:BCB+组(胞质着色,葡萄糖-6-磷酸脱氧酶(G6PDH)活性低)、BCB-组(胞质未着色,G6PDH活性高)和对照组(不使用亮甲酚蓝染色)。卵母细胞体外成熟培养后,对卵母细胞进行核移植操作,来源于BCB+卵母细胞的核移植胚使用50nmol/LTSA处理,未使用TSA处理的来源于BCB+卵母细胞的核移植胚作为对照组。结果表明,BCB+卵母细胞的直径显著大于BCB-组(P东北野猪核移植重构胚的发育能力,为通过体细胞克隆法保护东北野猪资源创造条件。

关键词：东北野猪亮甲酚蓝曲古抑菌素A 体细胞核移植

冷应激对东北野猪成纤维细胞HSP90 mRNA转录水平的影响

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畜牧兽医学报 2012年第12期43卷 1978-1983页

作者：李忠秋刘春龙马红付博汪亮彭福刚马建章刘娣东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040 黑龙江省农业科学院畜牧研究所哈尔滨150086 中国科学院东北地理与农业生态研究所黑土生态重点实验室哈尔滨150081

为了揭示热休克蛋白90基因(Heat shock protein 90,HSP90)在细胞冷应激反应过程中的时空表达特性。以东北野猪成纤维细胞为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术分析了4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞内HSP90mRNA转录变化规律。... 详细信息

为了揭示热休克蛋白90基因(Heat shock protein 90,HSP90)在细胞冷应激反应过程中的时空表达特性。以东北野猪成纤维细胞为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术分析了4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞内HSP90mRNA转录变化规律。结果表明,在低温处理过程中,HSP90mRNA转录量在各温度均未见显著增加(P>0.05);在冷应激的复温培养过程中,HSP90mRNA转录量在4和15℃处理4h后复温培养8h内显著增加(P东北野猪成纤维细胞内HSP90mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激(25～32℃)未能诱导复温后HSP90mRNA转录量的显著增加,强度冷应激(4～15℃)诱导复温后HSP90mR-NA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比。

关键词：成纤维细胞冷应激 HSP90 荧光定量PCR 东北野猪

冷应激对东北野猪成纤维细胞周期和凋亡的影响

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东北农业大学学报 2015年第6期46卷 73-78页

作者：李忠秋刘春龙孙金艳马红亓美玉彭福刚汪亮刘娣黑龙江省农业科学院畜牧研究所哈尔滨150086 中国科学院东北地理与农业生态研究所哈尔滨150081

以猪成纤维细胞为研究对象,应用流式细胞术检测4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞周期和细胞凋亡情况。结果表明,在冷应激的低温处理过程中,细胞主要出现G0/G1期阻滞,随低温强度的增加而作用加强;低温培养诱导细胞凋亡,随低温强... 详细信息

以猪成纤维细胞为研究对象,应用流式细胞术检测4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞周期和细胞凋亡情况。结果表明,在冷应激的低温处理过程中,细胞主要出现G0/G1期阻滞,随低温强度的增加而作用加强;低温培养诱导细胞凋亡,随低温强度的增加而作用加强,但在检测的2、4、6和8 h中,细胞凋亡率达到一定程度后,不再随低温处理时间延长而增加,细胞对低温产生耐受。复温培养过程中主要引起细胞G2/M期阻滞,随低温强度的增加而作用加强;细胞凋亡出现在复温培养的2-6 h,是延迟和渐进过程,与低温处理强度密切相关。

关键词：细胞周期细胞凋亡冷应激成纤维细胞东北野猪

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东北野猪线粒体DNA序列的测定与分析

东北农业大学学报 2008年第9期39卷 62-65页

作者：李丽于浩刘娣东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 吉林大学畜牧兽医学院长春130012

通过PCR扩增获得东北野猪(Northeastern wild boar)线粒体全基因组序列,研究表明东北野猪线粒体全基因组序列全长16581bp,共有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个D-loop区。利用MEGA4软件构建系统进化树,推测东北野猪... 详细信息

通过PCR扩增获得东北野猪(Northeastern wild boar)线粒体全基因组序列,研究表明东北野猪线粒体全基因组序列全长16581bp,共有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个D-loop区。利用MEGA4软件构建系统进化树,推测东北野猪在分类上属于亚洲群,是亚洲猪种中最为古老的。

关键词：线粒体基因组东北野猪系统进化树