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不动杆菌对理化因子耐受性的研究

中国消毒学杂志 1993年第1期10卷 15-18页

作者：刘明德张邦燮第三军医大学第三附属医院重庆630042 第三军医大学微生物学教研室

以医院感染病人分离的94株不动杆菌进行对理化因子敏感性的测定。其中,28株(29.8％)可在4℃生长。65℃湿热和紫外线分别需作用50分钟才能杀灭全部所试菌株。2％过氧化氢、2％来苏儿、1％戊二醛和0.1％新洁尔灭作用15～20分钟可杀该菌,... 详细信息

以医院感染病人分离的94株不动杆菌进行对理化因子敏感性的测定。其中,28株(29.8％)可在4℃生长。65℃湿热和紫外线分别需作用50分钟才能杀灭全部所试菌株。2％过氧化氢、2％来苏儿、1％戊二醛和0.1％新洁尔灭作用15～20分钟可杀该菌,但75％乙醇作用20分钟仍无消毒作用。

关键词：不动杆菌消毒

不动杆菌BD189对赭曲霉毒素A的脱毒研究

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不动杆菌BD189对赭曲霉毒素A的脱毒研究

作者：梁晓翠上海交通大学

学位级别：硕士

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是由曲霉属和青霉属产毒菌株产生的次级代谢产物,主要存在于谷物及其副产品中。OTA具有多种毒性,对动物和人体健康有很大的潜在危害。本课题通过对OTA脱毒菌株的筛选,获得具有OTA脱毒能力的菌株,并研究... 详细信息

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是由曲霉属和青霉属产毒菌株产生的次级代谢产物,主要存在于谷物及其副产品中。OTA具有多种毒性,对动物和人体健康有很大的潜在危害。本课题通过对OTA脱毒菌株的筛选,获得具有OTA脱毒能力的菌株,并研究了该菌株的OTA脱毒能力及其脱毒特性等。本课题分为三个部分。第一部分是OTA脱毒菌株的筛选及鉴定。我们从土壤中筛选得到一株细菌菌株,具有较强的OTA脱毒能力。经过菌株纯化和16S rDNA测序及分析,确定该菌株属于不动杆菌属,本实验室将其命名为Acinetobacter sp. BD189。第二部分,我们对BD189菌株的脱毒能力和机理进行了研究,并对经BD189菌株脱毒处理后反应体系的毒性变化进行了生物学验证。BD189菌株的活菌有很强的脱毒能力,能在24h内去除80%以上的OTA,而灭活菌无脱毒能力。同时,活菌对OTA进行脱毒处理后,其反应体系在HPLC的色谱图中出现了与赭曲霉毒素α(Ochratoxinα,OTα)特征相同的产物峰。这表明BD189菌株的脱毒机理为生物降解而不是物理吸附。微核实验结果表明,与未经脱毒处理的OTA毒素溶液相比,经BD189菌株脱毒处理后的OTA毒素溶液的细胞毒性降低,实验体系中HepG2细胞形成的微核数明显减少,这说明了BD189菌株对OTA脱毒后,没有产生毒性更强的新毒性物质,达到了脱毒目的。第三部分,我们对BD189菌株的脱毒特性及其降解酶的性质进行了研究。BD189菌株降解OTA的时间曲线符合酶促反应的特征,随着体系中OTA浓度的下降,降解速率逐渐减小。BD189在30℃和40℃时有最大降解率,在10℃、20℃和50℃时降解率明显下降。在pH6.5和pH7.5中性条件下的降解率最高,而酸性或碱性条件均可影响该菌的脱毒能力。此外,菌体浓度越大,脱毒能力越强。我们以粗酶液为对象进行降解酶性质的初步研究。结果表明BD189菌株的降解酶是胞内酶,其最适反应温度为30℃,最适反应pH为8.0。金属离子螯合剂EDTA能抑制降解酶的活性,而羧肽酶抑制剂不能抑制它的活性,说明它是一种金属酶且具有与羧肽酶A不同的性质。以上实验表明,不动杆菌BD189菌株具有较强的OTA脱毒能力,其降解脱毒条件温和。BD189菌株及其降解酶为OTA的生物脱毒研究提供了新的选择。

关键词：赭曲霉毒素A 不动杆菌脱毒生物降解真菌毒素

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不动杆菌临床分离株耐药性及相关基因研究

不动杆菌临床分离株耐药性及相关基因研究

作者：王秋实北京大学

学位级别：硕士

【目的】探索不动杆菌耐药性分子机制,为控制不动杆菌相关感染提供依据。【内容】研究北京大学第一医院不动杆菌临床分离株的耐药表型与耐药性相关基因及其相关性,并初步研究耐药相关基因的稳定性和水平基因转移。【方法】用琼脂稀释法... 详细信息

【目的】探索不动杆菌耐药性分子机制,为控制不动杆菌相关感染提供依据。【内容】研究北京大学第一医院不动杆菌临床分离株的耐药表型与耐药性相关基因及其相关性,并初步研究耐药相关基因的稳定性和水平基因转移。【方法】用琼脂稀释法和E-test法测定抗菌药物对不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)的方法检测耐药相关基因(aacC1、aacC2、aacA4、OXA-23、PER-1、AmpC、Int1和Int2),用序列分析的方法分析PCR扩增阳性的基因序列,对同一克隆株来源的不动杆菌进行多代传递培养,检测传代后的耐药相关基因的稳定性,通过全细胞接触HGT实验和转化实验检测HGT。【结果】我院不动杆菌临床分离株多重耐药性显著,检出5种耐药相关基因(aacC1、aacA4、PER-1、AmpC和Int1),其中aacC1、AmpC和Int1与耐药性密切相关,PCR阳性产物经测序证实与GenBank相应序列同源性均在98%以上,传代后菌株的部分耐药基因丢失,HGT初步实验获得转化接合子和转化子。【结论】不动杆菌多重耐药性严重,多重耐药菌株携带多重耐药基因,耐药相关基因同源性高,提示耐药相关基因有可能从其他菌株或菌种通过HGT而获得。不动杆菌对β内酰胺类及氨基糖苷类抗生素的耐药性分别与AmpC及aacC1基因的存在密切相关。整合酶基因Int1在多重耐药菌中高度流行,致使多重耐药性转移和耐药菌在临床迅速播散。耐药基因存在不稳定现象,整合酶基因Int1稳定性较高,对Int1基因的检测有可能评估及预测细菌多重耐药性的发展。HGT实验研究的初步结果显示不动杆菌可以发生HGT,控制耐药基因HGT的发生是筛选新型抗生素的一个新思路,有待深入研究。

关键词：不动杆菌耐药性耐药相关基因水平基因转移

不动杆菌CRISPR系统基因结构的研究与分析

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不动杆菌CRISPR系统基因结构的研究与分析

作者：付恒霞青岛大学

学位级别：硕士

目的不动杆菌属(Acinetobacter)是一类无芽胞,不能运动的革兰阴性杆菌。近年来,因该类细菌在医院感染中越来越多见,且多重耐药(MDR)菌株的比例迅速增加,从而引起公众的关注。规律成簇间隔的短回文重复序列(CRISPR)是广泛存在于古生菌和... 详细信息

目的不动杆菌属(Acinetobacter)是一类无芽胞,不能运动的革兰阴性杆菌。近年来,因该类细菌在医院感染中越来越多见,且多重耐药(MDR)菌株的比例迅速增加,从而引起公众的关注。规律成簇间隔的短回文重复序列(CRISPR)是广泛存在于古生菌和细菌基因组中的、针对外来入侵元件的适应性免疫系统。细菌一方面为了物种的稳定进化出CRISPR系统等机制以抵御外来基因的干扰,另一方面在生存压力下而需要通过水平基因转移(HGT)从外界获得新的基因以适应新的环境。本文旨在通过对不动杆菌CRISPR系统基因结构的分析,以深入理解细菌如何协调二者的矛盾。方法本文将从两个不同角度(NCBI数据库已公布的菌株以及我们收集获得的临床分离株)分析不动杆菌CRISPR系统的基因结构并初步探讨其与耐药之间的关系,并且对两部分结果进行对比分析。不动杆菌各菌株CRISPR阵列等相关序列信息收集自CRISPRdb数据库,基因序列下载自NCBI的Nucleotide数据库。使用Meg Align软件对其重复序列(Repeat Sequence)进行比较归类,将最终分类结果输入到CRISPRmap软件中进行分析,预测并比较所形成RNA二级结构和最小自由能(MFE)。通过Weblogo结果分析其保守性;在Gen Bank数据库中对所有的间隔序列进行Blastn分析,寻找与其序列同源的外源基因元件(一致性≥85%,覆盖率≥85%);将CRISPR阵列中第一个重复序列上游与cas基因之间的一段序列作为前导序列(Leader Sequence)查找的位点,长度设定为100bp,使用Weblogo等软件在线分析预测前导序列的保守性,并且通过promoter 2.0预测启动子存在的可能性;cas基因序列通过MEGA7.0软件进行比对,并且做系统进化树分析。根据CRISPR阵列与cas相关蛋白基因位点的相关信息绘制各菌株CRISPR-Cas系统结构图;然后根据cas基因的类型和组成对不动杆菌的CRISPR系统进行分型。MLST数据库搜索对应的等位基因谱及序列型;以Genomes数据库公布的141株具有完整基因组序列及基因注释的不动杆菌为研究对象,查找其基因组中氨基糖苷类修饰酶编码基因APH、ACC等在内的8类常见耐药基因,进一步统计分析耐药基因的携带情况(耐药基因型)与CRISPR之间的关系。此外,我们从青岛多家三甲医院检验科收集到105株不动杆菌临床分离株,通过体外药物敏感试验检测其耐药性;根据第一部分的部分结果设计I-Fa和I-Fb的引物,PCR扩增cas1基因并对其进行分型;然后通过SPSS 13.0软件进行统计学处理,分析、探讨临床株CRISPR系统的携带情况与耐药表型之间的关系。结果1.本研究利用生物信息学方法探究了NCBI数据库中收录的185株不动杆菌的CRISPR系统的基因结构,以及推测每个组成部分的潜在功能。我们共鉴定出397个确定CRISPR阵列,发现了72种不同的重复序列,且发现种内重复序列比较保守且多含有motifs,可以形成稳定的RNA二级结构。9.7%的间隔序列与噬菌体和质粒相关的外来基因元件序列高度同源。另外,38.4%的间隔序列与其他细菌CRISPR阵列以外的基因组的某些序列具有一定的一致性。更有意思的是16.7%的间隔序列与真核生物基因组的某些序列具有一致性,后者多位于一些假设蛋白的编码基因中。通过对cas基因的组成、结构和序列分析发现,不动杆菌的CRISPR系统类型几乎都归类到IF型中,其中I-Fa型39%,I-Fb型59%,其他为未定型和III-A型。Cas相关蛋白基因(cas1、cas3、csy2、csy3、csy4)的系统进化分析结果高度相似,且分支上的菌株大致相同。此外,首次发现cys1基因仅存在于I-Fb亚型的菌株中,而在I-Fa亚型中不存在该基因。同一CRISPR系统亚型大多数具有相同MLST类型。通过对Genomes数据库141株不动杆菌全基因组耐药基因的分析发现,无CRISPR阵列不动杆菌组的某些耐药基因的携带率显著高于有CRISPR系统(包括可疑结构)组。2.对105株不动杆菌临床株的标本来源分析发现,下呼吸道的分离标本居多。cas1基因PCR扩增结果阳性率是23.8%,其中I-Fb 9.5%,I-Fa型14.3%,略高于第一部分研究中不动杆菌基因组中的cas1的阳性率(其中,CRISPRdb中不动杆菌cas1的阳性率为17.5%;而Genomes数据库中的cas1的阳性率则为20.6%)。cas1的存在可能会影响不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、亚胺培南和环丙沙星的耐药性。由此确定CRISPR与不动杆菌耐药性存在着必然联系。结论本研究结果显示:***数据库中不动杆菌的CRISPR阵列的携带率为21.3%,

关键词：不动杆菌 CRISPR-Cas系统结构 MLST 耐药基因

不动杆菌属细菌医院感染流行病学调查及其基因分型的研究

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不动杆菌属细菌医院感染流行病学调查及其基因分型的研究

作者：黄娟广西医科大学

学位级别：硕士

【目的】了解本医院不动杆菌属细菌医院感染流行现状;分析其对临床常用抗菌药物耐药情况;探讨医院感染相关危险因素;应用基因分型的方法对医院感染鲍曼不动杆菌进行分型研究。【方法】1.对不动杆菌引发的医院感染71例患者的感染科室分... 详细信息

【目的】了解本医院不动杆菌属细菌医院感染流行现状;分析其对临床常用抗菌药物耐药情况;探讨医院感染相关危险因素;应用基因分型的方法对医院感染鲍曼不动杆菌进行分型研究。【方法】1.对不动杆菌引发的医院感染71例患者的感染科室分布和特点进行回顾性调查,并进行耐药情况分析。2.采用1:1配对的病例对照研究方法,使用SAS统计软件,对19项暴露因素进行条件Logistic回归分析。3.收集医院感染不动杆菌菌株,采用重复片段引物PCR的方法,对53株鲍曼不动杆菌进行基因分型。【结果】1.不动杆菌医院感染率为3.52‰(71/20193),例次感染率为3.71‰(75/20193)。感染病例平均年龄为51.42岁,平均住院天数为54.35天;所调查的71例患者大多有严重的原发疾病,如心脑血管疾病、肿瘤、呼吸系统感染、大面积烧伤等。2.感染科室分布以ICU和烧伤病房最常见,分别占感染病例数的29.58%(21/71)和11.27%(8/71);感染涉及10个部位,其中下呼吸道占的比重最大,达73.33%(55/75),其次是烧伤创面和上呼吸道,与之相对应,分离的菌株主要来源于痰标本。3.共有18例为混合感染,其中17例合并有两种病原菌,1例有三种菌混合感染;71例感染病例,好转35例,痊愈17例,未愈5例,死亡14例,病死率为19.72%(14/71)。4.71例病例分离的不动杆菌对14种抗菌药物敏感试验结果显示:泰能和美罗培南耐药率均为1.49%(1/66)、头孢哌酮/舒巴坦40.30%(27/67)、阿米卡星60.29%(41/68)、头孢吡肟63.64%(42/66)、哌拉西林/三唑巴坦65.12(28/43)、环丙沙星66.18%(45/68)、左氧氟沙星66.67%(46/69)、庆大霉素67.24%(39/58)、头孢他啶68.12%(47/69)、复方新诺明68.42%(39/57)、哌拉西林71.01%(49/69)、氨曲南80.56%(58/72)、四环素0.00%(0/2);多重耐药株占68.00%(51/75)。5.多因素条件Logistic回归分析结果显示,与医院感染有关的危险因素只有抗菌药物使用天数(OR=8.945。95%CI 1.288～62.107)。6.53株不动杆菌分为28个基因型,C型为主要的流行株,其余均为散发菌株。【结论】1.本次调查该医院不动杆菌属细菌医院病死率较高,以ICU和烧伤科最为突出;呼吸道和烧伤部位为主要

关键词：医院感染不动杆菌流行病学耐药性基因分型

不动杆菌全基因组测序鉴定分型及其致病相关性研究

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不动杆菌全基因组测序鉴定分型及其致病相关性研究

作者：翟盼盼南华大学

学位级别：硕士

目的:基于全基因组测序(WGS,Whole-genome Sequencing)对分离自深圳地区临床拟诊感染病例的不动杆菌(Ab,acinetobacter)进行菌种鉴定和多位点测序分型(wgMLST,Whole-genome Whole-genome multilocus sequence typing),精确展示Ab临床分离株的种属分布状态,了解Ab不同种属菌株在临床感染患者不同来源部位或不同免疫状态人群中的分布情况以及基于Oxford或Pasteur wgMLST分型的分子流行病学特征,并通过HvcT毒力基因检测和大蜡螟幼虫感染杀灭试验评价Ab不同种属或不同wgMLST基因型与其致病性的相关性。方法:309株不动杆菌分离自2014年度至2017年度深圳地区拟诊感染的住院患者,采用生化反应或飞行质谱检测技术进行不动杆菌种属的常规鉴定,基于全基因组测序进行菌种的精确识别和毒力因子分析,在PubMLST数据库进行Oxford或Pasteur wgMLST的等位基因位点比对和ST基因型确认,大蜡螟幼虫感染杀灭试验进行不动杆菌致病性的体内检测。结果:1、基于全基因组测序(WGS,Whole-genome Sequencing)对309株深圳地区临床分离和生化鉴定的不动杆菌进行精确识别,共鉴定出251株(81.23%)鲍曼不动杆菌(***)和58株(18.77%)非鲍曼不动杆菌(***)。***亚种中以***(7.44%)、***(5.18%)、***(1.62%)、***(1.62%)最为常见;其中***.809848-like、***7422-like、***817-like这3株菌与已知命名的不动杆菌平均单核苷酸同源性(ANI,average nucleotide identity)小于95%,可能为不动杆菌属新亚种。2、***在潜在免疫功能低下患者所在科室(ICU、RICU、EICU、新生儿科、肾内科、老年病科、血液内科、肿瘤科)的分离率明显高于普通科室(74.9%vs 25.1%),***则明显较低(37.93%vs 62.07%),统计学比较有明显差异(χ=27.851,P=0.00)。3、***与***在潜在感染部位(来自血流、腹水、胸水、脑脊液等人体无菌部位)与潜在定植部位(来自上下呼吸道、尿液、各种引流液等可能存在定植菌部位)的分布构成比,经统计学比较差异无显著性(χ=0.772,P=0.232)。4、基于Oxford wgMLST分型系统,本研究251株***中以ST195型(42.63%)、ST457型(19.52%)、ST136型(17.13%)较为常见,15株(5.98%)属未能识别的NewST型;58株***中则以ST1343型(8.62%)、ST1740型(6.90%)、ST948型(3.45%)较为常见,42株(72.41%)属未能识别的NewST型。有34株不动杆菌在Oxford基因分型数据库获得30个NewST型,其中*** 10株共获得10个NewST型、*** 24株共获得20个NewST型。5、基于Pasteur wgMLST分型系统,本研究251株***中以wgMLST基因型以ST2型226株(90.04%)最为常见,5株(2.00%)属未能识别的的NewST型;58株***中则以ST768型(10.35%)、ST410型(8.62%)、ST217型(6.90%)、ST68型(5.17%)较为常见,27株(46.55%)属未能识别的NewST型。有31株不动杆菌在Pasteur基因分型数据库获得31个NewST型,其中*** 5株共获得5个NewST型、*** 26株共获得26个NewST型。6、***潜在感染株(分离自血流、腹水、胸水、脑脊液等人体无菌部位)与潜在定植株(分离自上下呼吸道、尿液、各种引流液等可能存在定植菌部位)的Oxford wgMLST分型总体分布构成比,经统计学比较有显著性差异(χ=164.101,P=0.000)。其中,ST457型***在潜在感染株中的检出率(63.27%vs 36.73%)较高,与其它常见ST型菌株比较有显著统计学差异(χ=18.0294.809,P=0.000);NewST在潜在感染株中也有较高检出率(78.57%vs 21.43%),与其它常

关键词：不动杆菌细菌鉴定多位点测序分型序列分析致病性

老年患者医院获得性不动杆菌肺炎的临床调查和耐药分析

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中国老年学杂志 2005年第5期25卷 589-590页

作者：周文莉青海红十字医院青海西宁810000

近年来，在临床标本中，不动杆菌感染率逐年增多。作为机会致病菌，它引起院内感染的重要性日益突出，且具有多重耐药性，使常用抗菌药物耐药率逐渐增多。为研究不动杆菌引起的下呼吸道感染和药敏情况，对我院住院老年患者医院获得性肺... 详细信息

近年来，在临床标本中，不动杆菌感染率逐年增多。作为机会致病菌，它引起院内感染的重要性日益突出，且具有多重耐药性，使常用抗菌药物耐药率逐渐增多。为研究不动杆菌引起的下呼吸道感染和药敏情况，对我院住院老年患者医院获得性肺炎的不动杆菌病原菌及其对临床常用抗菌药物的耐药性进行调查分析，以便为临床合理使用抗菌药提供参考。

关键词：老年患者医院获得性肺炎不动杆菌药物敏感试验

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环尾狐猴疑似不动杆菌感染的诊治

野生动物学报 2021年第4期42卷 1155-1160页

作者：王宇翔福州市动物园管理处福州350012

2016年6月,福州动物园5只环尾狐猴(Lemur catta)相继发生食欲不振,高烧不退,呼吸困难,急性腹泻等临床症状,诊断结果疑似为不动杆菌(Acinetobacter)感染。诊断依据是:①提示性临床症状,精神萎靡、高热、呼吸障碍;②剖检及病理检查特征病... 详细信息

2016年6月,福州动物园5只环尾狐猴(Lemur catta)相继发生食欲不振,高烧不退,呼吸困难,急性腹泻等临床症状,诊断结果疑似为不动杆菌(Acinetobacter)感染。诊断依据是:①提示性临床症状,精神萎靡、高热、呼吸障碍;②剖检及病理检查特征病变,出现肺组织出血性坏死性病变,肺气肿、肺水肿,肝炎及其他脏器出血性病变;③细菌分离及PCR检测,鉴定为不动杆菌。药敏试验结果显示,该菌对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星等喹诺酮类药物敏感。针对性用药后,环尾狐猴群的病症得以解除。该病的发生与福州高温高湿天气相关,夏季的防暑降温以及提高动物抵抗力是预防的关键。

关键词：不动杆菌环尾狐猴细菌分离鉴定耐药表型

藏羊肉中优势腐败不动杆菌的分离鉴定及其生物膜形成特性

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江苏农业学报 2019年第1期35卷 195-203页

作者：史云娇刘芳孙芝兰吴海虹张新笑诸永志卞欢朱云龙江苏省农业科学院农产品加工研究所江苏南京210014 扬州大学旅游烹饪学院江苏扬州225127

本研究从冷鲜藏羊肉中共分离获得40株腐败菌,其中10株为不动杆菌,经结晶紫染色定量检测发现10株不动杆菌均具有中等或强粘附成膜能力。对1株成膜能力最强的不动杆菌A3的成膜特性进行深入分析,发现该菌在培养3 d时生物膜内菌数最高,随后... 详细信息

本研究从冷鲜藏羊肉中共分离获得40株腐败菌,其中10株为不动杆菌,经结晶紫染色定量检测发现10株不动杆菌均具有中等或强粘附成膜能力。对1株成膜能力最强的不动杆菌A3的成膜特性进行深入分析,发现该菌在培养3 d时生物膜内菌数最高,随后培养5 d至7 d时菌数无显著(P>0. 05)变化。扫描电镜、激光共聚焦显微镜观察及胞外多糖质量浓度测定结果表明,该菌形成生物膜的过程中培养1 d到3 d细菌迅速繁殖,培养3 d到5 d,菌体聚集成团,并且此时不可溶性多糖的含量最高,培养7 d时胞外分泌物质减少,生物膜出现解离状态。因此,在藏羊肉加工过程中,针对此菌生物膜抑制的研究可着重关注控制胞外物质的分泌,并且在生物膜未成熟前实施消毒措施,有助于彻底杀灭生物膜内的腐败菌。

关键词：藏羊肉不动杆菌生物膜胞外多糖