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环巴胺阻断Hedgehog信号通路对食管癌EC109细胞上皮间质化逆转的影响及机制

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重庆医科大学学报 2015年第8期40卷 1118-1122页

作者：陈立前秦治明左小平郑相如刘恒重庆医科大学附属第一医院胸心外科重庆400016

目的:探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对食管癌EC109细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其可能机制。方法:实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h。通过r... 详细信息

目的:探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对食管癌EC109细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其可能机制。方法:实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h。通过real-time PCR检测Gli1的表达变化,观察细胞形态变化,通过血管拟态实验检测血管形成能力变化,Transwell小室侵袭和迁移实验、黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移和黏附能力变化,real-time PCR及Western印迹方法检测EMT相关标志物E钙粘蛋白(E-cadherin)、β连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)及EMT调控因子Snail、Twist1等的表达变化。结果:环巴胺阻断EC109细胞Hedgehog信号通路Gli1的m RMA表达明显减少为(41.819±20.150)%,形态发生明显变化,血管拟态个数较对照组[(2.780±0.424)vs.(5.080±0.634)]明显减少(t=-16.919,P=0.000),侵袭实验较对照组[(24.800±2.588)vs.(55.400±4.879)]和迁移实验较对照组[(23.200±1.924)vs.(65.400±4.775)]均明显减少(t=-12.390,P=0.000;t=-18.331,P=0.000),同种细胞间黏附增强(F=9.327,P=0.009),上皮表型标志物E-cadherin表达较对照组[(0.388±0.565)vs.(0.228±0.582)]明显上调(t=3.421,P=0.027),而间质表型Vimentin、β-catenin的表达水平较对照组[(0.588±0.109)vs.(0.507±0.051);(0.998±0.128)vs.(0.756±0.038)]明显下调(t=4.221,P=0.013;t=6.781,P=0.002);与对照组相比,实验组细胞中转录因子Snail的表达较对照组[(0.401±0.021)vs.(0.756±0.038)]下调(t=6.774,P=0.002),Twist1的m RNA表达量相对于对照组也明显下调为(74.987±9.031)%。结论:环巴胺阻断Hh信号通路能明显逆转EC109细胞EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Twist1表达有关。

关键词：食管癌环巴胺 Hedgehog 上皮间质化细胞黏附

中电导性钙离子依赖性钾通道在肝细胞再生蛋白-3促进结肠癌上皮间质化中的作用机制

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中华实验外科杂志 2013年第9期30卷 1897-1899页

作者：来伟曾育杰罗自通伍衡刘璐许鹤洋褚忠华中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广东510120 中山大学孙逸仙纪念医院急诊科广东510120

目的探讨中电导性钙离子依赖性钾通道（KCNN4）通道在肝细胞再生蛋白-3（PRL-3）诱导结肠癌细胞Lovo上皮间质化（EMT）中的作用机制.方法用KCNN4通道蛋白特异性阻滞剂TRAM-34和KCNN4-小干扰RNA（siRNA）分别处理已经稳定表达PRL-3的... 详细信息

目的探讨中电导性钙离子依赖性钾通道（KCNN4）通道在肝细胞再生蛋白-3（PRL-3）诱导结肠癌细胞Lovo上皮间质化（EMT）中的作用机制.方法用KCNN4通道蛋白特异性阻滞剂TRAM-34和KCNN4-小干扰RNA（siRNA）分别处理已经稳定表达PRL-3的结肠癌Lovo-P细胞和对照组Lovo-C细胞,Western blot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail以及波动蛋白（Vimentin）的水平变化,Transwell小室检测Lovo细胞侵袭能力变化.结果 Lovo-P分别经过TRAM-34和KCNN4-siRNA处理后,侵袭能力明显降低（45.78±3.89比32.69 ±2.15,45.78 ±3.89比28.76±4.25）.Western blot结果提示与对照组比较,TRAM-34处理组E-cadherin蛋白表达上升了69％,Snail蛋白表达下降了36％,而KCNN4-siRNA处理组都E-cadherin蛋白表达上升了57％,Snail蛋白表达下降了30％（P＜0.05）.结论 KCNN4通道蛋白参与了PRL-3诱导结肠癌EMT的过程.

关键词：结肠癌肝细胞再生蛋白-3 中电导性钙离子依赖性钾通道上皮间质化

巨噬细胞分泌的可溶性因子诱导HepG2细胞发生上皮间质化

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中华肝胆外科杂志 2013年第5期19卷 378-381页

作者：束平秦净秦新裕孙益红沈振斌赵骏杰复旦大学附属中山医院普外科上海200032

目的研究THP-1来源的巨噬细胞对肝癌细胞HepG2的上皮间质化作用（epithelial—mesenchymaltransition，EMT），探讨肿瘤相关性巨噬细胞（tumor-associatedmacrophages，TAMs）在肝癌进展中的作用及机制。方法将THP-1来源的巨噬细胞与He... 详细信息

目的研究THP-1来源的巨噬细胞对肝癌细胞HepG2的上皮间质化作用（epithelial—mesenchymaltransition，EMT），探讨肿瘤相关性巨噬细胞（tumor-associatedmacrophages，TAMs）在肝癌进展中的作用及机制。方法将THP-1来源的巨噬细胞与HepG2细胞共培养模拟肝癌相关微环境，观察共培养后HepG2细胞的形态变化。利用免疫荧光（immunofluorescence，IF）及Western-blot检测HepG2细胞与巨噬细胞共培养后E-cadherin表达的变化（E-cadherin表达缺失是EMT的标志）。通过FlowCytomix检测分析THP-1细胞及THP-1来源的巨噬细胞培养上清中部分细胞因子表达量的差异。结果HepG2细胞与THP-1来源的巨噬细胞共培养后，其细胞形态发生明显变化，由原来上皮细胞形态转化成为一种梭形的间质细胞形态。IF及Western-blot均显示HepG2细胞共培养后Ecadherin表达明显下调。THP-1细胞激活并分化为巨噬细胞后，白细胞介素IL-8及IL-1β表达量分别增加了40倍和20倍，P〈0．01；肿瘤坏死因子TNF-a表达量增加了8倍，P=0．056。结论巨噬细胞可诱导HepG2细胞发生EMT，该作用可能与其分泌的细胞因子IL-8及IL-1β和TNF-a增高有关。

关键词：肿瘤相关性巨噬细胞肝癌上皮间质化白细胞介素-1β 白细胞介素-8

结直肠癌中上皮间质化相关转录调控和信号通路研究进展

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山东医药 2016年第18期56卷 96-98页

作者：何俊君刘龙飞周贤南华大学附属南华医院湖南衡阳421002

上皮间质化(EMT)在结直肠癌的转移、侵袭中起重要作用。EMT可通过核心转录因子、Brachyury蛋白、叉头转录因子等转录因子调节E-钙蛋白和波形蛋白的表达来调控结直肠癌的转移和侵袭;也可通过转化生长因子β信号通路、Wnt信号回路、RAS/ER... 详细信息

上皮间质化(EMT)在结直肠癌的转移、侵袭中起重要作用。EMT可通过核心转录因子、Brachyury蛋白、叉头转录因子等转录因子调节E-钙蛋白和波形蛋白的表达来调控结直肠癌的转移和侵袭;也可通过转化生长因子β信号通路、Wnt信号回路、RAS/ERK1/2信号环路、PI3K/AKT信号环路等信号通路调控结直肠癌的转移和侵袭。

关键词：上皮间质化结直肠癌信号通路转录调控

Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究

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中山大学学报（医学科学版） 2012年第3期33卷 326-329,335页

作者：张建龙赖东明周泉波肖治宇张育超张萦斐毛凯陈双中山大学孙逸仙纪念医院普外科广东广州510120

【目的】构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装。成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转... 详细信息

【目的】构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装。成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2-Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕、Tanswell实验对细胞的迁移侵袭能力进行研究。【结果】成功构建Snail基因慢病毒载体并经测序证实。在转染Snail的细胞株中有明显的Snail基因及蛋白表达,其上皮标记E-cadherin的表达比转染空载体的对照组细胞明显下调,且其迁移侵袭能力要强于对照组细胞。【结论】Snail基因慢病毒载体在宿主细胞中表达稳定可靠,可以作为研究上皮间质化很好的工具,Snail基因有明显促进结肠癌细胞上皮间质化的作用。

关键词： Snail基因慢病毒载体上皮间质化

大蒜素对TGF?β_1诱导人胆管癌细胞上皮间质化的影响及机制

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医学研究生学报 2019年第2期32卷 143-147页

作者：郑世勤王晓松陈双严展鹏张秀华南京医科大学第二附属医院消化医学中心南京医学硕士210011 江苏省中西医结合医院中西医结合临床研究室南京210028

目的胆管癌的转移机制可能与上皮间质化(EMT)有关。文章旨在探讨大蒜素对TGF?β_1诱导的人胆管癌细胞上皮间质化的影响及其作用机制,为大蒜素应用于胆管癌的治疗提供理论依据。方法采用MTT法检测不同浓度大蒜素对人胆管癌RBE细胞的增殖... 详细信息

目的胆管癌的转移机制可能与上皮间质化(EMT)有关。文章旨在探讨大蒜素对TGF?β_1诱导的人胆管癌细胞上皮间质化的影响及其作用机制,为大蒜素应用于胆管癌的治疗提供理论依据。方法采用MTT法检测不同浓度大蒜素对人胆管癌RBE细胞的增殖抑制作用,以24h的IC50确定为大蒜素给药浓度,将其分为空白对照组、大蒜素组(130.7μmol/L)、TGF?β_1组(10ng/mL)及大蒜素+TGF?β_1组(130.7μmol/L+10ng/mL);采用划痕实验和Transwell小室试验分别检测24h后RBE细胞的迁移及侵袭能力;Western blot分别检测各组EMT相关蛋白E?钙黏蛋白(E?Cadherin)、N?钙黏蛋白(N?Cadherin)、Vimentin、Snail及核因子?κB(NF?κB)信号通路表达情况。结果与空白对照组及TGF?β_1组迁移率(28.19%±0.66%、49.22%±0.27%)比较,大蒜素组及大蒜素+TGF?β_1组(9.25%±0.36%、13.91%±0.75%)均下降(P上皮间质化,其机制可能与阻断NF?κB信号通路有关。

关键词：胆管癌大蒜素上皮间质化核转录因子

环巴胺阻断Hedgehog信号通路对人食管癌EC109细胞上皮间质化逆转的影响及机制

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环巴胺阻断Hedgehog信号通路对人食管癌EC109细胞上皮间质化逆转...

作者：陈立前重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对人食管癌EC109细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,即EMT)的作用及其可能机制。方法：实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h... 详细信息

目的：探讨环巴胺阻断Hedgehog通路对人食管癌EC109细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,即EMT)的作用及其可能机制。方法：实验分为实验组和对照组,实验组应用Hedgehog通路特异性阻断剂环巴胺作用食管癌EC109细胞48 h。通过real-time PCR检测Gli1的表达变化,观察细胞形态变化,通过血管拟态实验检测血管形成能力变化,Transwell小室迁移和侵袭实验、黏附实验分别检测细胞迁移、侵袭和黏附能力变化,real-time PCR及Western印迹方法检测EMT相关标志物E钙粘蛋白(E-cadherin)、β连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)及EMT调控因子Snail、Twist1等的表达变化。结果：环巴胺阻断EC109细胞Hedgehog信号通路Gli1的mRMA表达明显减少为(41.819±20.150)%,形态发生明显变化,血管拟态个数较对照组[(2.780±0.424)vs.(5.080±0.634)]明显减少(t=-16.919,P=0.000),侵袭实验较对照组[(24.800±2.588)vs.(55.400±4.879)]和迁移实验较对照组[(23.200±1.924)vs.(65.400±4.775)]均明显减少(t=-12.390,P=0.000;t=-18.331,P=0.000),同种细胞间黏附增强(F=9.327,P=0.009),上皮表型标志物E-cadherin表达较对照组[(0.3877±0.5648)vs.(0.2275±0.5823)]明显上调(t=3.421,P=0.027),而间质表型Vimentin、β-catenin的表达水平较对照组[(0.5877±0.1091)vs(0.5071±0.0509);(0.9983±0.1284)vs(0.7556±0.0379)]明显下调(t=4.221,P=0.013;t=6.781,P=0.002)：与对照组相比,实验组细胞中转录因子Snail的表达较对照组[(0.4013±0.0205)vs.(0.7556±0.0379)]下调(t=6.774, P=0.002), Twistl的mRNA表达量相对于对照组也明显下调为(74.987±9.031)%。结论：环巴胺阻断Hh信号通路能明显逆转EC109细胞EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Twistl表达有关。

关键词：食管癌环巴胺 Hedgehog 上皮间质化细胞黏附

白花蛇舌草乙醇提取物联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用

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中国现代应用药学 2016年第2期33卷 154-158页

作者：吕昕朱渊红周林水王真刘正中浙江中医药大学附属第一医院杭州310006 浙江中医药大学杭州310053

目的研究白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa,EEHD)联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用。方法以上皮表型人肺腺癌细胞H358为研究对象,TGF-β_1诱导构建细胞上皮间质化模型,按EEHD... 详细信息

目的研究白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa,EEHD)联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用。方法以上皮表型人肺腺癌细胞H358为研究对象,TGF-β_1诱导构建细胞上皮间质化模型,按EEHD、吉非替尼及两药3种不同顺序联合作用分为6组:A组,EEHD作用48 h;B组,吉非替尼作用48 h;A24B24组,先EEHD作用24 h,后吉非替尼作用24 h;B24A24组,先吉非替尼作用24 h,后EEHD作用24 h;AB48组,同时加入吉非替尼和EEHD作用48 h;对照组。CCK-8法测定各组细胞坏死率,Western-blot检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、EGFR蛋白表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,比较组间差异。结果各组药物作用均能不同程度抑制上皮间质化肺腺癌细胞H358增殖,E-cadherin表达呈上升趋势,Vimentin表达下降。其中EEHD联合吉非替尼组的细胞生长抑制率和细胞凋亡率显著高于吉非替尼单用组,E-cadherin蛋白表达率则显著高于吉非替尼单用组,而EGFR、Vimentin蛋白表达率显著低于吉非替尼单用组(P上皮间质化的H358细胞具有联合抑制作用,白花蛇舌草可部分逆转H358细胞上皮间质化状态。

关键词：白花蛇舌草吉非替尼上皮间质化 H358细胞

恩度联合放疗通过阻断上皮间质化通路抑制食管癌的血管生成拟态

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恩度联合放疗通过阻断上皮间质化通路抑制食管癌的血管生成拟态

作者：张皓南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探究体外实验条件下不同浓度的恩度(rh-Endo,Recombinant human endostatin)联合放疗(RT,Radiotherapy)对食管鳞癌细胞的生长增殖、克隆成瘤及血管拟态生成(VM,Vaculogenic mimicry)方面的作用,并阐明恩度联合放疗对食管鳞癌细胞... 详细信息

目的:探究体外实验条件下不同浓度的恩度(rh-Endo,Recombinant human endostatin)联合放疗(RT,Radiotherapy)对食管鳞癌细胞的生长增殖、克隆成瘤及血管拟态生成(VM,Vaculogenic mimicry)方面的作用,并阐明恩度联合放疗对食管鳞癌细胞的增生、成瘤、血管拟态生成的相关分子机制。方法:(1)采用CCK-8法检测不同浓度恩度(0、25、50、100、200、400、600和800 μg/ml)单独给药处理24h后,对人类食管鳞癌细胞株ECA109和TE13的细胞生长增殖抑制作用,并绘制出细胞抑制率直方图;并选取低于IC20的高低两种恩度浓度,应用于后续实验。(2)克隆集落形成实验,经各种浓度的恩度作用后,使用6-MV X线450cGy/min剂量率的实验条件下,经过不同的放射线剂量0,2,4,6,or8Gy处理,食管癌细胞株克隆形成的数目,观察不同浓度的恩度作用下食管癌细胞株ECA109和TE13经过IR处理之后肿瘤细胞存活成瘤的情况,并拟合出存活曲线;(3)利用3D培养及管腔形成实验观察高低浓度的恩度对不同剂量的辐射处理引起食管癌细胞的血管生成拟态现象的影响;并以成管长度及分支节点数为标准,绘制直方图。(4)通过免疫印迹实验Western blot检测不同药物浓度不同辐照剂量对食管鳞癌细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Snail蛋白表达的影响,观察不同处理条件下Snail/E-cadherin信号通路的变化。结果:(1)不同浓度的恩度对ECA109和TE13细胞的量效性影响不明显,提示恩度不能有效影响肿瘤细胞的生长增殖能力;(2)克隆形成实验发现,单纯辐照能明显抑制两种食管癌细胞的集落形成,但单纯用药或辐照联合用药抑制细胞集落形成的效果差异没有明显的统计学意义,说明恩度不能直接影响肿瘤细胞的存活,不能抑制肿瘤细胞成瘤。考虑后续实验的可行性、临床常规放疗剂量的实用性并参考大量文献资料,后续实验选取6 Gy为放疗剂量,恩度选取＜IC20的低、高两种药物浓度(100和400μg/ml)进行比较,联合治疗中采用先药后放作用时序。(3)3D培养及管腔形成实验结果示恩度联合放射能明显减少血管生成拟态现象,相较于单纯辐照组。综述所述,相对于单纯用药组,恩度联合辐照组的肿瘤细胞的管腔形成能力明显受抑制。进一步说明体外实验中恩度能减弱肿瘤细胞向远处转移的能力。(4)免疫印迹分析(Western Blotting)检测单纯给药组、单纯辐照组及高、低浓度恩度联合辐照后ECA109和TE13细胞中Wnt/β-catenin以及Snail/E-cadherin信号通路相关蛋白的变化。单独辐照组中:辐照处理组与空白组相比,与肿瘤细胞增殖、成瘤相关通路Wnt/β-catenin中的关键蛋白β-环连蛋白(β-catenin)下调,上皮细胞标志性的E-钙粘蛋白(E-cadherin)的下调、E-钙粘蛋白转录抑制因子Snail蛋白、间质细胞标志性的N-钙粘蛋白(N-cadherin)上调;不同浓度的恩度联合辐照组:相同辐照剂量组内β-catenin的表达水平未随恩度浓度变化发生明显改变。不同辐照剂量组间β-catenin的变化同上。而联合恩度的辐照组E-cadherin表达水平上调,同时Snail蛋白、N-cadherin下调,且呈现明显的量效性关系。综上所述,放疗抑制了肿瘤细胞的Wnt/β-catenin信号通路,激活了 Snail/E-cadherin信号通路,等导致食管癌细胞增殖成瘤能力减弱,诱导了血管生成拟态现象的发生。然而使用恩度后虽然不能进一步抑制Wnt/β-catenin信号通路,但是逆转了 Snail/E-cadherin信号通路的蛋白趋势,即恩度明显抑制了 ECA109和TE13细胞上皮间质化的过程,进而抑制了食管癌细胞血管拟态生成的能力。结论:食管癌的放射治疗虽然抑制了肿瘤细胞的增殖,阻止了肿瘤的成瘤,却增加了肿瘤细胞的血管拟态生成能力。恩度,重组人血管内皮抑制素是一种抑制血管生成的生物制品。恩度不能直接抑制食管癌细胞增殖、成瘤,但可以通过抑制上皮间质化EMT过程,改变Snail/E-cadherin通路蛋白的表达,有效抑制了食管癌细胞的血管生成拟态现象,进而减少了放疗后食管癌细胞远处转移的能力。

关键词：恩度血管生成拟态放疗食管癌上皮间质化