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体外诱导骨髓间充质干细胞向肾小管上皮样细胞分化

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中华肾脏病杂志 2009年第6期25卷 476-480页

作者：万建新邹臻寰许艳芳尤丹瑜崔炯潘阳彬谢鸣部福建医科大学附属第一医院肾内科福州350005

目的观察不同条件下骨髓间充质干细胞（MSC）体外诱导分化为肾小管上皮样细胞的差异。方法抽取SD大鼠的骨髓，经密度梯度离心分离，联合贴壁筛选法获取纯化的MSC。以流式细胞仪鉴定间充质干细胞表面标志。取扩增3代的MSC分组培养：（1... 详细信息

目的观察不同条件下骨髓间充质干细胞（MSC）体外诱导分化为肾小管上皮样细胞的差异。方法抽取SD大鼠的骨髓，经密度梯度离心分离，联合贴壁筛选法获取纯化的MSC。以流式细胞仪鉴定间充质干细胞表面标志。取扩增3代的MSC分组培养：（1）对照组：用含胎牛血清培养基；（2）全反式维甲酸（ATRA）组：胎牛血清＋缺血再灌注肾脏匀浆上清＋ATRA；（3）联合诱导组：胎牛血清＋缺血再灌注肾脏匀浆上清＋ATRA＋表皮生长因子（EGF）＋骨形成蛋白（BMP．7）。诱导7d后，倒置显微镜下观察细胞形态变化；化学染色检测细胞碱性磷酸酶表达；免疫细胞化学法检测细胞角蛋白18（cytokeratin-18）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。结果流式细胞仪显示，体外分离培养的第3代MSC，CD44阳性细胞表达率为97．8％±0．9％；CD90阳性细胞表达率为96．8％±1．4％；CD29阳性细胞表达率为97．6％±2．4％；而CD11b／c阳性细胞表达率为13．2％±0．6％；CD34阳性细胞表达率为1．2％±0．5％。诱导7d后，与对照组长梭形细胞相比，ATRA组部分细胞为圆形、短梭形单层排列；联合诱导组的大部分细胞为圆形、短梭形，细胞密集处呈鹅卵石样排列。碱性磷酸酶染色显示，对照组细胞为阴性；ATRA组部分细胞阳性；联合诱导组阳性细胞数明显增多。免疫细胞化学显示，ATRA组和联合诱导组细胞cytokeratin-18阳性表达率分别为29．47％±1．08％和47．52％＋2．13％，显著高于对照组（P〈0．05）；E-cadherin阳性表达率分别为14．88％±2．46％和36．15％±1．13％，也显著高于对照组（P〈0．05）。结论在体外模拟的急性肾衰竭微环境中加入ATRA可诱导MSC部分分化为肾小管上皮样细胞。联合EGF、BMP-7共同诱导能进一步促进MSC向肾小管上皮样细胞分化。

关键词：骨髓间质于细胞肾小管上皮样细胞表皮生长因子骨形成蛋白-7 分化

碱性成纤维细胞生长因子对鼻咽癌上皮样细胞株蛋白激酶B和c-fos的影响

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中华耳鼻咽喉科杂志 2004年第11期39卷 679-682页

作者：王晓鹏孙黎光刘宁于卉影张颐单永强中国医科大学生物化学与分子生物学教研室中国协和医科大学基础医学院生物化学系沈阳军区总医院实验科中国医科大学第一临床学院妇科北京诺赛基因有限公司蛋白质组研发部

目的　通过改变碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)作用的时间 ,研究bFGF调节鼻咽癌上皮样细胞系 (carcinomaepithelioidcelllines Ⅰ ,CNE Ⅰ )鼻咽癌细胞生长过程与磷脂酰肌醇 3 激酶 /蛋白激酶B (phosphati... 详细信息

目的　通过改变碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)作用的时间 ,研究bFGF调节鼻咽癌上皮样细胞系 (carcinomaepithelioidcelllines Ⅰ ,CNE Ⅰ )鼻咽癌细胞生长过程与磷脂酰肌醇 3 激酶 /蛋白激酶B (phosphatidylinositol3 kinase/proteinkinaseB ,PI 3 K/PKB)信号转导途径的关系。方法　采用3 2 P掺入法检测细胞质和细胞膜PKB活性。采用WesternBlot检测AP 1转录因子组成成员c fos的蛋白表达水平。结果　当采用外源性bFGF(5 0ng/ml)以不同时间作用于CNE Ⅰ细胞时 ,可提高细胞质和细胞膜PKB活性 ,而PI 3 K特异性抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)预处理 1h后再施加bFGF ,可显著降低细胞质和细胞膜PKB活性。统计学分析 (单因素方差分析 )表明Wortmannin预处理组和未做预处理组之间差异存在显著性 (P 细胞时 ,c fos表达增加 ,在 30min时达到高峰 ,用Wortmannin(10 0nmol/L)预处理 1h后施加bFGF ,c fos表达与未做预处理组相比有所减少 ,在 30min时间点降低 2 0 % ,在 4 5min时间点降低 35 %。结论　PI3 K、PKB介导bFGF对CNE Ⅰ鼻咽癌细胞的信号转导 ,PKB位于PI3 K下游 ;bFGF通过PI 3 K/PKB通路诱导CNE Ⅰ鼻咽癌细胞c fos表达?

关键词： FGF c-fos 上皮样细胞 PI3-K 鼻咽癌细胞碱性成纤维细胞生长因子蛋白激酶B 细胞质细胞膜转录因子

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子宫B型血管周上皮样细胞肿瘤一例病理观察

天津医药 2010年第12期38卷 1031-1031,I0012页

作者：刘贵秋张勤辛琪刘冰冰张爱华张传山天津市第三中心医院病理科、天津市人工细胞重点实验室 300170 天津市第三中心医院妇产科

1病例报告患者女,54岁。自觉腹部肿物伴尿频2年余,近半年逐渐增大,伴尿频加重,于2010年3月7日入院就诊。患者2年前发现腹部肿物伴轻度尿频,未予治疗。既往体健,否认手术及外伤史,无家族性遗传病病史。

关键词：子宫肿瘤上皮样细胞血管间叶瘤免疫组织化学病例报告

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膀胱血管周上皮样细胞肿瘤临床病理观察

诊断病理学杂志 2013年第5期20卷 296-299页

作者：王蔚陈晓东赖日权程琦广州军区广州总医院病理科广东广州510010 广州军区广州总医院超声影像科广东广州510010

目的探讨膀胱血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumors,PEComas)的临床病理特点、治疗及预后。方法收集1例膀胱PEComa的临床资料,行组织学观察及免疫组化,并复习相关文献。结果患者男,27岁,体检发现膀胱壁实性占位... 详细信息

目的探讨膀胱血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumors,PEComas)的临床病理特点、治疗及预后。方法收集1例膀胱PEComa的临床资料,行组织学观察及免疫组化,并复习相关文献。结果患者男,27岁,体检发现膀胱壁实性占位病变。组织学形态显示肿瘤组织位于膀胱肌壁间,大部分与周围组织分界清楚,局部在肌壁间浸润性生长。镜下上皮样或梭形肿瘤细胞呈巢团状、器官样、束状或编织状排列,瘤组织内富含薄壁和厚壁血管,血管壁广泛玻璃样变;瘤细胞胞质空亮或淡嗜酸性,细胞核呈圆形,囊泡状,可见小核仁,核分裂象。局部瘤细胞具轻度异型性,可见畸形核及多核巨细胞。免疫组化肿瘤细胞vimentin、HMB45、SMA、actin和S-100均(+),CK、EMA、Melan-A、NSE、Syn及CgA等均(-)。结论发生于膀胱的PEComa罕见,组织学形态结合免疫组化共表达HMB45和SMA有助于明确诊断,应与副神经节瘤、转移性肾透明细胞癌及恶性黑色素瘤等鉴别。

关键词：上皮样细胞膀胱免疫组化诊断鉴别诊断

子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤6例临床病理分析

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诊断病理学杂志 2014年第5期21卷 286-289页

作者：唐灿粟占三刘保安兰智华中南大学湘雅三医院病理科长沙410013 中南大学湘雅医院病理科长沙410007

目的探讨子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤的临床病理特征、生物学行为及诊断与鉴别诊断。方法收集6例子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤的临床及病理资料,采用免疫组化EnVision法检测HMB45、SMA、S-100、CD-117和desmin。结果 6例患... 详细信息

目的探讨子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤的临床病理特征、生物学行为及诊断与鉴别诊断。方法收集6例子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤的临床及病理资料,采用免疫组化EnVision法检测HMB45、SMA、S-100、CD-117和desmin。结果 6例患者平均年龄43.5岁,5例位于宫体,1例位于阔韧带。光镜下肿瘤细胞由透亮或嗜酸性的上皮样细胞构成,有些区域夹杂有分支样的血管,2例出现较多核分裂象与凝固性坏死。免疫组化显示6例HMB45均(+),SMA呈散在或弥漫(+)。2例术中见转移。6例患者随访5年均存活。结论子宫及阔韧带血管周上皮样细胞肿瘤的诊断依赖于形态学与免疫组化。其生物学行为需要进一步研究,但核分裂象与凝固性坏死可能是其恶性生物学行为的表现。

关键词：子宫阔韧带上皮样细胞病理学

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体外诱导牛BMSC向上皮样细胞分化的研究

畜牧与兽医 2012年第4期44卷 6-9页

作者：朱孟芝董雅娟龚宜超王文明刘玮柏学进青岛农业大学动物胚胎工程中心山东青岛266109 山东省黑牛繁育工程技术研究中心山东青岛266109 山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司山东淄博256306

为培育转基因肉牛提供种子细胞以及进一步丰富牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的多向分化潜能,利用细胞免疫荧光染色和分子生物学方法,初步探讨表皮生长因子和胰岛素体外诱导牛BMSC向上皮样细胞分化的可能... 详细信息

为培育转基因肉牛提供种子细胞以及进一步丰富牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的多向分化潜能,利用细胞免疫荧光染色和分子生物学方法,初步探讨表皮生长因子和胰岛素体外诱导牛BMSC向上皮样细胞分化的可能性。利用含细胞因子的诱导液对纯化稳定的P4代牛BMSC进行体外诱导,并对诱导后的细胞进行细胞角蛋白18的细胞免疫荧光观察和细胞角蛋白19的RT-PCR鉴定。结果表明,诱导后细胞经细胞角蛋白18免疫荧光染色后出现明显的荧光。RT-PCR结果显示诱导分化后细胞角蛋白19基因在细胞中表达。因此,在体外,表皮生长因子和胰岛素可诱导牛BMSC初步分化为上皮样细胞。

关键词：牛骨髓间充质干细胞表皮生长因子胰岛素上皮样细胞

山羊类胚胎干细胞的分离培养及其来源的上皮样细胞的培养

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山羊类胚胎干细胞的分离培养及其来源的上皮样细胞的培养

作者：刘艳华中农业大学

学位级别：硕士

胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ES细胞)是从附植前早期胚胎内细胞团(Inner cell mass, ICM)或附植后胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)分离、克隆出来的,经体外分化抑制培养的一种高度未分化的细胞。ES细胞具有全能性... 详细信息

胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ES细胞)是从附植前早期胚胎内细胞团(Inner cell mass, ICM)或附植后胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)分离、克隆出来的,经体外分化抑制培养的一种高度未分化的细胞。ES细胞具有全能性和多能性,是克隆动物、转基因动物、制备乳腺生物反应器等理想的候选细胞。除了某些品系的小鼠和人有较高的ES细胞建系成功率外,其他动物的建系率很低,而山羊至今还没有成功建系的报道。ES细胞的体外定向分化研究一直是干细胞研究领域的热点。理论上来讲,ES细胞可以分化为任何组织的细胞。目前已初步建立了心肌细胞、造血干细胞、神经细胞、内皮细胞和上皮细胞等体外分化模型。近年来研究发现,通过改变ES细胞的培养条件,可使其分化为上皮样细胞。将这些ES细胞来源的上皮样细胞经过基因修饰,移植到宿主乳腺组织后可长期生存并表达外源基因的策略,为研究动物乳腺反应器的制备提供了新的思路。本研究以武汉本地山羊为试验动物,通过对山羊进行超数排卵获得囊胚或桑椹胚,筛选更适合于山羊类ES细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法,有利于山羊类ES细胞长期传代;建立山羊类ES细胞来源的上皮样细胞的培养方法,为通过转基因干／前体细胞移植途径建立动物乳腺生物反应器提供细胞来源。试验结果如下：1.通过手术法获得45～60d的山羊胎儿,采用细胞法和组织块贴壁法培养山羊胎儿成纤维细胞,细胞传至20代以上,并对其增殖情况加以分析,为后期山羊类ES细胞的培养提供了饲养层细胞。2.采用小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast, MEF)、山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast, GEF)以及C2C12细胞作为饲养层细胞培养山羊类ES细胞。结果表明：与MEF(贴壁率为81.8%)和GEF(贴壁率为88.5%)相比,C2C12更有利于细胞贴壁(贴壁率为100%),但不利于维持细胞未分化状态,传至第3代细胞已分化完全。3.采用三种方法培养山羊类ES细胞：①全胚培养,当其发育为孵化囊胚后,在普通培养基中分割胚胎,以后每次都用此法传代;②全胚培养,当其发育为孵化囊胚后,在10倍浓度的LIF和SCF中分割胚胎,以后每次都用此法传代;③将获得的胚胎在酶中作用5～8min后,直接借助玻璃针分割胚胎。结果表明：将胚胎全胚培养至孵化囊胚阶段后,在高浓度细胞因子LIF和SCF中分割ICM,更有利于维持细胞的未分化状态;该细胞能被传至第8代。4.采用三种培养基培养山羊类ES细胞：①20% FBS+LIF+SCF+β-巯基乙醇;②20％FBS+LIF+SCF+胰岛素+β-巯基乙醇;③20％FBS+LIF+SCF+胰岛素+肝素+β-巯基乙醇。结果表明：与培养基中只添加LIF和SCF(传至第4代)相比,培养基中添加肝素和胰岛素更有利于细胞的生长(传至第9代)。5.对分离得到的部分山羊类ES细胞进行生物学鉴定。结果表明所分离的山羊类ES细胞具有典型的胚胎干细胞形态特征;核型正常;碱性磷酸酶染色呈阳性;RT-PCR检测表达胚胎干细胞特异性基因Oct-4和Nanog;免疫组化法检测特异性蛋白SSEA-1和Oct-4呈阳性反应;体外可以分化为上皮样细胞、空泡样细胞和心肌细胞。6.将培养至3～4代的山羊类ES细胞用玻璃针分割成小团块,继续培养在GEF上,20d不传代,在GEF分泌的细胞因子的作用下,山羊类ES细胞分化为上皮样细胞,并将所获得的上皮样细胞传至第11代。这些细胞核型正常。RT-PCR检测结果表明,这些上皮样细胞表达上皮细胞特异性基因K10、K18、K14。

关键词：山羊胚胎干细胞内细胞团分离培养上皮样细胞

体外诱导小鼠牙龈间充质干细胞向上皮样细胞分化

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体外诱导小鼠牙龈间充质干细胞向上皮样细胞分化

作者：王雯山东大学

学位级别：硕士

目的：创面迅速再上皮化是减少瘢痕形成,提高大面积上皮缺损修复率的关键,研究发现,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在一定条件诱导下可向上皮样细胞、肾上皮细胞、肠上皮细胞、角膜上皮细胞等方向分化,但随培养代数增加,BMSCs增殖速率减慢,细... 详细信息

目的：创面迅速再上皮化是减少瘢痕形成,提高大面积上皮缺损修复率的关键,研究发现,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在一定条件诱导下可向上皮样细胞、肾上皮细胞、肠上皮细胞、角膜上皮细胞等方向分化,但随培养代数增加,BMSCs增殖速率减慢,细胞形态改变,分化能力下降,基因改变,限制了BMSCs的大规模应用。近年学者从牙龈组织中分离培养出牙龈间充质干细胞(GMSCs),同BMSCs相比, GMSCs具有取材容易,增殖速率高,长期培养性能稳定,不易衰老等特性。实验显示,3D微球GMSCs注入小鼠静脉后,可归巢于病损区的上皮层和上皮下层,可能经历间充质-上皮转化(MET)分化为上皮样细胞修复上皮损伤。目前,诱导GMSCs向上皮样细胞分化及(MSCs的迁移机制尚无报道,本课题拟采用体外加入细胞因子的方法诱导小鼠GMSCs向上皮样细胞分化,探讨炎性因子IL-6、IL-10对小鼠GMSCs向上皮样细胞分化的影响,并研究SDF-1能否诱导小鼠GMSCs迁移,为将GMSCs作为新的种子细胞治疗上皮损伤提供一定实验基础。方法：1.酶解法培养小鼠牙龈间充质干细胞,流式细胞术检测表面标记物CDllb、CD45、CD34、CD31、CD105、CD140、CD29、CD44、sca-1。2.诱导培养液(lOuM ATRA+20ng/ml EGF+5%FBS+DMEM培养基)培养牙龈间充质干细胞14天后,观察细胞形态,细胞免疫组织化学、免疫荧光检测角蛋白18及波形蛋白表达情况。3.根据诱导条件的不同进行分组,将普通培养液、诱导培养液、诱导培养液+IL-6、诱导培养液+IL-10分别设为对照组、诱导组、IL-6诱导组、IL-10诱导组,诱导培养细胞14天后,免疫组化、免疫荧光检测各组细胞角蛋白18及波形蛋白表达情况,并计数免疫荧光阳性细胞比例,比较各组间有无差别。MTT测定各组细胞11天内的增殖曲线。4.使用transwell小室检测SDF-1能否诱导小鼠GMSCs迁移。实验组：下室为100ng/ml SDF-la+2%FBS+DMEM培养基,上室为2%FBS+DMEM培养基。对照组：上下室均为2%FBS+DMEM培养基。上室接种细胞,22h后DAPI染色,计数迁移至膜下表面的细胞数。结果：1.培养出小鼠牙龈细胞,为典型成纤维细胞形态,流式细胞术检测其间充质干细胞标记物阳性,证实该细胞为牙龈间充质干细胞,符合进一步实验条件。2.诱导培养液培养后,牙龈间充质干细胞形态呈多角形、类铺路石样,免疫组化、免疫荧光示角蛋白18、波形蛋白阳性,而阴性对照组角蛋白18阴性,波形蛋白阳性。3.免疫组化、免疫荧光检测诱导组、IL-6诱导组、IL-10诱导组角蛋白18、波形蛋白阳性,各组染色程度无明显差异,阳性细胞比例无明显差异(P>0.05)。对照组角蛋白18阴性、波形蛋白阳性。各实验组同对照组相比,角蛋白18阳性细胞比例有明显差异(P细胞比较无明显差别(P>0.05)。细胞增殖实验显示：第1、3、5、7、9天,各实验组A值均与对照组有明显差别(P0.05)。4.实验组同对照组相比,迁移至膜下表面的细胞数明显增多(P上皮细胞标记物角蛋白18,提示其向上皮样细胞分化,致炎因子IL-6、抑炎因子IL-10对此诱导条件下GMSCs表达角蛋白18无明显促进或抑制作用,为将GMSCs作为种子细胞修复上皮损伤提供了一定实验基础。研究GMSCs的迁移机制发现,一定浓度的SDF-1可明显诱导小鼠GMSCs迁移,GMSCs的迁移机制可用于促进GMSCs归巢至损伤部位,增强其修复损伤能力。

关键词：间质干细胞上皮样细胞细胞分化细胞迁移趋化因子CXCL12

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血管周上皮样细胞分化肿瘤的研究进展

临床与实验病理学杂志 2005年第1期21卷 115-116页

作者：王占东王小玲河北医科大学第四医院病理科石家庄050011

血管周上皮样细胞分化的肿瘤(neoplasms with perlvascular epithelioid cell differentiation，PEComa)是一组较少见组织学和免疫表型上具有血管周上皮样细胞特征的间叶肿瘤，瘤细胞胞质透明或嗜酸性颗粒状，免疫组化检测表达黑色素瘤... 详细信息

血管周上皮样细胞分化的肿瘤(neoplasms with perlvascular epithelioid cell differentiation，PEComa)是一组较少见组织学和免疫表型上具有血管周上皮样细胞特征的间叶肿瘤，瘤细胞胞质透明或嗜酸性颗粒状，免疫组化检测表达黑色素瘤抗体HMB45、Melan—A(A103)及肌源性抗体SMA。包括肝肾血管平滑肌脂肪瘤(angiomyolipoma，AML)、肺的透明细胞“糖”瘤(clear cell“sugar”tunlour of the ***)、

关键词：肿瘤上皮样细胞血管抗体分化瘤细胞肝肾透明细胞胞质表达