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MAPK信号通路在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉和不伴鼻息肉的黏膜上皮修复机制中的作用

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018年第21期32卷 1618-1622页

作者：王彤臧洪瑞李云川李丽娟李立峰武骏胡长龙首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科中心教育部省部共建重点实验室北京100730

目的:探讨细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)和慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)的黏膜上皮细胞修复中的作用。方法:通过MTT法检测正常对照组、CRSsNP组和CRSwNP组体外原代细胞培养的鼻窦上皮细胞... 详细信息

目的:探讨细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)和慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)的黏膜上皮细胞修复中的作用。方法:通过MTT法检测正常对照组、CRSsNP组和CRSwNP组体外原代细胞培养的鼻窦上皮细胞分别在加入表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)激酶抑制剂AG1478和胞外信号调节激酶ERK1/2抑制剂PD98059后的增殖水平;用Western blot法定量检测ERK1/2及其磷酸化水平的差异。结果:CRS黏膜上皮细胞的增殖基线水平和对EGF的增殖反应低于正常对照组。CRSsNP组:AG1478对EGF增殖作用的抑制明显大于PD98059。CRSwNP组:AG1478能够抑制EGF对上皮细胞的增殖作用,而PD98059没有明显抑制作用。CRS黏膜上皮细胞ERK1/2磷酸化率低于对照组,并且在CRSwNP中表达更低。结论:MAPK通路对鼻黏膜上皮细胞增殖作用在CRS中减弱,尤其是CRSwNP更弱,可能是CRS黏膜上皮细胞的修复能力受到抑制的原因之一。在CRSwNP中当MAPK通路被阻断时,可能有其他途径补偿了对上皮细胞的修复作用。

关键词：鼻窦炎上皮修复表皮生长因子受体细胞分裂素活化蛋白激酶信号通路

宫颈癌前病变电圈切除术后两型上皮修复情况研究

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广东医学 2007年第4期28卷 598-599页

作者：周晓霞任大宏遇桂芳肖奇志祝育德杨静周玉球广东省珠海市人民医院妇科 519000 广东省珠海市人民医院病理科 519000 广东省珠海市妇幼保健院检验科 519000

目的探讨宫颈癌前病变电圈切除术(LEEP)后两型上皮修复所新形成移行区变化及其与治愈率之间的关系。方法对60例阴道镜下活检确诊为宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)的患者进行LEEP及术后8个月后行电环活检,分别对切下组织分12象限进行病理切片... 详细信息

目的探讨宫颈癌前病变电圈切除术(LEEP)后两型上皮修复所新形成移行区变化及其与治愈率之间的关系。方法对60例阴道镜下活检确诊为宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)的患者进行LEEP及术后8个月后行电环活检,分别对切下组织分12象限进行病理切片,比较之间变化,于LEEP前及电环活检时同时进行高危型人乳头瘤病毒(HCⅡ-HPV DNA)检测及阴道镜检查。结果LEEP后病理:宫颈CINⅠ～Ⅲ(60例);鳞状上皮与柱状上皮(简称鳞柱上皮)之间交界分明(0例);固有膜厚5～10mm(57例);鳞柱上皮跳跃增生(50例),鳞状上皮下黏液腺体丰富(58例);鳞柱交界之间有少许上皮缺损0例。LEEP术后8个月活检病理:宫颈CINI共3例;治愈的57例,治愈率95%;鳞柱交界分明(51例),固有膜薄1～5mm(56例);鳞柱上皮呈跳跃增生0例;鳞柱交界上皮下见肉芽组织纤维及血管增多(57例);组织腺体减少80%～90%(57例);鳞柱交界之间有少许上皮缺损,以纤维组织肉芽填充(9例);黏液腺体和未成熟鳞化细胞被切除58例。LEEP前HCⅡ-HPV DNA阳性60例,术后阴性57例,治愈率95%;LEEP术前阴道镜下见厚的醋白上皮60例,LEEP后厚的醋白上皮0例。结论宫颈LEEP术后重建的宫颈组织学构型有显著性改变,具有特殊的生理意义。这种特殊的组织学构型,减少了细菌病毒感染的靶组织,提高了宫颈癌前病变治愈率。

关键词：宫颈癌前病变宫颈环形电刀电除术上皮修复靶组织

氯气诱导急性气管上皮损伤后修复机制的组织形态学研究

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中国呼吸与危重监护杂志 2018年第1期17卷 76-80页

作者：王程马云胜阎文柱锦州医科大学人体解剖学教研室辽宁锦州121000 抚顺市中心医院胸外科辽宁抚顺113006 锦州医科大学发育生物学教研室辽宁锦州121000

目的观察气管上皮细胞在修复氯气引起的急性气管上皮细胞损伤中的作用及其过程。方法取12只C57BL/6小鼠,通过氯气吸入法制备气管损伤模型,于氯气暴露的第2、4、7、10 d分别处死3只小鼠,分离收集气管组织。另取3只小鼠作为对照组。采用Ed... 详细信息

目的观察气管上皮细胞在修复氯气引起的急性气管上皮细胞损伤中的作用及其过程。方法取12只C57BL/6小鼠,通过氯气吸入法制备气管损伤模型,于氯气暴露的第2、4、7、10 d分别处死3只小鼠,分离收集气管组织。另取3只小鼠作为对照组。采用EdU标记细胞增殖情况。采用气管上皮基底细胞标志物角蛋白5(K5)、角蛋白14(K14)定位增殖修复细胞的位置以及表达情况,采用形态学分析测量增殖率以及上皮的恢复情况。结果对照组小鼠细胞增殖率非常低,所有的基底细胞都表达K5,大部分区域基底细胞未见K14表达。氯气暴露后导致上皮细胞的大量脱落。氯气暴露2~4 d后,表达K5和K14的基底细胞上细胞开始增殖,K14表达细胞大大增加。在细胞增殖的高峰时期,在修复区域的气管中只有极少数的纤毛细胞出现。上皮细胞在气管近端的修复速度快而且范围广。结论小鼠气管在氯气损伤后,残留的基底细胞发挥类似祖细胞的作用并重修构建修复了气管上皮。

关键词：氯气吸入急性肺损伤呼吸道上皮上皮修复

沉默信号调控因子1蛋白促进高糖环境下角膜上皮细胞损伤修复的实验研究

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沉默信号调控因子1蛋白促进高糖环境下角膜上皮细胞损伤修复的实...

作者：史大领青岛大学

学位级别：硕士

第一部分沉默信号调控因子1（Sirtl）在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达目的：探讨沉默信号调控因子（Sirt1）在1型糖尿病模型C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜和三叉神经节中的表达,为明确Sirt1与糖尿病性角膜病变的关... 详细信息

第一部分沉默信号调控因子1（Sirtl）在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达目的：探讨沉默信号调控因子（Sirt1）在1型糖尿病模型C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜和三叉神经节中的表达,为明确Sirt1与糖尿病性角膜病变的关系奠定基础。方法：取雄性C51BL/6-Ins2Akita+/J小鼠与同窝出生的野生型雄性C57BL/6-Ins2-/+小鼠各8只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组。分别于24周龄、28周龄、32周龄、36周龄、40周龄、44周龄、48周龄测量两组小鼠的体重、血糖、泪液分泌情况,同时行虎红染色观察泪膜及上皮情况;于48周龄时颈椎脱臼法处死,取小鼠的三叉神经节和角膜组织。采用苏木素-伊红染色显示两组小鼠的角膜和三叉神经节的组织病理学变化;行免疫组织化学法检测角膜和三义神经节中Sirt1蛋白的表达和定位;行荧光定量PCR法检测Sirt1mRNA在角膜和三叉神经节中的表达;行Western blot检测两组小鼠角膜和三叉神经节中Sirt1蛋白的相对表达量,并进行统计学分析。结果：与C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠相比,C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的体重明显较轻（t=22.784,P=0.000）,泪液分泌减少（t=10.693,P=0.000）,虎红染色着色明显。C57BL/6-Ins2Akita+J小鼠的三叉神经节细胞大小不均匀,排列较疏松,神经纤维排列较散乱,角膜上皮变薄、细胞层数减少;而C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠的神经节细胞大小、形态较为均一,排列紧密、整齐,神经纤维排列较整齐。荧光定量PCR显示,Sirt1mRNA在C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜的表达强度显著低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠（0.53±0.08vs.0.97±0.12）,差异有统计学意义（t=-5.863,P=0.003）;在C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠三义神经节的表达灰度为2.43±0.19,低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠（2.50±0.23）,但差异无统计学意义（t=0.582,P=0.611）.Western blot显示,C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜中Sirt1蛋白的表达明显低于野生型C57BL/6-Ins2+/+小鼠（0.778±0.017vs.1.306±0.014）,差异有统计学意义（t=33.141,P=0.001）;但Sirt1蛋白在两组小鼠的三叉神经节中的表达差异无统计学意义（1.100±0.016vs.1.108±0.018,t=0.431,P=0.708）. 结论：Sirt1在48周龄1型糖尿病C51BL/6-Ins2Akita+/J小鼠的角膜中的表达降低,提示Sirt1有可能参与糖尿病性角膜病变。第二部分过量表达Sirt1蛋白对高糖环境下角膜上皮损伤修复的影响目的：研究Sirt1对高糖环境下角膜上皮损伤修复的影响及其作用机制。方法：取雄性C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠20只与同窝出生的野生型雄性C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠5只分成五组：C57BL/6-Ins2+/+野生型小鼠角膜损伤不处理组、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜损伤不处理组、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜损伤结膜下注射生理盐水组（1OuL）、C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜损伤结膜下注射Ad-GFP组（10uL滴度为1011的重组GFP腺病毒）和C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜损伤结膜下注射Ad-Sirt1组（10uL滴度为1011的重组Sirt1腺病毒）。角膜上皮刮除后,立即结膜下注射相应物质。损伤48h后,通过Western blot分别比较前两组之问、后四组之间小鼠角膜组织中乙酰化p53、胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP3蛋白）、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）、乙酰化的蛋白激酶B （p-AKT）等蛋白的表达量,进而显示过量表达Sirt1对C57BL/6-Ins2Akita+/J小鼠角膜组织中p53、IGFBP3/IGF-1/AKT的表达的影响。通过荧光素钠染色并分别于伤后0h、24h、48h裂隙等下观察并照相显示过量表达Sirt1对糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复的影响。结果：糖尿病小鼠角膜上皮刮除后,荧光素钠染色结果表明结膜下注射重组SIRT1腺病毒的糖尿病小鼠48小时后角膜上皮损伤愈合的面积显著低于未进行SIRT1腺病毒注射组,说明过量表达Sirt1后促进了糖尿病小鼠角膜的损伤修复。与野生型小鼠相比,糖尿病小鼠的角膜组织中乙酰化p53、IGFBP3蛋白表达明显上调,而Sirt1、IGF-1R、p-AKT显著下调。结

关键词：沉默信号调控因子1 1型糖尿病糖尿病角膜病变上皮修复

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耳部术腔上皮缺损组织工程学修复的基础研究

耳部术腔上皮缺损组织工程学修复的基础研究

作者：张文瑾安徽医科大学

学位级别：硕士

耳部病变,例如耳部肿瘤、中耳胆脂瘤、外伤、先天性畸形等手术去除病变后可遗留局部皮肤缺损,形成的颞骨裸露骨面需要修复。研究发现,仍有3%-40%的患者术后上皮化进展缓慢或上皮化不全。组织液从骨壁渗透到中耳或乳突腔可引起细菌感染... 详细信息

耳部病变,例如耳部肿瘤、中耳胆脂瘤、外伤、先天性畸形等手术去除病变后可遗留局部皮肤缺损,形成的颞骨裸露骨面需要修复。研究发现,仍有3%-40%的患者术后上皮化进展缓慢或上皮化不全。组织液从骨壁渗透到中耳或乳突腔可引起细菌感染和肉芽组织增生,易于形成瘢痕组织,或造成术腔狭窄。临床上通常使用皮肤、骨膜瓣、骨粉、颞骨筋膜或者脂肪修复,也有部分同种异体或异种移植物。尽管这些修复材料的应用取得了一定的疗效,但是部分再次手术病人则存在供区损伤或组织数量不足的问题,目前仍未找到一种理化性质稳定、便于细胞定植,能支持颞骨皮肤结构与功能恢复的上皮修复材料,以及相关的技术方法与手段。本文旨在应用组织工程原理与技术将细胞和支架材料相结合,探索通过生物制造方法,构建组织工程化皮肤,替代和修复耳部术腔和颞骨创面皮肤。研究目的(1)建立体外分离培养脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的方法,并观察其形态及生物学特性,探讨其作为耳部术腔上皮组织工程种子细胞的可行性。(2)构建脂肪间充质干细胞聚合物(adipose-derived stem cell aggregates,ADSC aggregates)-细胞外基质(extracellular matrix,ECM)复合物补片(ADSC aggregates-ECM),观察ADSCs在ECM支架上复合培养时的生长状况,并探讨ECM作为组织工程支架材料的可行性。(3)构建新西兰兔耳廓和外耳道的皮肤缺损模型,并采用复合物补片和单纯ECM支架两种方式修复创面,比较两种方式修复创面愈合情况及炎症状况,探讨复合物补片促进创面愈合的作用和机制。研究方法(1)优化Zuk分离、纯化和培养ADSCs的方法,采用诱导多向分化、鉴定表面分子、绘制生长曲线等方法进行干细胞生物特性验证。(2)接种ADSCs于ECM支架上,采用扫描电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞术观察ADSCs在ECM支架上形成聚合物状况;RT-PCR技术检测ADSCs培养时自分泌活性因子情况。(3)采用手术剪除和打孔的方法建立新西兰兔耳廓和外耳道全层皮肤创伤模型。两种模型均随机分为3组,分别将复合物补片及单纯ECM支架移植入创面,设立空白对照组,分别于第2、4、7周在体和组织学观察3组术区的渗液、肉芽组织增生和感染情况,并计算创面愈合率;于第1、2周提取创面新生组织的蛋白,进行Western Blot检测,对比不同移植组促组织愈合的新生因子分泌情况。研究结果(1)ADSCs形态均一、呈纤维细胞样生长,具有成脂、成骨分化潜能。流式检测ADSCs高表达CD29,CD90,低表达CD14,CD45。细胞有明显的指数生长期。(2)ADSCs在ECM支架表面具有较好的粘附性,重叠生长,细胞间紧密连接,未出现大量凋亡。且ADSCs在ECM支架上分泌HGF、TGF-β、b FGF、EGF功能明显高于无支架组(P上皮愈合更近似周边组织,HE染色发现ADSC aggregates-ECM组较其他两组能形成正常的上皮类似结构。(4)在第1周和第2周,ADSC aggregates-ECM组和ECM组缺损部位分泌的b FGF EGF,HGF,VEGF和TGF-β1显著高于对照组。(5)耳廓创面模型中,术后第2周,ADSC aggregates-ECM组创面愈合率明显高于ECM组和对照组。组织学HE染色发现:对照组较另外两组创面浸润大量炎性细胞。第4周,三组创面皮肤均愈合,炎性细胞减少。第7周,三组创面瘢痕逐渐减退。ADSC aggregates-ECM组和ECM组瘢痕厚度均低于对照组(p上皮组织工程种子细胞。(2)ECM支架为细胞的生长、爬行提供了良好的微环境。同时对于细胞表达多种生长因子有更好的促进作用。是一种具有潜在应用价值的组织工程支架材料。(3)移植到创面后,ADSC aggregates–ECM和单纯的ECM支架均有利于耳部创面的愈合,且ADSC aggregates–ECM能降低创伤后炎症反应强度,促进创面愈合,减小瘢痕厚度,效果优于单纯的ECM支架组和空白对照组。本研究为修复耳部术后的颞骨上皮缺损提供了有意义的实验依据。

关键词：耳部组织工程上皮修复脂肪间充质干细胞细胞外基质共培养

上皮修复过程中产生的人乳头瘤病毒5型(HPV5)抗体

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医学信息 2001年第2期14卷 101-102页

作者：房武宁王兴元

改良处理低温甘油保存的羊膜对兔角膜碱化学伤后上皮修复作用的研究

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中国眼耳鼻喉科杂志 2021年第6期21卷 439-444页

作者：吴丹黎玥吴复跃项俊徐建江复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031 上海睿泰生物科技股份有限公司上海201114

目的探讨改良处理低温甘油保存的羊膜对兔角膜碱化学伤后上皮的修复作用。方法取健康新西兰大白兔30只,左眼为造模眼,用氢氧化钠溶液(1 mol/L,0.5 mL)制作角膜碱烧伤模型。将角膜碱化学伤兔随机分为A组、B组,每组各15只。A组为实验组,... 详细信息

目的探讨改良处理低温甘油保存的羊膜对兔角膜碱化学伤后上皮的修复作用。方法取健康新西兰大白兔30只,左眼为造模眼,用氢氧化钠溶液(1 mol/L,0.5 mL)制作角膜碱烧伤模型。将角膜碱化学伤兔随机分为A组、B组,每组各15只。A组为实验组,造模后使用改良处理低温甘油保存的羊膜行羊膜覆盖术;B组为对照组,造模后不行羊膜覆盖术。分别于造模后3、5、7、10、14 d,在2组中各随机选取3只新西兰兔,行裂隙灯显微镜检查、角膜上皮荧光素钠染色、眼前节照,并使用Image J软件计算角膜上皮缺损面积;同时观察角膜修复情况,取角膜组织行组织病理学检测。结果兔角膜碱化学伤后14 d,羊膜覆盖组平均角膜缺损面积显著小于空白对照组(P上皮结构较晚,且较实验组更易脱落。结论改良处理低温甘油保存的羊膜能促进兔眼表碱化学伤后上皮的修复,其治疗效果满意,易于运输、保存,值得推广应用。

关键词：羊膜兔角膜碱化学伤上皮修复

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尿道损伤后上皮修复过程的实验观察

北京医学 2005年第10期27卷 592-593页

作者：黄广林刘流王晓峰夏春雷刘洪洪北京积水潭医院泌尿外科 100035 北京大学人民医院泌尿外科河北省廊坊市安次区人民医院泌尿外科北京积水潭医院病理科

目的观察尿道损伤后上皮的修复过程,为提高手术效果寻求理论依据。方法采用8只成年雄犬,于阴茎中段切取3cm长一段尿道,然后尿道内留置支架管,并行膀胱造口术转流尿液。术后不同时段行尿道造影、光镜及扫描电镜检查,观察尿道上皮的修复... 详细信息

目的观察尿道损伤后上皮的修复过程,为提高手术效果寻求理论依据。方法采用8只成年雄犬,于阴茎中段切取3cm长一段尿道,然后尿道内留置支架管,并行膀胱造口术转流尿液。术后不同时段行尿道造影、光镜及扫描电镜检查,观察尿道上皮的修复情况。结果2周时尿道黏膜大部缺损,造影剂外渗明显;4、6周时创面已基本被上皮覆盖,但上皮厚薄不一且缺乏极性,造影剂仍有少量外渗;8周时创面被较厚的复层上皮覆盖,上皮形态均匀一致,与正常上皮无明显差别,无造影剂外渗。结论尿道上皮的修复是一个逐渐的过程,尿道上皮修复完全与否与尿外渗的有无关系密切,尿道手术后应根据有无尿外渗来确定拔除尿管的时间。

关键词：尿道损伤尿道上皮修复上皮修复修复过程实验观察造影剂外渗膀胱造口术手术效果置支架管

碱性成纤维生长因子促进角膜热烧伤上皮修复的疗效观察

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中国误诊学杂志 2003年第11期3卷 1658-1659页

作者：吴松兆李冬云王永淑尤怡河南省洛阳市中心医院眼科 471000

角膜热烧伤造成角膜坏死、溃疡、穿孔,导致视力损伤最大.近年来,碱性成纤维生长因子(bFGF)被广泛应用于临床治疗烧伤,我科使用bFGF滴眼液(珠海东大生物制药公司生产)促进角膜热烧伤创面愈合,并观察角膜愈后情况.现报告如下.

关键词：成纤维细胞生长因子角膜眼烧伤疗效观察上皮修复 bFGF滴眼液