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转化生长因子-β1与其受体阻断剂作用于人胆管癌细胞株后对转化生长因子-Smad轴的影响

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中华实验外科杂志 2018年第3期35卷 438-441页

作者：张文明边伟吕海涛王文斌刘三光张腾飞杜成旭河北医科大学第二医院肝胆外科石家庄050005

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）相关信号通路在胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法对胆管癌细胞株RBE细胞单独或联合应用TGF-β1及其受体阻断剂（TGFβRI）SB525334/SB431542，根据单独或联合用药共分为6个组。（1）观察... 详细信息

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）相关信号通路在胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法对胆管癌细胞株RBE细胞单独或联合应用TGF-β1及其受体阻断剂（TGFβRI）SB525334/SB431542，根据单独或联合用药共分为6个组。（1）观察细胞形态学改变。（2）Trasswell法检测RBE细胞迁移及侵袭性变化。（3）Western blot检测Smad4、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及Slug的蛋白表达变化。计量资料采用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。结果（1）TGF-β1引发RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变。（2）Transwell法迁移性改变：空白对照组为（85.66±7.76）个，TGF-β1组为（118.17±12.69）个，SB431542组为（53.00±5.51）个、TGF-β1＋SB431542组为（86.33±9.67）个，SB525334组为（52.50±7.45）个，TGF-β1＋SB525334组为（81.00±7.62）个。TGF-β1组比空白对照组，迁移细胞数目明显增多（P＝0.000），SB525334组、SB431542组比空白对照组，迁移细胞数目明显减少（P值均为0.000）。Transwell法检测侵袭性改变：空白对照组为（73.83±9.47）个，TGF-β1组为（127.83±7.33）个，SB431542组为（59.83±7.28）个、TGF-β1＋SB431542组为（79.67±7.31）个，SB525334为（55.67±7.26）个，TGF-β1＋SB525334组为（76.00±8.51）个。TGF-β1组比空白对照组，侵袭细胞数目明显增多（P＝0.000），SB525334组、SB431542组比空白对照组，侵袭细胞数目明显减少（P值分别为0.000、0.003）。（3）Western blot实验中TGF-β1组中Smad4蛋白的表达水平较空白对照组明显增高，差异有统计学意义（P＝0.000）。E-cadherin、N-cadherin、Slug蛋白的表达水平在TGF-β1组与空白对照组中比较差异均有统计学意义（其P值分别为0.044、0.001、0.001）；上述指标在SB431542组与空白对照组中比较差异均有统计学意义（其P值分别为0.001、0.000、0.000），其在SB525334组与空白对照组中比较差异均有统计学意义（其P值分别为0.001、0.000、0.000）。结论（1）TGF-β1可诱导RBE细胞的形态由上皮样向间质样转变。（2）TGF-β1可以促进REB细胞的迁移和侵袭作用，而TGFβRI可以阻断REB细胞的迁移和侵袭作用。（3）TGF-β1及TGFβRI能够影响N-cadherin、E-cadherin及Slug蛋白表达的变化：TGF-β1可促进N-cadherin、Slug蛋白表达的增加，促进E-cadherin蛋白表达的降低；TGFβRI可降低N-cadherin、Slug蛋白的表达，促进E-cadherin蛋白表达。

关键词：胆管癌上皮一间充质转化转化生长因子-β1 Smad4

Kruppel样因子17抑制肾癌786-0细胞迁移和侵袭及机制

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中华实验外科杂志 2016年第12期33卷 2672-2674页

作者：严奉奇王秦豪茹懿李霞武国军第四军医大学西京医院泌尿外科西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

目的探讨Kruppe1样因子17（KLF17）是否通过调控上皮-间充质转化（EMT）抑制786-0细胞的迁移侵袭能力。方法设计并合成特异性小干扰RNA（siRNA）下调肾癌细胞株786-0中KLF17的表达，并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移侵袭能力的... 详细信息

目的探讨Kruppe1样因子17（KLF17）是否通过调控上皮-间充质转化（EMT）抑制786-0细胞的迁移侵袭能力。方法设计并合成特异性小干扰RNA（siRNA）下调肾癌细胞株786-0中KLF17的表达，并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移侵袭能力的变化，通过Westernblot检测EMT相关分子表达水平变化。结果siRNA能有效下调肾癌786-0细胞株中KLFl7的蛋白及mRNA的表达量。细胞划痕实验结果显示下调KLF17表达后，细胞迁移能力增强（P〈0．01）；Transwell实验中阴性对照组穿膜细胞数为（18．16±2．21）个，而siRNA1组为（29．03±2．48）个（P〈0．01），siRNA2组为（28．93±3．00）个（P〈0．01）。KLF17-siRNA介导的基因沉默下调了上皮细胞表面标记E-钙黏蛋白（E-cadberin）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达，上调了间充质干细胞表面标记N-钙黏蛋白（N-cadherin）的表达。结论KLF17可通过调节EMT的进程影响肾癌细胞的迁移侵袭能力。

关键词：肾癌 Krtippel样因子17 迁移侵袭上皮一间充质转化

上调叉头框转录因子M1基因对人肿瘤细胞迁移侵袭及上皮．间充质转化的影响

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中华实验外科杂志 2016年第12期33卷 2748-2751页

作者：范钰金鑫蒋孟林陈琳蒋鹏程赵松兰江苏大学附属人民医院肿瘤研究所镇江212002 江苏大学附属人民医院妇科镇江212002

目的探讨上调叉头框转录因子M1（FoxM1）基因对人卵巢癌细胞迁移侵袭的影响及其分子机制。方法构建FoxM1过表达慢病毒载体。HO-8910细胞分为3组，空白对照组、空载对照组和FoxM1慢病毒过表达组。转染HO-8910细胞后，采用Westernblot方... 详细信息

目的探讨上调叉头框转录因子M1（FoxM1）基因对人卵巢癌细胞迁移侵袭的影响及其分子机制。方法构建FoxM1过表达慢病毒载体。HO-8910细胞分为3组，空白对照组、空载对照组和FoxM1慢病毒过表达组。转染HO-8910细胞后，采用Westernblot方法观察FoxM1蛋白表达，采用划痕修复试验检测癌细胞迁移能力，采用Transwell方法检测癌细胞侵袭能力，采用Westernblot法检测癌细胞E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白水平。结果与空白对照组和空载对照组比较，FoxM1过表达组FoxM1蛋白明显升高。划痕修复试验结果显示，空白对照组、空载对照组和FoxM1过表达迁移细胞迁移距离分别为（156．80±2．26）、（161，60±1.81）和（278．60±2．62）μm。统计学分析发现，与空白对照组比较，P〈0．01；Transwell侵袭试验显示，空白对照组、空载对照组和FoxM1过表达迁移细胞数分别为（68．56±1．69）、（67．27±1．36）和（126．38±1．56）个。统计学分析发现，与空白对照组比较，P〈0．01。Westernblot结果显示，与空白对照组比较，FoxM1过表达细胞组E-钙黏蛋白表达降低，而N-钙黏蛋白表达增高。结论FoxM1过表达可促进人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与促进上皮一间充质转化有关。

关键词：卵巢肿瘤叉头框转录因子1 迁移侵袭上皮一间充质转化

三阴性乳腺癌中上皮-间充质转化相关标记分子的研究

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中华实验外科杂志 2016年第6期33卷 1629-1631页

作者：胡波李文环郭哲姚鹏武汉市中心医院甲状腺乳腺外科 430014 武汉市中心医院皮肤科 430014

目的检测乳腺癌细胞中上皮．间充质转化（EMT）相关分子标志物如钙黏蛋白、波形蛋白、表皮生长因子受体（EGFR）、血小板源生长因子（PDGF）-D和核因子-KB（NF—KB），讨论它们与EMT之间的关系以及在乳腺癌进展中的作用。方法应用免疫... 详细信息

目的检测乳腺癌细胞中上皮．间充质转化（EMT）相关分子标志物如钙黏蛋白、波形蛋白、表皮生长因子受体（EGFR）、血小板源生长因子（PDGF）-D和核因子-KB（NF—KB），讨论它们与EMT之间的关系以及在乳腺癌进展中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测57例浸润性导管腺癌患者钙黏蛋白、波形蛋白、EGFR、NF-κB和PDGF-D的表达。患者分为3组：A[雌激素受体（ER）^＋和／或孕激素受体（PR）^＋，人类表皮生长因子受体-2（Her-2）／neu^-]、B（ER^＋和／或PR^＋，Her-2／neu＋）、C（三阴性：ER^-、PR^-、Her-2／neu^-）。免疫组织化学镜下阅片记录染色强度（0、＋、＋＋和＋＋＋）和阳性细胞百分比，并将数据进行统计分析。结果膜钙黏蛋白在所有57例中均表现为阳性（100％），然而，与A组比较，胞质钙黏蛋白在B组和C组有表达（B组：21％，C组：7％，A组：0％）。所有A组病例波形蛋白和EGFR均为阴性。三阴性乳腺癌病例中波形蛋白、EGFR和NF—KB的表达上调，与A组和B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论波形蛋白、EGFR和NF—KB在三阴性乳腺癌中表达明显上调，与这-类型肿瘤细胞的高侵袭特性-致。

关键词：三阴性乳腺癌上皮一间充质转化钙黏蛋白波形蛋白表皮生长因子受体血小板源生长因子-D

丙酮酸激酶M2亚型在肾癌迁移侵袭中的作用及其机制

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中华实验外科杂志 2017年第12期34卷 2057-2059页

作者：王新君白培明赵晓昆罗广承厦门大学附属中山医院泌尿外科 361004 中南大学湘雅二医院泌尿外科长沙410011

目的探讨敲低丙酮酸激酶M2亚型（PKM2）对肾癌细胞株ACHN迁移侵袭的影响及其机制。方法构建靶向PKM2基因的pLV载体，筛选稳定转染的细胞株。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测敲低PKM2对ACHN细胞增殖的影响。在Transwell小室的上室和... 详细信息

目的探讨敲低丙酮酸激酶M2亚型（PKM2）对肾癌细胞株ACHN迁移侵袭的影响及其机制。方法构建靶向PKM2基因的pLV载体，筛选稳定转染的细胞株。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测敲低PKM2对ACHN细胞增殖的影响。在Transwell小室的上室和下室之间不放置基质胶测定细胞的迁移能力，在Transwell小室的上室和下室之放置基质胶测定细胞的侵袭能力。通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot的方法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的变化。结果CCK-8实验结果显示敲低PKM2抑制了ACHN的增殖。对照组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为（3.493±0.179）和（3.553±0.185） nmol/106 cells/min，而shPKM2组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为（1.457±0.081）和（5.820±0.352） nmol/106 cells/min（P＝0.001，P＝0.005）。Transwell迁移实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为（62±6）个和（39±5）个（P＝0.001）。Transwell侵袭实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为（40±7）个和（26±6）个（P＝0.009）。通过Western blot和RT-qPCR检测shPKM2组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为1.560±0.110和2.534±0.342，而对照组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.833±0.070和1.312±0.284（P＝0.001，P＝0.009），shPKM2组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.340±0.110和1.631±0.123，而对照组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量为0.653±0.100和3.530±0.511（P＝0.022，P＝0.003）。结论敲低PKM2表达显著抑制了肾癌细胞的有氧糖酵解、增殖、迁移和侵袭能力，并影响了上皮-间充质转化（EMT）过程。

关键词：肾透明细胞癌丙酮酸激酶M2亚型迁移侵袭上皮一间充质转化

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表皮生长因子家族在心内膜垫发育中的作用

国际儿科学杂志 2012年第2期39卷 132-134页

作者：陈璇（综述）沈捷（审校）上海交通大学附属儿童医院心内科 200040

在胚胎发育早期，心脏房室管和流出道中的心内膜细胞经过上皮一间充质转化成为间充质细胞进入心胶，形成心内膜垫。表皮生长因子家族是调节上皮一间充质转化的分子家族之一，它包含数个配体和四个酪氨酸激酶受体（ErbB）。其中受体ErbB2... 详细信息

在胚胎发育早期，心脏房室管和流出道中的心内膜细胞经过上皮一间充质转化成为间充质细胞进入心胶，形成心内膜垫。表皮生长因子家族是调节上皮一间充质转化的分子家族之一，它包含数个配体和四个酪氨酸激酶受体（ErbB）。其中受体ErbB2和ErbB3对于心内膜垫的正常发育是必需的，其他受体及配体在心脏发育中也发挥不同作用。该文就表皮生长因子家族的各种受体和配体在心内膜垫发育中的作用作一综述。

关键词：心内膜垫上皮一间充质转化表皮生长因子家族