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L-苹果酸代谢与运动

中国运动医学杂志 2005年第4期24卷 509-511页

作者：梅郁张缨北京体育大学运动人体科学学院北京100084

1 苹果酸的生物学功能苹果酸(Malic Acid,简称MA),即羟基丁二酸,根据旋光性的不同可分为L型和D型两种.……

关键词： L-苹果酸运动生物学功能乙醛酸循环三羧酸循环 Acid 中间产物物体代谢丁二酸旋光性 CO2

三磷腺苷合酶抑制因子1基因敲除对小鼠巨噬细胞线粒体功能和三磷腺苷水平的影响

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新乡医学院学报 2019年第6期36卷 501-505页

作者：于晓晴钟根深熊熙文梁银明王辉章小英叶建平新乡医学院医学检验学院河南新乡453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心河南新乡453003 新乡医学院医学法医学院河南新乡453003 上海交通大学第六人民医院中心实验室上海201306

目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠巨噬细胞内三磷腺苷(ATP)水平及线粒体功能的影响。方法选取5只野生型C57BL/6小鼠为WT组,5只ATPIF1基因敲除小鼠为KO组。处死小鼠后,提取小鼠骨髓细胞进行培养,并诱导其分化成熟为... 详细信息

目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠巨噬细胞内三磷腺苷(ATP)水平及线粒体功能的影响。方法选取5只野生型C57BL/6小鼠为WT组,5只ATPIF1基因敲除小鼠为KO组。处死小鼠后,提取小鼠骨髓细胞进行培养,并诱导其分化成熟为骨髓来源巨噬细胞(BMDM)。在未加脂多糖(LPS)的基础状态及LPS刺激2、4h后收集细胞,应用ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平,应用细胞能量代谢分析仪检测细胞氧消耗率,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内三羧酸循环中关键酶丙酮酸激酶(PKm)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、柠檬酸合酶(CS)、α-酮戊二酸脱氢酶(OGDC)mRNA相对表达量。结果与WT组比较,在基础状态下KO组小鼠BMDM内ATP水平、基础氧耗量、用于ATP合成的氧耗量、最大氧耗量及PKm、IDH、CS、OGDCmRNA相对表达量显著增加(P三羧酸循环相关酶mRNA表达和线粒体氧化磷酸化水平。

关键词： ATP合酶抑制因子1 巨噬细胞线粒体三羧酸循环氧耗量

独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎患者临床疗效及关节液代谢组学变化

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中国实验方剂学杂志 2017年第23期23卷 159-165页

作者：荣兵李建贾峻潘明柱陈少青孙鹏天津中医药大学第一附属医院天津300193 内蒙古民族大学附属医院内蒙古通辽028000

目的:观察独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的临床疗效,并分析经独活寄生汤治疗前后关节液中小分子化合物的变化。方法:将73例天津中医药大学第一附属医院确诊的KOA患者随机分为观察组(42例)及对照组(31例)... 详细信息

目的:观察独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的临床疗效,并分析经独活寄生汤治疗前后关节液中小分子化合物的变化。方法:将73例天津中医药大学第一附属医院确诊的KOA患者随机分为观察组(42例)及对照组(31例),观察组给予独活寄生汤150 m L/次,2次/d,口服,对照组给予硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5 g/次,3次/d,口服,两组患者均治疗1个月,以膝关节视觉模拟评分法(visual analogue scale score,VAS),西安大略麦马斯特大学骨关节炎指数评分(The Western Ontario and Mc Maste Universities,WOMAC),自制膝关节肿胀评分及综合疗效治疗反应评价作为临床疗效判定指标;所有KOA患者均在治疗前及治疗后抽取关节液,采用超高效液相色谱仪与主成分分析法(principal components analysis,PCA)分析两组患者治疗前后关节液代谢差异物,并用EZinfo 2.0软件进行PCA潜在差异生物标记物。结果:治疗1个月后,两组患者VAS,WOMAC,自制膝关节肿胀评分均较治疗前有明显改善(P<0.05);治疗1个月后与对照组比较,观察组患者VAS,WOMAC,自制膝关节肿胀评分、综合疗效治疗反应评价均明显升高(P<0.05);与治疗前比较,两组治疗后膝关节关节液中泛酸、犬尿氨酸、酪氨酸表达降低,苯甲酸、柠檬酸及脯氨酸表达升高(P<0.05);与对照组治疗后比较,观察组关节液中泛酸、犬尿氨酸、酪氨酸表达更低,苯甲酸、柠檬酸及脯氨酸表达更高(P<0.05),此外观察组关节液中牛磺酸,β-隐黄素及赖氨酸表达明显升高(P<0.05)。结论:独活寄生汤可减少肝肾亏虚型KOA患者关节疼痛、肿胀程度,增加活动范围,改善KOA患者生活质量;同时随着肝肾亏虚型KOA患者症状的改善,关节液中泛酸、犬尿氨酸、酪氨酸、苯甲酸,柠檬酸,脯氨酸,牛磺酸,β-隐黄素及赖氨酸表达出现变化。

关键词：独活寄生汤膝骨性关节炎代谢组学三羧酸循环牛磺酸

人参皂苷Rb1对心力衰竭大鼠线粒体能量代谢的作用及机制研究

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人参皂苷Rb1对心力衰竭大鼠线粒体能量代谢的作用及机制研究

作者：葛倩文辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨人参皂苷Rb1对心衰大鼠线粒体能量代谢的作用及机制材料与方法:将阿霉素诱导心衰大鼠随机分为HF对照组、Gs-Rb1组、Ara-A-1组、Ara-A-2组（Ara-A+Gs-Rb1）、AICAR-1组和AICAR-2组（AICAR+Gs-Rb1）,并设立健康大鼠组成的对照组... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Rb1对心衰大鼠线粒体能量代谢的作用及机制材料与方法:将阿霉素诱导心衰大鼠随机分为HF对照组、Gs-Rb1组、Ara-A-1组、Ara-A-2组（Ara-A+Gs-Rb1）、AICAR-1组和AICAR-2组（AICAR+Gs-Rb1）,并设立健康大鼠组成的对照组。分组进行腹腔注射药物干预治疗后,采用超声心动图系统、HPLC法、ELISA法、分光光度法分别测量EF值、心肌高能磷酸盐、AMPK活性、心脏线粒体TCA循环关键限速酶活性。样本数据均以平均值±标准差（`x±S）表示,使用SPSS22进行单因素方差分析,P＜0.05为显著性差异。结果:1.和HF对照组相比,Gs-Rb1和AICAR可明显提高EF值（P＜0.05）,但二者不具有协同作用;Ara-A-1和2组则使EF值进一步下降（P＜0.001）。2.和HF对照组相比,Gs-Rb1和AICAR-1/2组使PCr、ADP、ATP水平,包括PCr/ATP比值明显增高（P＜0.01）,Ara-A-1/2组则会降低（P＜0.01）;ADP/ATP比值,HF对照组明显升高（P＜0.01）,Ara-A-1/2组则使其进一步升高（P＜0.01）,而Gs-Rb1和AICAR-1/2组表现为明显降低（P＜0.01）。3.和对照组相比,HF对照组AMPK活性明显升高（P=0.000）;AICAR-1/2组比HF对照组进一步改善AMPK活性（P＜0.05）,与之相对,Ara-A-1/2组则表现为严重抑制（P＜0.001）;Gs-Rb1表现与AICAR相似,显著上调AMPK活性（P=0.014）,但并没有发现二者具有协同作用（P＞0.05）。4.与对照组相比,HF对照组CS和ACO活性降低（P＜0.01）,Ara-A比HF对照组更加降低（P＜0.01）,Ara-A-1与2组并无明显差异（P＞0.05）;两种酶活性在Gs-Rb1和AICAR-1/2组中均被明显改善（P＜0.01）,但未发现组间差异（P＞0.05）。结论:1.人参皂苷Rb1能改善阿霉素诱导心衰大鼠三羧酸循环,从而改善线粒体能量代谢。2.人参皂苷Rb1对阿霉素诱导心衰大鼠线粒体能量代谢的改善是通过调节AMPK途径实现的。

关键词：代谢重塑线粒体人参皂苷Rb1 AMPK 三羧酸循环

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NO调节拟南芥对SO2的适应

NO调节拟南芥对SO2的适应

作者：李蕊山西大学

学位级别：硕士

NO作为植物体内重要的信号分子在植物生长发育和应答逆境胁迫过程中发挥重要作用。环境中高浓度的二氧化硫(SO)能影响植物正常的生理过程,本文以野生型拟南芥和硝酸还原酶(NR)缺失突变体(nia1nia2)为材料,对30mg/m-3 SO熏气处理下拟南... 详细信息

NO作为植物体内重要的信号分子在植物生长发育和应答逆境胁迫过程中发挥重要作用。环境中高浓度的二氧化硫(SO)能影响植物正常的生理过程,本文以野生型拟南芥和硝酸还原酶(NR)缺失突变体(nia1nia2)为材料,对30mg/m-3 SO熏气处理下拟南芥抗氧化生理指标、三羧酸循环关键酶、气孔开度、抗逆相关基因及microRNA(miRNA)的表达模式进行分析,利用nia1nia2突变体NO水平不足的特点,探讨NO在植物逆境生理中的作用。研究发现,非熏气组野生型拟南芥植株中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性高于nia1nia2突变体;SO暴露组,野生型和nia1nia2突变体植株中过氧化氢(H2O)和丙二醛(MDA)含量增加,突变体中H2O和MDA的增幅高于野生型。SO暴露组野生型和突变体植株中半胱氨酸(Cys)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著增加,SOD、POD、GPX和GST的活性诱导性增高,且野生型植株中上述指标的增幅高于突变体;NO供体硝普钠(SNP)喷淋nia1nia2突变体植株后植株地上组织中GSH含量及POD、GST活性提高;拟南芥逆境响应基因CAT3、CYP81D1、GSTU24、GPX7及抗病基因PR4、PAL3在野生型和nia1nia2突变体中差异表达,野生型中上述基因的转录水平高于nia1nia2突变体,且野生型和突变体中抗逆基因对SO响应程度不同。结果表明,植株体内NO水平与拟南芥细胞中抗氧化物水平有关,NO不足会影响植物逆境应答过程中抗氧化物水平的提高及抗逆相关基因转录表达,说明NO参与调节植株逆境响应中相关氧化还原反应和解毒过程。非熏气对照组中三羧酸循环过程中丙酮酸脱氢酶(PDH)活性在野生型和突变体中无显著差异,异柠檬酸脱氢酶(IDH)和α-酮戊二酸脱氢酶(OGDH)活性野生型高于突变体;SO暴露组野生型和突变体植株中PDH、IDH和OGDH活性均显著升高,且野生型酶活性增幅高于突变体。结果说明NO参与调节植株三羧酸循环过程,影响SO胁迫下植株物质代谢和产能过程。RT-PCR结果表明,SO胁迫能诱导拟南芥MIR39财表达量降低,其靶基因CSD1、CSD2表达量升高,其中野生型MIR398c转录下调及CSD2转录上调幅度高于突变体。S02暴露组拟南芥MIR393和MIR167基因表达上调,而其靶基因AFB2、AFB3、TIR1和ARF6、ARF8转录下调。其中,MIR393b、MIR167a、MIR167d基因的转录上调水平野生型大于突变体,miR393靶基因TIR1、AFB3及miR167靶基因ARF6转录下调幅度野生型高于突变体。说明虽然NO对不同miRNA调节程度不同,但NO参与诱导SO胁迫下拟南芥miRNA表达模式改变,miRNA对其靶基因进行负调控,通过提高植物抗氧化能力、抑制生长素信号途径,参与植物抗逆防御应答过程的调节。SO胁迫下,暴露组野生型拟南芥气孔开度显著降低,而突变体叶片气孔开度与对照组无显著性差异。SO胁迫能引起热胁迫,诱导拟南芥植株热激转录因子(Hsfs)及热激蛋白(Hsps)基因转录上调,其中野生型HsfA2转录上调水平显著高于突变体,综上说明NO参与SO胁迫下拟南芥气孔运动调节,并介导热激相关基因转录。本研究表明,NO参与调节SO逆境生理中拟南芥植株气孔运动,诱导抗氧化、三羧酸循环途径以及胁迫响应基因和miRNA转录水平提高,进而减少植物对SO的吸收、增强植株的抗氧化和代谢解毒能力,缓解胁迫对拟南芥植株造成的损伤,从而增强拟南芥植株对SO胁迫的适应性。

关键词：拟南芥 NO SO2 抗氧化三羧酸循环抗逆基因 microRNA

实践十号返回式卫星搭载对水稻氧化应激效应的研究

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实践十号返回式卫星搭载对水稻氧化应激效应的研究

作者：曾德永哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

氧化应激会导致植物体内活性氧增多,产生脂质过氧化,影响抗氧化酶系活性、能量代谢等。为了探索空间环境对植物氧化应激效应的影响,本课题在实践十号返回式卫星三个不同位置(SPA、SPB、SPC)搭载模式植物东农423水稻种子,返回地面后进行... 详细信息

氧化应激会导致植物体内活性氧增多,产生脂质过氧化,影响抗氧化酶系活性、能量代谢等。为了探索空间环境对植物氧化应激效应的影响,本课题在实践十号返回式卫星三个不同位置(SPA、SPB、SPC)搭载模式植物东农423水稻种子,返回地面后进行生物学效应研究。本论文从株高、抗氧化水平、关键酶基因的表达等层面研究空间飞行对水稻不同发育阶段线粒体功能的生物学效应,获得如下结果:1.通过株高的测量进行表型研究。在三叶期,空间飞行后水稻株高高于对照组,差异显著。抽穗期时空间飞行组与对照株高无显著差异。经空间飞行后水稻在三叶期时表现出低剂量辐射刺激效应,而这种效应在之后的生长发育阶段逐步得到修复。2.通过DCF方法对活性氧(ROS)进行测定,结果表明空间飞行组ROS含量在三叶期低于对照组,在分蘖期和成熟期高于对照组,差异显著。这说明氧化应激效应发生在三叶期并一直持续到水稻的成熟期。但三叶期的氧化应激效应变化规律与其它时期不同,推测在三叶期时氧化应激效应相关因子的表达可能不同。3.通过分光光度法对氧化应激相关酶的酶活性进行测定,结果表明空间飞行组三个不同飞行轨道在三叶期时超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活力显著高于对照组,与三叶期ROS水平趋势一致。在分蘖期空间飞行组SOD活力高于对照组,与分蘖期ROS含量变化趋势一致。但在分蘖期APX活力在SPB组中显著低于对照组,这说明在分蘖期时水稻体内的ROS主要为HO,且与不同的位置有关。在成熟期空间飞行组中SPA组SOD活力显著低于对照组,表明成熟期时水稻的氧化应激效应主要受其它过氧化氢清除酶活力的影响。由于植物产生ROS的主要场所是线粒体,所以对线粒体相关基因编码的酶进一步研究。4.采用qRT-PCR方法对线粒体氧化应激相关酶基因的表达量进行检测。结果表明各实验组线粒体氧化应激相关酶基因的表达与水稻的抗氧化应激酶活水平及ROS含量并不一致,推测空间飞行组中氧化应激发生的主要场所不完全是线粒体,可能是因为空间飞行对水稻的线粒体本身产生了较大影响,从而也影响了氧化应激的表现。5.采用qRT-PCR方法对线粒体三羧酸循环关键酶基因的表达进行验证研究。结果表明空间飞行影响了线粒体三羧循环关键酶基因的表达,说明空间飞行产生氧化应激引起了线粒体本身的功能障碍,从而在三叶期时表现出三羧酸循环速率受到抑制,而分蘖期时三羧酸循环速率增加,则是氧化应激有所缓解导致线粒体功能的到部分修复的原因。综上,可以表明空间飞行对水稻产生了氧化应激效应。同时发现在三叶期时氧化应激效应发生的主要场所并不仅仅是在线粒体,通过对三羧酸循环关键酶基因表达量的分析,确定了空间飞行产生的氧化应激效应将引起线粒体功能障碍。本研究为后续研究空间环境对水稻代谢产物以及能量代谢的影响提供了基础,同时为后续研究空间飞行对水稻能量对线粒体功能紊乱和空间生物学效应关系的研究具有重要的理论价值。

关键词：水稻实践十号氧化应激抗氧化酶系三羧酸循环

柠檬酸循环调节金黄色葡萄球菌金黄色素的产生

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柠檬酸循环调节金黄色葡萄球菌金黄色素的产生

作者：李晗第二军医大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌是引起院内感染和社区感染的重要人类病原菌。典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下可见排列成葡萄串状，因此被称为葡萄球菌。同时，由于它能产生一种金黄色的类胡萝卜素而获得了金黄色葡萄球菌的名称。这种金黄色的类... 详细信息

金黄色葡萄球菌是引起院内感染和社区感染的重要人类病原菌。典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下可见排列成葡萄串状，因此被称为葡萄球菌。同时，由于它能产生一种金黄色的类胡萝卜素而获得了金黄色葡萄球菌的名称。这种金黄色的类胡萝卜素的色素（Staphyloxanthin）增强了细菌对氧化胁迫和对宿主嗜中性粒细胞吞噬的抵抗能力，可以帮助细菌逃避宿主的免疫系统，与细菌的毒力有着密切的联系。在我们实验室先前的研究工作中，我们发现转座子插入到柠檬酸合成酶citZ基因中导致金黄色葡萄球菌产生金黄色色素的能力显著增强（在不含葡萄糖的TSB培养基中），暗示着金黄色葡萄球菌的柠檬酸循环对金黄色色素的产生具有重要的调节功能。在我的研究工作中，主要研究内容及结果如下： 1、通过分子克隆、功能互补证实了citZ基因的突变影响了金黄色色素的产生。在调节方式上，发现在不含葡萄糖的TSB的培养基中，citZ基因负调节金葡菌金黄色色素的产生;而在含葡糖糖的TSB培养基中，citZ基因正调节金葡菌金黄色色素的产生。 2、通过分子克隆、功能互补进一步证实了柠檬酸循环途径中另一个关键基因，citG基因，也调节了金黄色葡萄球菌金黄色色素的产生并与citZ基因有类似的调节方式。 3、通过检测金黄色葡萄球菌中乙酰辅酶A的含量，发现在不含葡萄糖的TSB的培养基中，citZ基因的突变导致了乙酰辅酶A积累。而在含葡萄糖的培养条件下，citZ基因的突变并没有引起乙酰辅酶A的积累;相反，与野生型菌株相比，citZ基因突变体中乙酰辅酶A的含量显著减少5倍左右。 4、利用分子克隆、功能互补证实了甲羟戊酸途径中ispA基因是金黄色葡萄球菌产生金黄色色素所必须的。 5、利用HPLC分析甲羟戊酸途径中的代谢产物。发现在不含葡萄糖的TSB的培养基中，citZ基因的突变导致有关甲羟戊酸途径中的代谢产物的累积。 6、利用基因表达谱分析，发现citZ基因的突变影响了209个基因的表达。其中41个相关的基因上调;168个相关的基因下调。在上调的基因中有10个基因是与转运相关的，13个基因与代谢相关，7个基因与胁迫相关，4个基因与调节功能相关，假设蛋白的有9个基因涉及其他的功能有5个基因;在下调的基因中有35个基因是与转运相关的，14个基因与毒素表达相关，18个基因与脂肪酸代谢相关，16个基因与碳水化合物代谢相关，5个基因与甘油代谢相关，5个基因与三羧酸循环相关，2个基因与尿素代谢相关，3个硝酸盐代谢相关，7个基因与调节功能相关，假设蛋白的有9个基因涉及其他的功能有3个基因。其中三羧酸循环涉及的5个基因可能与色素合成相关。 7、动物感染实验发现citZ基因的突变导致细菌的致病能力显著降低。这些结果初步表明柠檬酸循环可能通过调节乙酰辅酶A的流向进入甲羟戊酸途径，再进入色素合成途径，从而调节金黄色色素的产生;而且，柠檬酸循环与细菌的致病性密切相关。

关键词：金黄色葡萄球菌三羧酸循环乙酰辅酶A 甲羟戊酸途径色素

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大蒜绿变色素生物合成途径的研究

大蒜绿变色素生物合成途径的研究

作者：牟聪华山东农业大学

学位级别：硕士

大蒜(Allium Sativum L.)为百合科葱属植物,主要食用部分为大蒜鳞茎,大蒜味道鲜美、营养丰富、药用价值高,不仅是我们日常生活中不可缺少的调味品,还是具有多种生理活性的功能食品。除鲜食外,大蒜还经常加工成蒜泥、蒜汁、脱水蒜片、蒜... 详细信息

大蒜(Allium Sativum L.)为百合科葱属植物,主要食用部分为大蒜鳞茎,大蒜味道鲜美、营养丰富、药用价值高,不仅是我们日常生活中不可缺少的调味品,还是具有多种生理活性的功能食品。除鲜食外,大蒜还经常加工成蒜泥、蒜汁、脱水蒜片、蒜粉等制品,但在加工过程中常常出现绿变现象,严重影响了产品品质。而大蒜绿色素是“腊八蒜”的主要呈色物质,并经过几百年的传统饮食习俗验证了其安全性,具有天然色素开发的潜质,可作为重要添加剂,应用于食品、制药等行业,发展潜力巨大。研究大蒜绿色素的生物合成途径对于解释大蒜绿变机理,控制蒜制品加工过程中绿变现象及开发天然色素,促进大蒜产业的发展具有重要意义。本试验以大蒜鳞茎为原料,从植物生理代谢的中心环节三羧酸循环入手,对温度、三羧酸循环(TCA)、胆色素原(PBG)与大蒜绿变之间的关系进行了研究,探讨大蒜体内生理生化变化,从代谢角度探索大蒜绿变机理,为大蒜绿变的机理及其生产上控制绿变发生提供新的理论依据。主要研究结果如下:1.三羧酸循环对大蒜绿变的影响试验采用叠氮化钠对大蒜进行处理,抑制三羧酸循环的顺利进行,试验结果表明,经叠氮化钠处理的大蒜不易发生绿变现象,且随叠氮化钠浓度的增大,大蒜绿变强度逐渐降低;采用液相色谱法测定大蒜绿变前后三羧酸循环几种重要的稳定中间物的含量,结果表明大蒜绿变后柠檬酸、α-酮戊二酸、延胡索酸含量均有所增加,苹果酸含量降低;使用不同浓度的Ca2+处理大蒜,调节三羧酸循环,随着Ca2+浓度的增加,大蒜绿变程度不断增大,循环中间物柠檬酸、α-酮戊二酸的含量明显增高,且与绿变程度呈极显著正相关,延胡索酸的含量则明显降低,苹果酸的含量无明显变化,推测TCA影响大蒜的绿变过程,其影响机理可能是三羧酸循环中间物参与其他代谢途径,所形成的物质可为大蒜绿色素的合成提供前体物质。2. PBG对大蒜绿变的影响试验对吡咯化合物胆色素原对大蒜绿变的影响进行了研究,结果表明随着贮藏时间延长,大蒜中δ-氨基酮戊酸(ALA)及胆色素原(PBG)的含量均不断增多,大蒜绿变强度不断增大,PBG含量与大蒜绿变强度呈极显著正相关;不同贮藏期内经叠氮化钠处理后的大蒜在绿变强度降低的同时,大蒜中PBG也有显著降低,且相同贮藏期内PBG含量随着叠氮化钠浓度的增大而逐渐降低;使用不同浓度的Mg2+处理大蒜,随着Mg2+浓度增大,大蒜中ALA含量逐渐降低,PBG含量逐渐增加,大蒜绿变强度逐渐增大;使用钙离子刺激大蒜绿变与自然条件下大蒜绿变比较,观察绿变前后大蒜中PBG的含量变化,结果表明大蒜绿变前PBG的含量明显高于绿变后的含量;分别提取PBG与大蒜素,再使两者反应,可产生同蒜泥绿色素提取液具有相同特征吸光值的绿色物质,因此PBG与大蒜绿变有显著关系,是大蒜绿色素形成的重要参与物质,为绿色素形成提供吡咯环。3.温度对大蒜绿变的影响试验分别测定了室温及冷藏(0～4℃)条件下大蒜的绿变强度,结果表明,随着贮藏时间的延长,不同贮藏条件下大蒜绿变强度均不断增大,在相同的贮藏期内,冷藏条件下贮藏的大蒜其绿变强度明显高于室温条件下贮藏大蒜的绿变强度,因此,低温贮藏可以促进大蒜绿变。其促进机理在于低温条件下可促使大蒜中PBG含量的积累,从而为大蒜绿色素提供更多的前体。

关键词：大蒜绿变强度三羧酸循环胆色素原

持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠的保护作用

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持续去甲肾上腺素输注对早期脓毒症大鼠的保护作用

作者：吴丹广州医学院

学位级别：硕士

目的脓毒症(sepsis)是由感染引起的炎症反应综合征(systemic inflammatoryresponse syndrome,SIRS)，其发病率和死亡率都很高。脓毒症休克是脓毒症患者的主要的并发症之一，常导致多器官功能衰竭，甚至死亡。在脓毒症休克中，儿茶酚胺... 详细信息

目的脓毒症(sepsis)是由感染引起的炎症反应综合征(systemic inflammatoryresponse syndrome,SIRS)，其发病率和死亡率都很高。脓毒症休克是脓毒症患者的主要的并发症之一，常导致多器官功能衰竭，甚至死亡。在脓毒症休克中，儿茶酚胺类（肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺）药物对于升高血压和稳定平均动脉压和心输出量有重要作用。2008年国际脓毒症指南将去甲肾上腺素作为液体复苏和多巴胺治疗失败后的进一步治疗措施。近年来研究发现去甲肾上腺素不仅可以用来升高平均动脉压，也能降低炎症因子和氧化应激的水平、改善微循环和线粒体呼吸功能，但目前仍存在争议。且随着对脓毒症认识的逐步加深，目前认为脓毒症导致线粒体功能障碍的可能机制包括微循环障碍、炎症因子的损伤作用、氧化应激作用、一氧化氮过度表达和线粒体DNA损伤等。由此可见，去甲肾上腺素对危重病(尤其是脓毒症)患者有一定的的保护和恢复作用。此外，肝脏是机体进行物质和能量代谢的重要器官，并且在脓毒症早期极易受损。本动物实验探讨持续灌注低剂量去甲肾上腺素干预对早期脓毒症大鼠血清炎症因子、肝脏氧化应激水平和线粒体呼吸功能的影响及其相关机制，并找出NE的适宜剂量，为临床上减少脓毒症严重并发症的发生率和降低脓毒症病死率提供新的方法和思路。方法 1.建立动物模型及分组模型：脓毒症模型采用腹腔注射10mg/kg脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）建立。分组：40只SD大鼠随机分为5组（各组大鼠在实验前20-24h行右颈外静脉置管术）：正常对照组（n=8）：腹腔注射生理盐水10ml/kg（与实验组LPS量一致），同时持续泵注生理盐水1ml/h;内毒素组（n=8）：腹腔注射LPS10mg/kg，同时持续泵注生理盐水1ml/h;去甲肾上腺素干预组（n=3*8，低剂量组、中剂量组和高剂量组各8只）：腹腔注射LPS10mg/kg，同时持续泵注去甲肾上腺素生理盐水溶液1ml/h，去甲肾上腺用量分别为0.06、0.3、0.6ug/kg/min。 2.检测指标及方法 (1)大鼠一般情况：观察注射LPS前20min及注射后2h、6h、12h和24h的肛温、心率和呼吸频率。 (2)大鼠炎症反应指标：运用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法（ELISA法）检测注射LPS(或生理盐水)后2h、6h的大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-10的浓度。 (3)大鼠生化指标：肝功能指标：运用全自动生化分析仪检测注射LPS（或生理盐水）后24h的大鼠血清ALT和AST水平。 (4)大鼠肝脏粒体损伤相关指标（注射LPS或生理盐水后24h）： ①采用差速离心法提取大鼠肝脏线粒体，JC-1染料染色，流式细胞仪检测肝脏线粒体肿胀程度和线粒体膜电位。 ②运用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法（ELISA法）检测大鼠肝脏异柠檬酸脱氢酶活性和线粒体丙酮酸脱氢酶的相对活性。 ③运用比色法检测大鼠肝脏线粒体氧化应激相关指标（SOD、MDA、NO、iNOS）。 ④电镜观察大鼠肝脏线粒体损伤状况，按照Flameng分级方法对线粒体进行半定量评分。 3.统计方法获得的数据SPSS17.0统计软件分析，结果用均值±标准差(±s)表示;多组间比较采用单因素方差分析，在多样本均数比较差异具有统计学意义时进行均数两两比较，方差齐性者采用LSD法分析组间差异，方差不齐者采用Games-Howell法分析组间差异;α值界定为0.05。结果 1.动物一般情况：内毒素组和去甲肾上腺素干预组均出现脓毒症相关症状体征。 2.大鼠炎症反应指标：（1）各组大鼠血清TNF-α水平的比较 a、腹腔注射LPS（或生理盐水）后2h血清TNF-α水平：与正常对照组相比，内毒素组、干预组（低剂量和中剂量组）血清TNF-α水平显著升高(P=0.000、P=0.001、P=0.042);与内毒素组相比，干预组（中剂量和高剂量组）血清TNF-α水平显著降低(P=0.037，P=0.039）;b、腹腔注射LPS（或生理盐水）后6h各组血清TNF-α水平均检测不到。（2）各组大鼠血清IL-1β水平的比较 a、腹腔注射LPS（或生理盐水）后2h血清IL-1β水平：与正常对照组相比，内毒素组、干预组（低剂量组）血清IL-1β水平显著升高(P=0.07，P=0.04);与内毒素组相比，干预组（中剂量组）血清IL-1β水平显著降低(P=0.02）， b、腹腔注射LPS（或生理盐水）后6h血清IL-1β水平：与正常对照组相比，内毒素组血清IL-1β水平显著升高(P=0.033);与内毒素组相比，干预组（中剂量组）血清IL-1β水平显著降低(P=0.041）。（3）各组大鼠血清IL-10水平的比较 a、腹腔注射LPS（或生理盐水）后2h血清IL-10水平：与正常

关键词：脓毒症内毒素线粒体去甲肾上腺素肝脏大鼠细胞因子氧化应激三羧酸循环