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胃癌组织微小RNA-181d-5p和三基序蛋白22表达与患者术后5年内生存相关性研究

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陕西医学杂志 2024年第6期53卷 848-852,857页

作者：王首星刘院刚温进平李欣杨朝鑫邯郸市第一医院普通外科河北邯郸056002 邯郸市第一医院消化内科河北邯郸056002 邯郸市第一医院全科医学科河北邯郸056002

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p... 详细信息

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达。患者术后随访5年,记录生存情况。Starbase数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系。比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异。分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P22具有靶向结合位点,miR-181d-5p可负向调控TRIM22表达。miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系。

关键词：胃癌微小RNA-181d-5p 三基序蛋白22 预后相关性影响因素

HIV结构蛋白p24与三基序蛋白22胞内定位及出胞研究

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现代免疫学 2016年第3期36卷 213-218页

作者：孙大康宋向芹安新业程艳丽滨州医学院附属医院临床医学实验室滨州256603 滨州医学院附属医院检验科滨州256603 滨州医学院附属医院心血管内科滨州256603

比较p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRed-Monomer三种荧光蛋白的表达强弱,观察p24-DsRed1与TRIM22-EGFP结合物在细胞中的分布特点。构建pDsRed1-N1-p24及pDsRed2-N1-p24真核表达载体,转染HEK293T细胞,经荧光显微镜比较三种p24-DsRed荧光偶联蛋白的表达强度。选择荧光强度最强的pDsRed1-N1-p24与pEGFP-N3-TRIM22共转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察两者结合物在细胞中的分布特点。结果显示,经荧光显微镜检测,转染48h后红色荧光蛋白强度由大到小依次为p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRedm。在HEK293T细胞中共转染p24-DsRed1和TRIM22-EGFP,发现两者存在共定位关系,有意思的是两者的结合体能以出胞形式脱离细胞。结果表明,p24-DsRed1荧光蛋白强度显著高于p24-DsRed2和p24-DsRedm,TRIM22-p24结合物能以出芽形式脱离细胞。

关键词： HIV衣壳蛋白p24 三基序蛋白22 DsRed 出芽

TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位研究

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西安交通大学学报（医学版） 2019年第3期40卷 382-386页

作者：安新业纪冰孙大康滨州医学院附属医院检验科山东滨州256603 滨州医学院附属医院临床医学实验室山东滨州256603

目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。... 详细信息

目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。通过激光共聚焦xyz轴扫描,经ImageJ 1.50i软件进行3D结构重建,观察p24-Dsred1在U-251细胞中的分布特点。将pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体在U-251细胞中共表达,观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1是否存在共定位关系。结果单独转染pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP和p24-DsRed1在U-251细胞的胞体或突起中均有较高水平的表达;且3D结构重建显示外源性p24-DsRed1可迁移至U-251细胞的足突。在U-251细胞共转染pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP与p24-DsRed1存在共定位关系,并能以出胞形式脱离细胞。结论 TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中存在共定位关系。

关键词： HIV 衣壳蛋白p24 三基序蛋白22 共定位脑胶质瘤细胞

Ⅰ型干扰素诱导表达的TRIM22引发线粒体交联促进心肌细胞凋亡

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Ⅰ型干扰素诱导表达的TRIM22引发线粒体交联促进心肌细胞凋亡

作者：宋双滨州医学院

学位级别：硕士

研究目的:研究Ⅰ型干扰素是否促进心肌细胞TRIM22表达增加,诱发心肌细胞凋亡,并探讨其细胞生物学作用机制。研究方法:首先用不同浓度的IFNα刺激人心肌细胞,经流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,观察心肌细胞凋亡与IFNα的剂量相关性。然... 详细信息

研究目的:研究Ⅰ型干扰素是否促进心肌细胞TRIM22表达增加,诱发心肌细胞凋亡,并探讨其细胞生物学作用机制。研究方法:首先用不同浓度的IFNα刺激人心肌细胞,经流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,观察心肌细胞凋亡与IFNα的剂量相关性。然后经Realtime-PCR、Western Blot检测IFNα在不同刺激浓度、不同刺激时间对心肌细胞TRIM22的mRNA及蛋白表达水平的影响,并观察TRIM22 mRNA表达与IFNα是否呈剂量依赖性或时间依赖性。最后通过质粒转染建立过表达TRIM22心肌细胞模型,经流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;并通过线粒体特异性探针MitoTracker-Deep Red染色,经激光共聚焦显微镜观察TRIM22与线粒体的共定位情况及对线粒体的影响。研究结果:流式细胞术检测发现IFNα可诱导心肌细胞凋亡,且呈剂量依赖性。Realtime PCR检测发现,IFNα刺激心肌细胞6 h后TRIM22 mRNA表达显著上调,12 h达最高,随后逐渐下降;同时发现IFNα刺激心肌细胞后TRIM22 mRNA高表达呈剂量依赖性。Western Blot检测进一步验证了不同浓度的IFNα均可显著促进心肌细胞中TRIM22蛋白的表达。心肌细胞转染TRIM22质粒后,经Western Blot检测验证TRIM22转染组心肌细胞中TRIM22蛋白表达显著升高,然后通过流式细胞术检测发现过表达TRIM22可诱导心肌细胞凋亡,提示过表达TRIM22能促进心肌细胞凋亡;同时激光共聚焦检测发现TRIM22-EGFP以团块状分布在胞浆和胞核中,并与线粒体存在共定位关系,可通过与线粒体交联,诱导心肌细胞凋亡小体的出现。研究结论:过表达的TRIM22通过引发心肌细胞线粒体交联,影响线粒体的正常功能,促进心肌细胞凋亡;IFNα诱导人心肌细胞高表达TRIM22,促进心肌细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性,从而在心肌炎心肌细胞损伤中发挥重要作用。

关键词： Ⅰ型干扰素三基序蛋白22 心肌细胞心肌炎细胞凋亡

miR-376a通过调控TRIM22、CDC14A水平影响非小细胞肺癌顺铂耐药性的作用机制研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第12期 0172-0175页

作者：郝光军刘东梅刘青李莉席俊峰榆林市第一医院陕西榆林719000

探讨miR-36a通过调控三基序蛋白22(TRIM22)、细胞分裂周期蛋白14A(CDC14A)水平影响非小细胞肺癌顺铂耐药性的作用机制。方法选择2019年6月-2021年12月非小细胞肺癌患者60例,收集入组病例病灶组织及癌旁组织;采用实时荧光定量PCR法测定... 详细信息

探讨miR-36a通过调控三基序蛋白22(TRIM22)、细胞分裂周期蛋白14A(CDC14A)水平影响非小细胞肺癌顺铂耐药性的作用机制。方法选择2019年6月-2021年12月非小细胞肺癌患者60例,收集入组病例病灶组织及癌旁组织;采用实时荧光定量PCR法测定不同组织中miR-36a mRNA水平,并分析其与临床病理关系;通过可过表达miR-36a的慢病毒感染A549细胞及体外调控miR-36a水平,感染后给予顺铂处理;采用MTT试验测定感染细胞对顺铂耐药性;采用免疫组化试验测定不同细胞TRIM22、CDC14A蛋白水平。结果非小细胞肺癌病灶组织中miR-36a mRNA表达水平低于癌旁组织中(P22、CDC14A蛋白水平低于LV-control细胞中(P22、CDC14A蛋白影响肺癌细胞对顺铂敏感性。

关键词： miR-36a 非小细胞肺癌三基序蛋白22 细胞分裂周期蛋白14A 顺铂耐药性

pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达

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免疫学杂志 2015年第7期31卷 557-561页

作者：安新业程艳丽孙大康孟玮李彩玉滨州医学院附属医院检验科 256603 滨州医学院附属医院心血管内科 256603 滨州医学院附属医院临床医学实验室 256603

目的构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达特点。方法用RT-PCR法扩增出TRIM22基因编码序列,克隆至真核表达载体pEGFP-N3,通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定。将pEGFP-N3-TRIM22载体转染293T细胞,通过流式细胞仪... 详细信息

目的构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达特点。方法用RT-PCR法扩增出TRIM22基因编码序列,克隆至真核表达载体pEGFP-N3,通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定。将pEGFP-N3-TRIM22载体转染293T细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜观察TRIM22-EGFP的表达;通过激光共聚焦,经Lyso Tracker Deep Red及DAPI分别染色溶酶体及细胞核,观察TRIM22-EGFP在293T细胞的分布特点。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体。流式细胞仪检测发现,转染细胞中TRIM22-EGFP+细胞约70%左右。荧光显微镜检测发现,TRIM22-EGFP在293T细胞中能以弥散、小斑点或大颗粒团块3种形式存在。激光共聚焦检测发现,在不同的293T细胞中TRIM22-EGFP可分别优势表达于细胞核、细胞浆,或者在胞核及胞浆均有大量表达。结论 TRIM22-EGFP能以弥散、小斑点或大颗粒团块形式分布于细胞核或细胞浆中。

关键词：三基序蛋白22 真核表达载体表达特点

TRIM22靶向调控eIF4E在白血病细胞粒系定向分化过程中的作用与机制

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TRIM22靶向调控eIF4E在白血病细胞粒系定向分化过程中的作用与机制

作者：韩杨济南大学

学位级别：硕士

背景三基序蛋白TRIM22(tripartite motif 22),也被称为Staf50(stimulated trans-acting factor of 50 kD),因其具有包含RING区,B-box区和卷曲螺旋区的RBCC结构序列,而被归于三基序蛋白TRIM家族中的一员。TRIM22是抑癌基因P53的靶基因之一,其过表达可以激活NF-κB,并且N端RING结构域及C端SPRY结构域对其在NF-κB活动,抗病毒以及自身免疫疾病中的介导过程十分重要。已有研究证明TRIM22呈现RING结构域依赖性E3泛素连接酶活性,可参与病毒复制的抑制,具有抗肿瘤增殖作用,但其特定分子功能尚未阐明。真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,简称“eIF4E”)是一种帽结合蛋白,可以特异性地识别mRNA的5’端的帽子结构,从而启动翻译。eIF4E过度表达会导致增加扩散,逃避凋亡,肿瘤侵袭和转移。血液肿瘤中,eIF4E高表达在急性淋巴系统白血病中较少发生,在淋巴瘤,骨髓增生异常综合症,急慢性髓系白血病(尤其是M4,M5亚型和慢性髓系白血病急变期的患者)中较多见,对eIF4E基因表达水平的检测对监测AML疾病状况有重要意义。课题组前期发现在全反式维甲酸(all-trans-Retinoic acid,ATRA)诱导急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22与eIF4E呈反向变化。TRIM19已被证明依赖RING结构域通过与eIF4E结合来抑制其活动,那么我们推测有相似结构的TRIM22也可能有相似作用,并有望成为急性髓系白血病治疗的新靶点。目的探讨在人急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22的功能及与eIF4E的相互作用,从而进一步阐明TRIM22靶向调控eIF4E的机制,为白血病治疗寻找新靶点提供重要依据。方法体外实验建立ATRA诱导HL-60及NB4细胞分化模型,应用RT-PCR,q-PCR及Western Blotting技术检测TRIM22与e IF4E的基因与蛋白表达的变化,并通过电穿孔转染技术敲低或过表达TRIM22后,利用CCK-8和流式细胞术检测其对细胞功能的影响,以及Western Blotting技术检测对eIF4E蛋白表达水平的影响。最后采用免疫共沉淀实验(CO-IP)验证TRIM22与eIF4E的相互作用。结果ATRA诱导HL-60及NB4细胞后,TRIM22的基因及蛋白表达水平均升高,eIF4E的基因及蛋白表达水平均降低。其中q-PCR检测NB4细胞在诱导前后mRNA相对表达量由1.01±0.15逐渐升高到30.98±2.79(F=280.70,P=0.000),Western blotting检测其蛋白相对表达水平由0.22±0.03逐渐升高至0.51±0.05(F=51.43,P=0.000)。反之,eIF4E的mRNA相对表达量由1.01±0.09逐渐降低至0.47±0.06(F=20.52,P=0.000),蛋白相对表达水平由0.97±0.02逐渐降低至0.64±0.09(F=14.70,P=0.001)。流式细胞术检测TRIM22过表达后ATRA干预组(78.8±2.0)%比空载体ATRA干预组(58.7±2.7)%的PE-CD11b表达水平高(t=9.54,P=0.000);共转染后ATRA干预组(61.6±3.8)%比TRIM22过表达后ATRA干预组PE-CD11b表达水平(78.8±2.0)%低(t=8.19,P=0.000)。过表达TRIM22组的NB4细胞72h后增殖抑制率(0.25±0.01)%高于空载体组(0.03±0.02)%(t=15.47,P=0.000)。同时,过表达TRIM22基因水平后,eIF4E蛋白水平会降低(t=4.99,P=0.007)。CO-IP实验验证TRIM22通过结合eIF4E而作用。结论在ATRA诱导HL-60,NB4细胞粒系分化过程中,TRIM22的mRNA及蛋白表达水平逐渐升高,而eIF4E的mRNA及蛋白表达水平逐渐降低。TRIM22在NB4细胞粒系定向分化过程中可抑制细胞增殖并促进其在ATRA作用下的细胞分化,并且可通过靶向结合eIF4E抑制其表达而发挥重要作用。

关键词：白血病细胞分化真核细胞起始因子4E 三基序蛋白22

LncRNA NEAT1/miR-5581-5p/TRIM22靶向调控eIF4E在白血病细胞粒系定向分化过程中的作用与机制

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LncRNA NEAT1/miR-5581-5p/TRIM22靶向调控eIF4E在白血病细胞粒系...

第十四届全国免疫学学术大会

作者：齐福王朝喆王希娣韩杨孙瑞婧孙王男姜国胜滨州医学院免疫与生物技术转化研究院济南市章丘区人民医院山东大学附属省立医院

目的:探讨在人急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22的功能及与eIF4E的相互作用,进一步阐明LncRNA NEAT1/miRNA-5581-5p/TRIM22靶向调控eIF4E的机制,为白血病治疗寻找新靶点。方法:建立ATRA诱导HL-60及NB4细胞分化模型,检测TRIM22与e... 详细信息

目的:探讨在人急性髓系白血病细胞粒系分化过程中TRIM22的功能及与eIF4E的相互作用,进一步阐明LncRNA NEAT1/miRNA-5581-5p/TRIM22靶向调控eIF4E的机制,为白血病治疗寻找新靶点。方法:建立ATRA诱导HL-60及NB4细胞分化模型,检测TRIM22与eIF4E的基因与蛋白表达变化;敲低或过表达TRIM22,CCK-8和流式细胞术检测其对细胞功能的影响及eIF4E蛋白的变化;CO-IP验证TRIM22与eIF4E的相互作用;Luciferase实验检测LncRNA对靶miRNA或miRNA对靶基因TRIM22的结合和调控作用;LncRNA、miRNA的mimics或inhibitors转染实验及TRIM22 siRNA实验,观察下游靶基因的表达变化和功能影响。结果:ATRA诱导HL-60及NB4细胞后,TRIM22的基因及蛋白表达水平均升高,eIF4E的基因及蛋白表达水平均降低;TRIM22过表达后ATRA干预组(78.8±2.0)%比空载体ATRA干预组(58.7±2.7)%的CD11b表达水平高(t=9.54,P=0.000),共转染后ATRA干预组(61.6±3.8)%比TRIM22过表达后ATRA干预组CD11b表达水平(78.8±2.0)%低(t=8.19,P=0.000);过表达TRIM22组的NB4细胞72h后增殖抑制率(0.25±0.01)%高于空载体组(0.03±0.02)%(t=15.47,P=0.000);同时,过表达TRIM22后,eIF4E蛋白水平会降低(t=4.99,P=0.007);CO-IP实验验证TRIM22通过结合eIF4E而降低磷酸化水平,继而降低下游靶基因c-myc的翻译过程;Luciferase实验证实miRNA-5581-5p对靶基因TIRM22的启动子具有靶向结合和活性调控作用;siRNA干扰实验证实TRIM22对下游基因eIF4E以及eIF4E对c-myc表达具有调控作用;LncRNA NEAT1对miRNA-5581-5p具有靶向调控作用,并影响白血病细胞的定向分化水平。结论:LncRNA NEAT1/miRNA-5581-5p/TRIM22/eIF4E靶向调控c-myc表达的信号轴在白血病细胞粒系定向分化中发挥重要作用。

关键词：白血病细胞分化真核细胞起始因子4E 三基序蛋白22 LncRNA NEAT1 miR-5581-5p

来源： cnki会议评论

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Trim22缺失突变体真核表达载体的构建

免疫学杂志 2011年第5期27卷 428-432,436页

作者：孙大康宿振国安新业周荣佼刘永云滨州医学院附属医院临床医学实验中心 266603 滨州医学院附属医院检验科 266603 滨州医学院附属医院研究生处 266603

目的构建Trim22缺失突变体的真核表达载体,为进一步研究Trim22与HIV-1衣壳蛋白的相互作用奠定基础。方法以野生型Trim22真核表达质粒为模板,用PCR方法扩增出5种类型Trim22缺失突变体的基因片段,克隆到5`-Flag-pcDNA3.1(+)真核表达载体,... 详细信息

目的构建Trim22缺失突变体的真核表达载体,为进一步研究Trim22与HIV-1衣壳蛋白的相互作用奠定基础。方法以野生型Trim22真核表达质粒为模板,用PCR方法扩增出5种类型Trim22缺失突变体的基因片段,克隆到5`-Flag-pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹及免疫沉淀检测Trim22缺失突变体的蛋白表达。结果通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建5种人Trim22缺失突变体的表达载体,载体均可以在HEK293T细胞中表达。结论成功构建5种人Trim22缺失突变体的真核表达载体,为探寻Trim22与HIV-1衣壳蛋白相互作用的关键结构域奠定了基础。

关键词：三基序蛋白22 缺失突变体艾滋病病毒