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三叶青种质资源遗传多样性的ISSR分析

中草药 2018年第23期49卷 4884-4891页

作者：尹明华谢妮妮徐文慧占学林廖玉万志庭蔡红陈荣华上饶师范学院生命科学学院江西上饶334001 上饶市红日农业开发有限公司江西上饶334700

目的对我国三叶青种质资源64个样本的遗传多样性进行分析。方法利用ISSR-PCR技术进行扩增,然后利用POPGENE 32软件及NTSYS软件分析三叶青种质资源64个样本的遗传多样性及亲缘关系,并根据UPGMA法,构建亲缘关系树状图。结果从30条引物中... 详细信息

目的对我国三叶青种质资源64个样本的遗传多样性进行分析。方法利用ISSR-PCR技术进行扩增,然后利用POPGENE 32软件及NTSYS软件分析三叶青种质资源64个样本的遗传多样性及亲缘关系,并根据UPGMA法,构建亲缘关系树状图。结果从30条引物中筛选出10条条带清晰、重复性好的引物对64份供试材料的基因组DNA进行扩增。扩增出了83个多态位点,多态百分数为71.43%～100.00%,平均多态百分数为94.31%,引物S17扩增得到的多态位点最多,为11个;引物P6扩增得到的多态位点最少,为5个,10条引物扩增得到的多态位点平均为8.3个;遗传多样性分析显示,平均检测等位基因数(N_a)为1.943 1,平均有效等位基因数(N_e)为1.381 08,64个样本的平均Nei’s基因多样性指数(H)为0.242 98,平均Shannon多样性指数(I)为0.385 83。64个样本遗传相似系数的变异范围为0.431 8～0.988 6。根据相似系数矩阵按UPGMA法进行聚类,在遗传相似性系数为0.715 5处,64份供试材料可分为6组;另外,根据10个ISSR引物的扩增结果,筛选出引物ISSR 20、UBC857和S17扩增的DNA指纹图谱可用于64个三叶青样本种质的鉴定。结论我国三叶青种质资源拥有丰富的遗传多样性和基因的相对稳定性,ISSR分析可揭示我国三叶青种质资源间的亲缘关系,为评价、鉴定和新品种选育提供一定的参考依据。

关键词：三叶青种质资源遗传多样性 ISSR分析 UPGMA法

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三叶青大孔树脂乙醇洗脱部位UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱的建立及抗氧化谱效关系研究

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食品工业科技 2024年第15期45卷 313-321页

作者：蔡国强徐志杰乔晓红罗天骥张蕾何一波浙江省绿色清洁技术及洗涤用品重点实验室浙江丽水323000 纳爱斯浙江科技有限公司浙江杭州310051

目的:研究三叶青提取物与其抗氧化活性的谱效关系,初步明确其发挥抗氧化活性的质量标志物。方法:制备三叶青提取物上大孔树脂柱,分别使用浓度为10%、30%、50%、70%、90%和100%的乙醇进行洗脱,得到6个不同洗脱部位;采用超高效液相色谱-... 详细信息

目的:研究三叶青提取物与其抗氧化活性的谱效关系,初步明确其发挥抗氧化活性的质量标志物。方法:制备三叶青提取物上大孔树脂柱,分别使用浓度为10%、30%、50%、70%、90%和100%的乙醇进行洗脱,得到6个不同洗脱部位;采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)建立三叶青提取物及各洗脱部位的指纹图谱并筛选特征峰;以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为抗氧化指标,考察三叶青提取物及各洗脱部位的抗氧化活性;再综合Pearson相关系数法和正交偏最小二乘(OPLS)法分析研究特征峰与抗氧化活性的谱效关系,筛选其质量标志物并分析鉴定其化学成分。结果:在正、负离子模式下,三叶青提取物及各洗脱部位分别筛选出57、92个特征峰;综合Pearson相关系数与OPLS分析结果,其中14个离子峰对抗氧化活性贡献较大,分别为香兰素(P2)、儿茶素(P13、N19)、芦丁(P27、N54)、异槲皮苷(P28)、山奈酚-3-O-芸香糖苷(P33、N61)、原花青素B(N18)、原花青素C(N22)以及离子峰N23、N25、N26、N29。结论:建立了三叶青提取物及各洗脱部位的UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱,揭示了三叶青抗氧化活性的质量标志物,为三叶青的质量标准制定及资源开发利用提供技术支撑。

关键词：三叶青抗氧化活性超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱谱效关系质量标志物

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核密度估计算法结合近红外光谱技术鉴别三叶青产地

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光谱学与光谱分析 2018年第3期38卷 794-799页

作者：赖添悦蔡逢煌彭昕柴琴琴李玉榕王武福州大学电气工程与自动化学院福建福州350116 浙江医药高等专科学校制药工程学院浙江宁波315100 福建省医疗器械和医药技术重点实验室福建福州350116

三叶青是我国珍稀中药材,具有多种疗效,但不同产地的三叶青有效成分含量差异悬殊,为防止三叶青以次充好,其产地鉴别尤为重要。以浙江、云南、安徽、广西和湖北五个产地的三叶青为研究对象,利用傅里叶变换近红外光谱分析仪(Fourier trans... 详细信息

三叶青是我国珍稀中药材,具有多种疗效,但不同产地的三叶青有效成分含量差异悬殊,为防止三叶青以次充好,其产地鉴别尤为重要。以浙江、云南、安徽、广西和湖北五个产地的三叶青为研究对象,利用傅里叶变换近红外光谱分析仪(Fourier transform near infrared spectroscopy,FT-NIR)收集4 000~10 000cm-1范围内的近红外光谱,由于三叶青近红外光谱数据还未完善,因此在其产地鉴别上,应对鉴别算法提出更高的要求,即在实现三叶产地鉴别的同时,还要能够有效地识别出其他或未知新产地的三叶青。针对这一问题,本文结合三叶青近红外光谱数据的特点,对算法共做了三方面改进:(1)从距离的角度估计样本的概率密度;(2)以训练样本可信度的方式计算带宽参数;(3)在未知新产地的识别上,提出一种基于训练集样本的概率密度函数的识别方法。结果表明,该算法对训练集样本的识别精度达到了100%,且在140组预测集样本中,只有3组样本识别出错,并能够100%地识别出未知新产地的三叶青,说明基于核密度估计的改进算法在三叶青产地鉴别上,不仅鉴别精度高,且能够有效识别出其他或未知新产地的三叶青。

关键词：三叶青产地鉴别核密度估计未知新产地近红外光谱

三叶青黄酮经p38MAPK和NF-κB途径抑制老年小鼠急性肺损伤

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中国药理学通报 2015年第12期31卷 1725-1730页

作者：刘丹丹曹纲张琦叶夷露韩立凯葛卫红浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江医学高等专科学校基础医学部浙江杭州310053 浙江省人民医院病理科浙江杭州310046

目的探讨三叶青总黄酮(RTFs)对老年小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能机制。方法采用老年C57BL/6J小鼠支气管滴注脂多糖(LPS)诱导ALI模型,三叶青黄酮灌胃给药3 d。取支气管肺泡灌洗液(BALF),瑞氏-吉姆萨染色计算白细胞数,ELISA检测... 详细信息

目的探讨三叶青总黄酮(RTFs)对老年小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能机制。方法采用老年C57BL/6J小鼠支气管滴注脂多糖(LPS)诱导ALI模型,三叶青黄酮灌胃给药3 d。取支气管肺泡灌洗液(BALF),瑞氏-吉姆萨染色计算白细胞数,ELISA检测炎症因子水平;ELISA和Western blot分析肺组织MAPKs、NF-κB蛋白表达,Trans AM检测核蛋白NF-κB活性。结果支气管滴注LPS成功诱导ALI模型,三叶青黄酮可明显减少BALF中白细胞和中性粒细胞数(P三叶青黄酮明显抑制肺组织p38MAPK、NF-κB的磷酸化及NF-κB的DNA结合活性(P三叶青黄酮抑制p38MAPK、NF-κB炎症通路,保护LPS诱导的老年小鼠ALI。

关键词：三叶青黄酮 p38MAPK NF-κB 脂多糖急性肺损伤老年小鼠

三叶青超微粉对酒精性肝损伤大鼠肠道菌群的调节作用

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食品工业科技 2023年第18期44卷 415-424页

作者：程晓阳廖明何全光莫财锋黄茂康黄梅华广西医科大学广西南宁530021 肇庆市鼎湖区人民医院广东肇庆526070 广西壮族自治区农业科学院农产品加工研究所广西南宁530007 广西华银医学检验所有限公司广西南宁530000

目的:研究三叶青超微粉能否缓解酒精引起的肝损伤,并探讨其保护作用机制,为开发酒精性肝损伤辅助治疗产品提供新的研究思路。方法:连续给予大鼠8周酒精制备肝损伤模型,同时给予大鼠灌胃不同剂量的三叶青超微粉,观察其对酒精性肝损伤的... 详细信息

目的:研究三叶青超微粉能否缓解酒精引起的肝损伤,并探讨其保护作用机制,为开发酒精性肝损伤辅助治疗产品提供新的研究思路。方法:连续给予大鼠8周酒精制备肝损伤模型,同时给予大鼠灌胃不同剂量的三叶青超微粉,观察其对酒精性肝损伤的保护作用。检测大鼠血清中ALT、AST、ALP和肝组织中GSH、SOD、MDA的变化,观察肝组织病理切片损伤情况,并采集粪便提取基因组DNA,进行16S rDNA全长测序分析。结果:与模型组比较,三叶青中、高剂量(0.5和1.0 g·kg^(−1))可显著降低大鼠ALT、AST和ALP水平及MDA含量(P三叶青超微粉明显改善酒精所引起的肝细胞肿胀和脂肪变性,治疗效果类似于阳性药联苯双酯。肠道菌群分析表明,酒精性肝损伤大鼠肠道菌群结构发生显著变化;三叶青、阳性药干预对肠道菌群在门、属、种水平上较模型组均有一定程度的改善;三叶青能有效恢复因酒精增加的普雷沃菌属,降低的约氏乳杆菌、毛杆菌丰度,效果优于阳性药对照组(P三叶青超微粉对大鼠酒精性肝损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化应激作用及肠道菌群的调节有关。

关键词：三叶青超微粉酒精性肝损伤氧化应激肠道菌群

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三叶青愈伤组织培养及其总黄酮含量的研究

中药材 2010年第7期33卷 1042-1045页

作者：卢爱芳祁明君李宗亮吕洪飞浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

目的:通过三叶青愈伤组织诱导、增殖、分化及其总黄酮含量测定,探讨用三叶青愈伤组织生产三叶青黄酮的可行性。方法:以无菌苗叶片、野生三叶青叶片和茎段为外植体,诱导形成愈伤组织;经不同培养基培养后,选取两种典型的愈伤组织、叶片和... 详细信息

目的:通过三叶青愈伤组织诱导、增殖、分化及其总黄酮含量测定,探讨用三叶青愈伤组织生产三叶青黄酮的可行性。方法:以无菌苗叶片、野生三叶青叶片和茎段为外植体,诱导形成愈伤组织;经不同培养基培养后,选取两种典型的愈伤组织、叶片和块根为材料,以乙醇为溶剂,超声波提取总黄酮,用NaNO2-Al(NO3)3显色,在500nm处用分光光度计测总黄酮含量。结果:三叶青愈伤组织的最佳诱导培养基为2/3MS+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAA,最佳增殖培养基为MS+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LNAA,最佳生根培养基为1/2MS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。三叶青总黄酮含量在块根中为31.135mg/g,在叶片中为12.830mg/g,在愈伤组织中高达18.047mg/g。结论:三叶青愈伤组织中总黄酮含量较高,用愈伤组织可大规模生产三叶青黄酮,满足医药市场的迫切需求。

关键词：三叶青愈伤组织诱导增殖分化类黄酮

三叶青扩展蛋白家族基因全长cDNA的克隆及其生物信息学和表达分析

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中草药 2016年第5期47卷 810-815页

作者：宋亚玲向太和武盼王博李姣姣张挺杭州师范大学生命与环境科学学院浙江杭州310036

目的克隆三叶青Tetrastigma hemsleyanum的扩展蛋白家族基因,对其进行器官表达分析,并初步探讨其功能。方法根据Gen Bank中登录的扩展蛋白基因保守区域序列设计1对简并引物,以三叶青球形块根c DNA为模板进行RT-PCR扩增,再结合RACE技术,... 详细信息

目的克隆三叶青Tetrastigma hemsleyanum的扩展蛋白家族基因,对其进行器官表达分析,并初步探讨其功能。方法根据Gen Bank中登录的扩展蛋白基因保守区域序列设计1对简并引物,以三叶青球形块根c DNA为模板进行RT-PCR扩增,再结合RACE技术,获得三叶青扩展蛋白基因全长c DNA序列,命名为Th-exp。采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析Th-exp基因在不同器官中的表达情况。结果克隆获得扩展蛋白家族基因,共782 bp,其中包含630 bp开放阅读框,编码209个氨基酸(Gen Bank登陆号KP693606)。Th-exp编码的蛋白质具有典型的扩展蛋白结构特征,N端含有8个半胱氨酸的结构域,C端含有4个保守的色氨酸结构域,中间含有组氨酸功能域。Blast分析显示,Th-exp与葡萄、醉蝶花中扩展蛋白基因具有相似性。半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析表明,Th-exp在三叶青叶、茎、普通细根和球形块根中均有表达,但球形块根中表达强于其他器官。结论克隆得到三叶青扩展蛋白家族基因Th-exp全长c DNA,初步预测其参与了三叶青块根的发育过程。

关键词：三叶青扩展蛋白基因克隆表达块根

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三叶青中黄酮类化合物及其药理活性研究进展

基因组学与应用生物学 2021年第11期40卷 3704-3716页

作者：徐帆梁宗锁韩蕊莲浙江理工大学建筑工程学院杭州310018 浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省植物次生代谢调控重点实验室杭州310018

三叶青(Tetratigma hemsleyanum Diels et Gilg)由于其药用价值显著而于2018年入选了新“浙八味”药材。三叶青中黄酮类化学成分含量较高,广泛存在于其块根、茎和叶中。从中分离鉴定的黄酮类化合物达53种,主要有黄酮类、黄酮醇类、黄烷... 详细信息

三叶青(Tetratigma hemsleyanum Diels et Gilg)由于其药用价值显著而于2018年入选了新“浙八味”药材。三叶青中黄酮类化学成分含量较高,广泛存在于其块根、茎和叶中。从中分离鉴定的黄酮类化合物达53种,主要有黄酮类、黄酮醇类、黄烷类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类及异黄酮类等。对三叶青提取物化学成分及其药理学的深入研究表明,其含有的黄酮类化合物除能有效抑制肿瘤细胞外,还具有抗病毒、抗炎、免疫调节等药理作用。目前对三叶青黄酮类化合物以及其药理活性的研究仍具有较大空间,建议今后开展其化学成分与相关活性的进一步深入研究,以阐明其药效物质基础,进而全面开发黄酮类活性成分并推进其在临床应用的研究。

关键词：三叶青黄酮类化合物含量药理活性研究进展

三叶青提取物对人肺癌H1299细胞凋亡的影响及机制研究

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中国中西医结合杂志 2014年第11期34卷 1354-1358页

作者：钟良瑞林霜陈伟芳魏克民浙江中医药大学附属省立同德医院肿瘤内科杭州310012 浙江省中医药研究院杭州310007

目的探讨三叶青提取物对人肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及其机制。方法采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测三叶青提取物对H1299细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜观察三叶青提取物对H1299细胞形态的影响;荧光显微镜观察三叶青提... 详细信息

目的探讨三叶青提取物对人肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及其机制。方法采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测三叶青提取物对H1299细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜观察三叶青提取物对H1299细胞形态的影响;荧光显微镜观察三叶青提取物作用细胞后经Hoechst 33258染色的凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法(Western blot)检测pro-caspase-3、9,cle-caspase-3、9,poly-ADP-ribose polymerase(PARP)蛋白表达变化。结果与对照组比较,浓度为0.5、1、5、10 mg/m L三叶青提取物作用H1299细胞后抑制率升高(P三叶青提取物明显抑制H1299细胞中pro-caspase-3、9和PARP蛋白表达,增加cle-caspase-3、9,cle-PARP蛋白的表达,差异有统计学意义(P三叶青提取物对人肺癌H1299细胞具有明显抑制其增殖,促进细胞凋亡作用,且其机制可能与激活caspase蛋白表达有关。

关键词：三叶青人肺癌细胞增殖凋亡