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中草药 2023年第11期54卷 3512-3523页

作者：冯禹壮徐伟肖春萍赵淑月翁丽丽长春中医药大学药学院吉林长春130117

目的优化三仁颗粒制备工艺,并进行质量控制研究。方法采用HPLC法建立苦杏仁苷、厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法,并以出膏量、苦杏仁苷含量、厚朴酚含量、和厚朴酚含量、50%乙醇浸出物为评价指标,以熵权法分配各指标权重,采用正交试验... 详细信息

目的优化三仁颗粒制备工艺,并进行质量控制研究。方法采用HPLC法建立苦杏仁苷、厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法,并以出膏量、苦杏仁苷含量、厚朴酚含量、和厚朴酚含量、50%乙醇浸出物为评价指标,以熵权法分配各指标权重,采用正交试验优选三仁汤最佳提取工艺;以成型率、休止角、堆密度和吸湿率为评价指标,采用星点设计-响应面法优化三仁颗粒最佳成型工艺;建立10批三仁颗粒的指纹图谱并进行相似度分析和共有色谱峰归属鉴定,结合薄层鉴别和含量测定对三仁颗粒进行质量控制。结果以苦杏仁苷、厚朴酚、和厚朴酚的含量作为三仁汤质控标准,测得三仁汤中3种指标性成分的质量分数分别为苦杏仁苷0.536~1.054 mg/g,厚朴酚0.015~0.062 mg/g,和厚朴酚0.013~0.053 mg/g;三仁汤最佳提取工艺为加8倍量水,煎煮2次,每次1 h;三仁颗粒最佳成型工艺为糊精为辅料,药辅比1∶1.5,乙醇体积分数78%,乙醇用量为药粉和辅料总量的21%;建立了苦杏仁、薏苡仁、厚朴的薄层鉴别方法和苦杏仁苷、厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法;建立了10批三仁颗粒的指纹图谱,相似度为0.939~0.999,共指认15个共有峰,1号峰归属于苦杏仁、厚朴,2、7、13号峰归属于豆蔻、厚朴、淡竹叶,3、4、8、9号峰为苦杏仁专属峰,5号峰归属于苦杏仁、豆蔻、厚朴、淡竹叶,6、11、12、14、15号峰为厚朴专属峰,10号峰归属于厚朴、淡竹叶。结论该提取方法有效成分提取率高,稳定可靠;成型工艺方法成型率高,流动性好;质量控制和指纹图谱各检查项方法均稳定可靠,能够为三仁颗粒的质量控制提供参考。

关键词：三仁颗粒提取工艺成型工艺星点设计-响应面法质量控制指纹图谱苦杏仁苷厚朴酚和厚朴酚成型率休止角堆密度吸湿率

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三仁颗粒的制备、质量标准及潜在药效研究

三仁颗粒的制备、质量标准及潜在药效研究

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作者：冯禹壮长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:对三仁颗粒的提取和成型工艺进行优化,测定颗粒相对临界湿度;建立三仁颗粒的质量标准及指纹图谱,并筛选质量差异标志物;基于网络药理学构建大鼠湿热胃炎模型,研究三仁颗粒对湿热胃炎大鼠的药效作用,为三仁颗粒的进一步开发研究提... 详细信息

目的:对三仁颗粒的提取和成型工艺进行优化,测定颗粒相对临界湿度;建立三仁颗粒的质量标准及指纹图谱,并筛选质量差异标志物;基于网络药理学构建大鼠湿热胃炎模型,研究三仁颗粒对湿热胃炎大鼠的药效作用,为三仁颗粒的进一步开发研究提供理论依据。方法:(1)通过查阅文献,对三仁汤进行处方考证;遵循古籍记载,结合现代实际操作,以出膏量、苦杏仁苷含量、50%乙醇浸出物含量为评价指标,通过古法标准煎液与正交试验对比优选三仁汤最佳提取工艺;以成型率、休止角、堆密度和吸湿率为评价指标,以熵权法分配权重,采用星点设计-响应面法优化三仁颗粒成型工艺;(2)通过确定颗粒剂一般项检查、薄层鉴别和含量测定方法,建立三仁颗粒的质量标准;(3)采用高效液相色谱法(HPLC)建立十批三仁颗粒的指纹图谱;运用聚类分析、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)及变量重要性投影(VIP)值筛选三仁颗粒的质量差异标志物;(4)运用TCMSP筛选三仁颗粒的化学成分,使用Genebank搜索功能,针对湿热胃炎病症,获取其相关靶点信息,取交集于药物以及疾病相关靶标基因,使用STRING数据库对筛选出的主要作用靶点构建PPI网络,通过Cytoscape软件构建相应网络图,借助DAVID数据库对三仁颗粒治疗湿热胃炎相关靶基因进行GO富集分析及KEGG富集分析;建立大鼠湿热胃炎模型,比较不同给药组给药前后大鼠体质量、体温和粪便含水率差异,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中IL-1β(白细胞介素-1β)、IL-6(白细胞介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、HSP-60(人热休克蛋白-60)、HSP-70(人热休克蛋白-70)含量变化。结果:(1)三仁汤最佳提取工艺为:以9.5倍量的加水量,浸泡一小时,煎煮一小时,再以8倍量的加水量,煎煮一小时;三仁颗粒最佳成型工艺为:糊精为辅料,药辅比1:1.5,乙醇体积分数78%,乙醇用量为药粉和辅料总量的0.21倍,三仁颗粒相对临界湿度为74.45%;(2)建立了三仁颗粒一般考察指标和苦杏仁、薏苡仁、厚朴的薄层鉴别方法,建立了苦杏仁苷的含量测定方法;(3)10批样品的指纹图谱共指认15个共有峰,相似度均大于0.90;聚类分析可将10批样品可分为四类,S1、S9为一类,S7为一类、S2、S8为一类,S3～S6、S10为一类;OPLS-DA和VIP值结果显示,8号峰、9号峰(苦杏仁苷)和10号峰VIP值均大于1;(4)通过构建成分-靶点网络找出三仁颗粒中的相关活性成分,通过匹配药物靶点以及疾病靶点,找出治疗湿热胃炎的44个靶点,并且经过蛋白互作网络找到相关性最高的五个靶点TP53、IL-6、JUN、IL-1β、VEGFA。通过GO及KEGG富集分析可以得出,三仁汤是通过多蛋白、多信号通路来抑制炎症反应、调节激素的分泌,产生治疗湿热胃炎等作用;湿热胃炎模型大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量较对照组均极显著升高(P三仁颗粒中、高剂量治疗后均极显著降低(P三仁颗粒的质量标准提供理论依据;8号峰、9号峰(苦杏仁苷)和10号峰可能是影响三仁颗粒质量的差异标志物。基于网络药理学建立大鼠湿热胃炎模型,明确了三仁颗粒不同剂量治疗湿热胃炎大鼠的药效作用差异,为三仁颗粒的药效物质基础研究和临床应用提供理论依据。

关键词：三仁颗粒提取工艺成型工艺星点设计-响应面法相对临界湿度质量标准指纹图谱差异标志物网络药理学湿热胃炎

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