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三七姜高效液相色谱指纹图谱建立及3种成分含量测定

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医药导报 2022年第5期41卷 687-692页

作者：梁洁祁金丽杨川川胡珏陈辉华曹玉嫔李耀华孙正伊广西中医药大学药学院南宁530200 广西壮瑶药工程技术研究中心南宁530200 广西优势中成药与民族药开发工程技术研究中心南宁530200 广西中医药大学附属瑞康医院药学部南宁530011

目的采用高效液相色谱法(HPLC)建立壮药三七姜药材的指纹图谱,并测定其中原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量。方法Phenomenex Kinetex XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长为220 ... 详细信息

目的采用高效液相色谱法(HPLC)建立壮药三七姜药材的指纹图谱,并测定其中原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量。方法Phenomenex Kinetex XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长为220 nm,流速0.8 mL·min^(-1),柱温35℃,进样量15μL。以莪术二酮作为参照峰,建立10批三七姜药材的指纹图谱,综合应用相似度评价,聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)评价三七姜药材批间质量差异。同法测定10批三七姜药材原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量。结果10批样品中有16个共有峰,相似度均>0.9。聚类分析可将样品分为3类,筛选出3个主成分因子,累计贡献率93.875%。原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛在测定范围内(2.36~16.52,2.12~14.84,1.49~10.43μg·mL^(-1))呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为101.50%,101.54%,100.67%,RSD分别为1.85%,1.81%,1.54%;10批三七姜药材中原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量分别为0.3321~1.4642,0.4757~1.3450,0.3306~1.0465 mg·g^(-1)。结论该方法稳定可靠,可用于三七姜药材的质量控制。

关键词：三七姜原儿茶酸对羟基苯甲酸对羟基苯甲醛含量测定指纹图谱色谱法,高效液相

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壮药三七姜抗氧化活性及化学成分研究

广西师范大学学报（自然科学版） 2023年第4期41卷 165-177页

作者：梁洁刘星晨孙正伊陈晓思杨川川曹玉嫔李耀华陈明伟黄团心广西中医药大学药学院广西南宁530200 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心华南分中心(广西中医药大学) 广西南宁530200 广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室(广西中医药大学) 广西南宁530200 广西壮瑶药工程技术研究中心(广西中医药大学) 广西南宁530200 广西中医药大学附属瑞康医院药学部广西南宁530011 广西壮族自治区食品药品检验所广西南宁530021

为研究壮药三七姜抗氧化能力及其化学成分,本文通过DPPH、O_(2)^(-)·、·OH自由基清除实验,超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对三七姜抗氧化能力及化学成分进行分析。结果表明:三七姜不同极... 详细信息

为研究壮药三七姜抗氧化能力及其化学成分,本文通过DPPH、O_(2)^(-)·、·OH自由基清除实验,超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对三七姜抗氧化能力及化学成分进行分析。结果表明:三七姜不同极性部位均具有一定的抗氧化能力,乙酸乙酯部位抗氧化能力最强;三七姜中含有莪术醇、莪术二酮、樟脑、α-香附酮、壬二酸、柠檬酸、原儿茶醛、异夏佛塔苷、尿苷、L-酪氨酸、烟酰胺、L-色氨酸、甘露醇、丁烯基苯酞等14个化合物,均为首次从三七姜中鉴定出来。研究表明三七姜具有一定的抗氧化活性,原儿茶醛、烟酰胺等成分可能是其直接发挥药效作用的物质,该研究为三七姜的开发利用提供参考依据。

关键词：三七姜抗氧化活性超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术化学成分

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壮药三七姜不同提取部位抗炎镇痛活性研究

广西中医药 2023年第3期46卷 56-60页

作者：黄团心刘星晨梁洁郑飘雪梁炎丽陆春莲广西壮族自治区食品药品检验所广西南宁530021 广西中医药大学广西南宁530200 广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室广西南宁530200 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心华南分中心广西南宁530200

目的:研究壮药三七姜的抗炎镇痛作用及筛选其药理活性部位。方法:建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠棉球肉芽肿、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进、小鼠热板致痛及醋酸致小鼠扭体模型,筛选三七姜抗炎镇痛药理活性部位。结果:与模型组比... 详细信息

目的:研究壮药三七姜的抗炎镇痛作用及筛选其药理活性部位。方法:建立二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠棉球肉芽肿、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进、小鼠热板致痛及醋酸致小鼠扭体模型,筛选三七姜抗炎镇痛药理活性部位。结果:与模型组比较,在抗炎实验中,三七姜石油醚高、中剂量组和乙酸乙酯高剂量组可明显抑制小鼠耳廓肿胀程度,抑制棉球所致的小鼠肉芽组织增生,降低醋酸致小鼠毛细血管通透性(P三七姜石油醚高、中剂量组和乙酸乙酯高剂量组能减轻热板刺激引起的疼痛,提高痛阈值,减少醋酸引起的小鼠疼痛的扭体次数(P三七姜有抗炎镇痛作用,其药理活性部位为石油醚部位和乙酸乙酯部位。

关键词：三七姜抗炎镇痛活性部位

三七姜挥发油抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖的作用

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中国医院药学杂志 2014年第9期34卷 695-699页

作者：王芳邓立东徐勤桂林医学院广西桂林541004

目的:体外培养法研究三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞株生长的抑制作用和作用机制。方法:运用MTT法、Hoechst33258荧光染色法、流式细胞仪和倒置荧光显微镜进行研究。结果:三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖... 详细信息

目的:体外培养法研究三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞株生长的抑制作用和作用机制。方法:运用MTT法、Hoechst33258荧光染色法、流式细胞仪和倒置荧光显微镜进行研究。结果:三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。作用24 h后CNE-2细胞的IC50为304.8μg·ml-1;Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化;FITC-Annexin V/PI双染法发现三七姜挥发油能诱导CNE-2细胞凋亡,且随着剂量的增加作用增强;PI染色法说明三七姜挥发油将CNE-2细胞阻滞于G1期。结论:三七姜挥发油能有效抑制CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：三七姜挥发油 CNE-2细胞细胞凋亡

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三七姜挥发油抑制CNE-2细胞增殖的研究

三七姜挥发油抑制CNE-2细胞增殖的研究

作者：王芳桂林医学院

学位级别：硕士

目的：研究三七姜挥发油对人鼻咽癌细胞株（CNE-2）生长的抑制作用及其作用机制。方法：实验采用人鼻咽癌细胞株CNE-2，三七姜挥发油实验组分为120μg·mL-1、240μg·mL-1、360μg·mL-1、480μg·mL-1，作用24h后进行相关检测。运用MT... 详细信息

目的：研究三七姜挥发油对人鼻咽癌细胞株（CNE-2）生长的抑制作用及其作用机制。方法：实验采用人鼻咽癌细胞株CNE-2，三七姜挥发油实验组分为120μg·mL-1、240μg·mL-1、360μg·mL-1、480μg·mL-1，作用24h后进行相关检测。运用MTT法检测三七姜挥发油对CNE-2增殖抑制作用以及IC50;Hoechst33258荧光染色法观察三七姜挥发油作用于CNE-2发生凋亡时细胞形态的变化;FITC-Annexin V-PI双染流式细胞仪检测三七姜挥发油作用于CNE-2后的细胞凋亡率的变化;PI染色流式细胞仪检测三七姜挥发油对CNE-2周期的影响;流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量;采用JC-1染色检测CNE-2细胞内线粒体膜电位（△Ψ m）的变化情况;RT-PCR技术检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2编码基因表达水平。结果：三七姜挥发油对CNE-2细胞增殖具有抑制作用，且呈剂量依赖性和时间依赖性，作用24h后CNE-2细胞的IC150为300μg·mL-;Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化;FITC-Annexin V/PI双染法发现三七姜挥发油能诱导CNE-2细胞凋亡，且随着剂量的增加作用增强;PI染色法说明三七姜挥发油将CNE-2细胞阻滞于G1期;三七姜挥发油能显著增加CNE-2细胞内ROS的含量并能降低线粒体膜电位，同时作用24h后，120μg·mL-1、240μg·mL-1能明显上调caspase-3基因的表达，下调bcl-2基因的表达。结论：三七姜挥发油能有效抑制CNE-2细胞的生长，并通过诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用。推测三七姜挥发油可能通过诱导细胞内ROS的增加，引起细胞内氧化还原状态失平衡，进一步破坏线粒体功能，降低细胞线粒体的膜电位并激活caspase通路进而引起肿瘤细胞凋亡。

关键词：三七姜活性氧 CNE-2细胞细胞凋亡线粒体跨膜电位

壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制

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中国药房 2023年第5期34卷 548-553页

作者：梁洁梁晶春刘星晨陈晓思曹玉嫔陈俊柳贤福李耀华朱华广西中医药大学药学院南宁530200 广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室南宁530200 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心华南分中心南宁530200 广西中医药大学赛恩斯新医药学院南宁530222

目的研究壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制。方法将三七姜醇提物(75.35 g/kg)或纯净水灌胃大鼠以制备含药血清或空白血清。以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组,LPS组(1μg/mL)... 详细信息

目的研究壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制。方法将三七姜醇提物(75.35 g/kg)或纯净水灌胃大鼠以制备含药血清或空白血清。以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组,LPS组(1μg/mL),三七姜醇提物高、中、低剂量组(50、25、12.5μg/mL),4%或15%空白血清组,4%或15%空白血清+LPS组,4%或15%含药血清组,4%或15%含药血清+LPS组,按相应条件培养24 h后,检测各组细胞活力和细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量,以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平,一氧化氮合酶(NOS)、环氧化酶2(COX-2)蛋白表达水平。结果各组细胞培养24 h后,细胞活力差异无统计学意义。与正常对照组比较,LPS组细胞中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,TLR4、NF-κB mRNA表达水平和NOS、COX-2蛋白表达水平均显著升高(P三七姜醇提物各剂量组大鼠上述指标水平均显著降低(P三七姜醇提物及含药血清均可明显减轻LPS诱导的细胞炎症反应,其抗炎机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性,下调COX-2、NOS蛋白表达,减少炎症因子释放有关。

关键词：三七姜 TLR4/NF-κB信号通路炎症因子巨噬细胞

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壮药三七姜化学成分与抗炎镇痛作用机制研究

壮药三七姜化学成分与抗炎镇痛作用机制研究

作者：陈晓思广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:（1）建立三七姜红外指纹图谱。（2）利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术分析鉴定三七姜乙醇部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位的化学成分。（3）通过体外与体内实验研究三七姜总部位的抗炎、镇痛药效作用及探讨其机制及药效物质基础。（... 详细信息

目的:（1）建立三七姜红外指纹图谱。（2）利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术分析鉴定三七姜乙醇部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位的化学成分。（3）通过体外与体内实验研究三七姜总部位的抗炎、镇痛药效作用及探讨其机制及药效物质基础。（4）采用体外细胞实验研究三七姜总部位提取物含药血清的抗炎作用,并探讨其作用机制及药效物质基础。方法:（1）采用红外光谱法（IR）测定7批不同产地三七姜药材的红外光谱,运用OMNIC软件处理得到三七姜对照红外指纹图谱及共有特征峰,计算其相似度（PA）,综合应用聚类分析（HCA）和主成分一致性（PAC）对其进行质量评价。（2）利用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术,分析和鉴定三七姜乙醇部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位中的化学成分。使用Thermo Hypersil Gold C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.9μm）对样品进行分离,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液（含10 mmol乙酸铵）为流动相进行梯度洗脱,通过质谱的正、负离子监测模式、自动触发二级质谱（Full MS/dd-MS）扫描功能及全扫描功能,对三七姜乙醇部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位中的化学成分进行快速分析及鉴定。（3）(1)使用不同浓度三七姜总部位提取物（0、12.5、25、50、100、200μg/m L）分别处理培养RAW264.7细胞24h、48h、72h,采用CCK-8法检测细胞活力,明确三七姜总部位提取物的最佳给药浓度和时间。利用CCK-8法检测三七姜总部位提取物对脂多糖（LPS）诱导损伤的小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞活力。（2）采用小鼠棉球肉芽肿法及酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-6、TNF-α、前列腺素E（PGE）、IL-1β含量评价三七姜的抗炎药效及作用机制。采用醋酸致小鼠扭体实验及ELISA法检测血清中IL-6、TNF-α、5-羟色胺（5-HT）、环磷酸腺苷（c AMP）含量评价三七姜的镇痛药效及作用机制。（4）制备三七姜总部位提取物大鼠含药血清,使用不同浓度三七姜总部位提取物大鼠含药血清（0%、2%、4%、6%、8%、10%、15%、20%）分别处理培养RAW264.7细胞24h、48h、72h,采用CCK-8法检测细胞活力,明确三七姜总部位提取物大鼠含药血清的最佳给药浓度和时间。利用CCK-8法检测三七姜总部位提取物大鼠含药血清对LPS诱导损伤的小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞活力。利用ELISA试剂盒检测细胞上清液中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量。结果:（1）建立了7批不同产地三七姜的红外指纹图谱,标定了10个共有峰,7批不同产地药材与对照指纹图谱的相似度均大于0.9,聚为3类,提取了4个主成分因子,聚类分析与主成分分析结果相一致。（2）基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术分析鉴定得到三七姜化合物共14个:（1）萜类化合物:莪术醇、莪术二酮、樟脑、α-香附酮;（2）有机酸类化合物:壬二酸、柠檬酸;（3）酚类化合物:原儿茶醛;（4）黄酮类化合物:异夏佛塔苷;（5）含氮类化合物:尿苷、L-酪氨酸、烟酰胺、L-色氨酸;（6）其他类化学成分能:甘露醇、丁烯基苯酞。（3）(1)三七姜总部位提取物体外抗炎作用研究结果:三七姜总部位提取物最佳给药浓度为12.5、25、50μg/m L,时间为72h。与LPS组比较,三七姜总部位提取物高、中剂量组均能增强细胞活性。（2）三七姜总部位提取物体内抗炎镇痛作用研究结果:与正常对照组相比,模型组小鼠血清中IL-6、TNF-α、PGE、IL-1β、5-HT含量明显增加,c AMP含量明显减少,具有显著的统计学差异（P三七姜总部位提取物高、中、低剂量组（52.25、34.83、26.13 g生药/kg）对小鼠棉球肉芽肿炎症有明显抑制作用,明显降低醋酸致小鼠疼痛的扭体次数,并能显著降低小鼠血清中IL-6、TNF-α、PGE、IL-1β、5-HT含量,增加c AMP含量（P三七姜总部位提取物大鼠含药血清体外作用研究结果:三七姜醇提物大鼠含药血清的最佳给药浓度为4%、15%,时间为24h。与LPS组比较,含药血清各个剂量组均能增强细胞活性,均能降低NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量（P三七姜的指纹图谱与对照指纹图谱都具有较好的相似性,各产地间的化学成分种类和含量有一定的差异。（2）三七姜的化学成分主要为萜类及有机酸类化合物,多具有抗炎、镇痛等作用。（3）三七姜总部位提取物有较好的抗炎、镇痛作用。其抗炎机制可能与提高细胞抗损伤能力、抑制促炎性细胞因子IL-6、TNF

关键词：壮药三七姜指纹图谱化学成分抗炎镇痛小鼠巨噬细胞血清药理学

三七姜挥发油成分的GC-MS分析与体外抗肿瘤活性研究

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华夏医学 2017年第4期30卷 33-38页

作者：曾立威唐春燕徐勤广西壮族自治区食品药品监督管理局广西南宁530029 南方医科大学深圳医院药剂科广东深圳518100 桂林医学院广西桂林541004

目的:对三七姜挥发油成分进行定性和定量分析并探讨挥发油对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法:采用水蒸气蒸馏法测定三七姜挥发油的含量,并用气相色谱-质谱(GC-MS)计算机联用技术分离鉴定其中的挥发性化学组成,用归一化法测定其百分... 详细信息

目的:对三七姜挥发油成分进行定性和定量分析并探讨挥发油对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法:采用水蒸气蒸馏法测定三七姜挥发油的含量,并用气相色谱-质谱(GC-MS)计算机联用技术分离鉴定其中的挥发性化学组成,用归一化法测定其百分含量。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测三七姜挥发油对体外培养的人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞株、人肺癌细胞系A549细胞株、人肝癌细胞系Hep G2细胞株、人乳腺癌细胞系MCF-7细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。结果:已鉴定挥发油成分占总挥发油含量为94.03%,各成分分离度较好,初步鉴定了58种成分,其中含9类化合物,单萜类化合物,单萜氧化物类化合物,倍半萜类化合物,倍半萜氧化物类化合物,酯类化合物,芳烃类化合物,醛类化合物,醇类化合物和烷烃类化合物。含量最高的是3,6,7,8-四氢化-3,3,6,6-四甲基环戊二烯并[E]茚-1(2H)-酮,占25.75%;其次是莰烯,占13.54%;居第3位的是1,7,7-三甲基-二环[2.2.1]庚-2-茨酮,占11.93%。三七姜挥发油能抑制不同肿瘤细胞(CNE-2、A549、Hep G2、MCF-7)的增殖,且呈剂量依赖性,IC50值分别为1.27,1.24,0.84和1.04 mg/ml。结论:三七姜挥发油具有体外抗肿瘤活性。以上研究为三七姜挥发油进一步开发利用提供实验基础,为寻找三七姜中抗肿瘤的有效组分或新的化合物提供科学依据,抗肿瘤活性有待进一步研究。

关键词：三七姜挥发油气相色谱质谱联用抗肿瘤

气相色谱法测定三七姜挥发油中樟脑及α-蒎烯含量

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中国药业 2013年第18期22卷 39-40页

作者：周颖庞兴寿梁木兰广西壮族自治区玉林市食品药品检验所广西玉林537000 桂林医学院广西桂林541004

目的建立三七姜挥发油中樟脑、α-蒎烯含量的测定方法。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，色谱柱条件为DB-1701型（30m×0．25txm×0．32mm），检测器FID，温度280℃，进样口温度210℃，载气氮气（25mL／min），分流比为10：1。以环己... 详细信息

目的建立三七姜挥发油中樟脑、α-蒎烯含量的测定方法。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，色谱柱条件为DB-1701型（30m×0．25txm×0．32mm），检测器FID，温度280℃，进样口温度210℃，载气氮气（25mL／min），分流比为10：1。以环己酮为内标物、无水乙醇为溶剂。采用程序升温，柱温100℃，保持6min，以每分钟8℃的升温速率升至120℃，保持5min；再以每分钟3℃的升温速率升至150℃；最后以每分钟25℃的升温速率升至250℃，保持4．5min。结果三七姜挥发油中樟脑的线性回归方程为Y=1．1815x＋0．0066（r=0．9999，n=5），进样质量浓度范围为5．32～159．6μg／mL，平均回收率为99．10％，RSD为0．56％（n=6）；α-蒎烯的线性回归方程为Y=0．747X＋0．0036（r=1．000，n=5），进样质量浓度范围为2．18—87．2μg／mL，平均回收率为99．00％，RSD为0．10％（n=6）。结论该含量测定方法简便、可靠、重现性好、灵敏度高，为广西壮药三七姜药材质量的分析控制提供了可行的含量测定方法。

关键词：气相色谱法三七姜挥发油樟脑 α-蒎烯