检索结果-南通市图书馆

作者：李江利河南农业大学

学位级别：硕士

植物病原细菌的三型分泌系统(TTSS)是丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)侵染过程中重要的蛋白分泌系统。TTSS的编码、蛋白分泌等受到hrp基因的调节。研究hrp基因在病菌侵染过程中的表达情况有助于进一步探索hrp基因的功能,揭示植物病... 详细信息

植物病原细菌的三型分泌系统(TTSS)是丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)侵染过程中重要的蛋白分泌系统。TTSS的编码、蛋白分泌等受到hrp基因的调节。研究hrp基因在病菌侵染过程中的表达情况有助于进一步探索hrp基因的功能,揭示植物病原细菌的分子致病机制,而egfp标记突变体的构建是开展寄主-病原物的互作研究的重要策略。本试验拟以增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,以植物丁香假单胞菌烟草致病变种和番茄致病变种为材料,以其hrpA基因和hrpZ基因为靶标,通过体外重组和双亲结合技术,分别构建靶标基因与egfp融合表达的突变体,以及靶标基因缺失的egfp标记突变体,为今后研究丁香假单胞菌-植物的互作提供有用的材料工具。主要试验结果为:(1)以丁香假单胞菌番茄致病变种DC3000菌株和烟草致病变种4号菌株的基因组DNA为模板,扩增出了hrpA、hrpZ基因及其上下游片段;以pEGFP-C1为模板扩增出了egfp ORF全长。将相关的DNA片段进行体外重组后,得到了4个与预期大小一致的目的大片段CDE3、CTE1、CTE3、CTE4,它们分别为hrpZPto::egfp、hrpAPsta::egfp、hrpZPsta::egfp融合型片段和△hrpZPsta::egfp缺失型片段,为下一步构建融合型、缺失型突变体的构建奠定了基础。(2)试验将获得的目的大片段CDE3、CTE1、CTE3、CTE4分别连接至克隆载体pMD19-T,提取阳性克隆质粒pMD19-CDE3、pMD19-CTE1、pMD19-CTE3、pMD19-CTE4的DNA与自杀型质粒pKSM1的DNA同时进行BamHI和XbaI双酶切,切胶回收的酶切片段进行连接,得到了适于进行双亲接合所用的自杀型重组质粒pKSM-CDE3、pKSM-CTE1、pKSM-CTE3、pKSM-CTE4。(3)将含有质粒pKSM-CDE3的大肠杆菌S17-1与番茄致病变种DC3000野生型菌株进行双亲接合后获得了hrpZPto::egfp融合型突变体;将含有质粒pKSM-CTE1、pKSM-CTE3、pKSM-CTE4的大肠杆菌S17-1分别与烟草致病变种4号菌野生型菌株进行双亲结合获得了hrpAPsta::egfp、hrpZPsta::egfp融合型突变体和△hrpZPsta::egfp缺失型突变体。将获得的4个突变体菌株划线于KB培养基(30μg/ml Nalr)上,在紫外灯下观察发现hrpAPsta::egfp融合型突变体有明显的绿色荧光,而hrpZPto::egfp、hrpAPsta::egfp融合型突变体及△hrpZPsta::egfp缺失型突变体则无绿色荧光。(4)与野生型菌株相比,以上构建的4个egfp标记突变体人工接种烟草后,pv. tomato DC3000的hrpZPto::egfp融合型突变体的过敏性诱导能力明显降低;hrpAPsta::egfp、hrpZPsta::egfp融合型突变体及△hrpZPsta::egfp缺失型突变体的致病性也明显降低。

关键词：丁香假单胞菌番茄致病变种丁香假单胞菌烟草致病变种 hrpA hrpZ egfp标记突变体

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香料烟细菌性斑点病病原鉴定

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植物病理学报 2007年第3期37卷 232-236页

作者：姬广海方敦煌殷端李光西杜绍明云南农业大学教育部农业生物多样性与病害控制重点实验室昆明650201 云南省烟草科学研究所玉溪653100 云南烟草保山香料烟有限责任公司保山678000

2004～2005年在云南保山香料烟上发现一种由细菌侵染引起的新病害,称为香料烟细菌斑点病。该病主要危害叶片,初为黑褐色水浸状圆形或多角形小斑点,以后病斑扩大、连片,形成不规则的较大坏死斑。从病叶上分离到了28株细菌菌株,菌株接种... 详细信息

2004～2005年在云南保山香料烟上发现一种由细菌侵染引起的新病害,称为香料烟细菌斑点病。该病主要危害叶片,初为黑褐色水浸状圆形或多角形小斑点,以后病斑扩大、连片,形成不规则的较大坏死斑。从病叶上分离到了28株细菌菌株,菌株接种于香料烟上,发病症状与田间自然症状一致,并从回接病株上重新分离得到此病病原细菌。经过革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、LOPAT试验、生理生化特性分析和16S-23S rDNA序列分析,以及病原菌寄主范围测定,确定该病原菌为丁香假单胞菌烟草致病变种[Pseudomonas syringae pv.tabaci(Wolfet al.)Young et al.]。

关键词：香料烟细菌性斑点病病原鉴定丁香假单胞菌烟草致病变种

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烟草野火病菌特异性检测引物筛选及应用

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中国烟草科学 2018年第1期39卷 72-76页

作者：陈瑞朋卢凯张敏刘元德宗浩牛纪军刘文涛徐后娟山东农业大学植物保护学院山东泰安271018 山东临沂烟草有限公司山东临沂276004

烟草野火病是山东烟区主要的细菌性病害之一,为了能够对该病害进行精确、快速的分子鉴定,本研究从NCBI基因组数据库中下载了假单胞菌属25个不同菌种和127个丁香假单胞菌属不同致病变种的全基因组数据,利用Mauve 2.3.1进行全基因组比对,... 详细信息

烟草野火病是山东烟区主要的细菌性病害之一,为了能够对该病害进行精确、快速的分子鉴定,本研究从NCBI基因组数据库中下载了假单胞菌属25个不同菌种和127个丁香假单胞菌属不同致病变种的全基因组数据,利用Mauve 2.3.1进行全基因组比对,获得丁香假单胞菌烟草致病变种特异性区段。在此基础上利用Primer Premier 6.0进行引物设计,筛选出了一对丁香假单胞菌烟草致病变种的特异性检测引物40429。利用7株山东不同烟区的烟草野火病菌和4株分别来自于贵州、湖北、福建及云南的烟草野火病菌进行了该引物的适用性验证,结果表明该引物均可扩增得到大小为203 bp的单一目的条带。说明该引物对于烟草野火病菌的检测具有良好的适用性,可以用于野火病菌的分子鉴定。

关键词：烟草野火病丁香假单胞菌烟草致病变种特异性引物分子鉴定

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