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丁型肝炎病毒核酶反式切割HBV mRNA片段的实验研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第2期17卷 149-152页

作者：潘光锦韩金祥山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室济南250062

目的　探讨反式作用丁型肝炎病毒 (HDV)核酶体外切割乙型肝炎病毒 (HBV)mRNA片段的可行性。方法　将化学合成的核酶cDNA克隆到含有T7启动子的载体PGEM 4Z中。利用体外转录技术转录出核酶及底物 ,研究其体外切割活性。利用E H作图法进行... 详细信息

目的　探讨反式作用丁型肝炎病毒 (HDV)核酶体外切割乙型肝炎病毒 (HBV)mRNA片段的可行性。方法　将化学合成的核酶cDNA克隆到含有T7启动子的载体PGEM 4Z中。利用体外转录技术转录出核酶及底物 ,研究其体外切割活性。利用E H作图法进行核酶的酶促动力学研究。结果　在体外实验中显示两酶均能成功的将底物切割 ,37℃温浴 90min的切割百分率为 5 0 %和5 1%。利用E H作图法进行的酶促动力学研究中求得Rc1、Rc2的Km值分别为 0 6 1μmol L、0 5 8μmol L,Kcat值分别为 :0 6 4·min 1 、0 6 0·min 1 。结论　反式作用HDV核酶对非HDV底物 HBVmRNA片段的成功切割为寻找新的HBV的反义抑制手段开辟了途径。

关键词：丁型肝炎病毒核酶 HBV mRNA片段实验乙型肝炎病毒体外切割

丁型肝炎病毒中国SZ株的cDNA克隆及基因变异分析

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中华医学杂志 1994年第10期74卷 605-607页

作者：周思亮赵连三林勇唐红王锦蓉刘丽穆仁懋雷秉钧成都华西医科大学病毒性肝炎研究室

以四川地区１例无症状携带丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）患者的外周血为标本，采用逆转录－ＰＣＲ技术，获得了ＨＤＶ全基因组的ｃＤＮＡ克隆（ＨＤＶＳＺ９３株），全长１６８４ｂｐ。与世界其他七个地区株相比，其... 详细信息

以四川地区１例无症状携带丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）患者的外周血为标本，采用逆转录－ＰＣＲ技术，获得了ＨＤＶ全基因组的ｃＤＮＡ克隆（ＨＤＶＳＺ９３株），全长１６８４ｂｐ。与世界其他七个地区株相比，其核酸同源性为８１．８％～９５．４％；丁肝病毒抗原蛋白编码区核酸同源性为８８．９％～９６．１％，氨基酸同源性为８６，４％～９３．０％。另从１例慢性重型肝炎患者血清内克隆了丁肝病毒抗原蛋白（ＨＤＡｇ）编码基因（ＨＤＶ－ＳＺ９２株），与ＳＺ９３株相比，亦存在若干变异。对这些不同地区、不同病情ＨＤＶ株变异的可能意义进行了讨论。

关键词：丁型肝炎病毒单克隆抗体中国SZ株基因变异

丁型肝炎病毒核酶结构改建及其对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性

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中华肝脏病杂志 2001年第3期9卷 157-159页

作者：于乐成顾长海毛青李奇芬王宇明闵峰第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038

目的观察经过结构改建的丁型肝炎病毒核酶（ＨＤＶ核酶）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组ＲＮＡ是否存在剪切作用。方法对ＨＤＶ基因组核酶的茎ＩＶ区和底物结合区进行改建，获得３种针对ＨＣＶＲＮＡ的ＨＤＶ核酶ＲｚＣ１、ＲｚＣ２... 详细信息

目的观察经过结构改建的丁型肝炎病毒核酶（ＨＤＶ核酶）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组ＲＮＡ是否存在剪切作用。方法对ＨＤＶ基因组核酶的茎ＩＶ区和底物结合区进行改建，获得３种针对ＨＣＶＲＮＡ的ＨＤＶ核酶ＲｚＣ１、ＲｚＣ２和ＲｚＣ３。体外转录制备含ＨＣＶＲＮＡ５’一非编码区（５’－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５’－ＮＣＲ）及部分Ｃ区的底物ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ５’－ＮＣＲ－Ｃ），进行５’端放射性标记。在一定的ｐＨ、温度、Ｍｇ２＋浓度和有或无去离子甲酰胺存在等条件下，将核酶和底物按摩尔比１００：１混合，反应２ｈ后聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影，推算剪切百分率。结果ＲｚＣ１和ＲｚＣ２可剪切ＨＣＶＲＮＡ５’－ＮＣＲ—Ｃ，在适宜浓度的去离子甲酰胺存在时剪切效率较高。ＲｚＣ３对底物几乎无剪切活性。结论设计得当的ＨＤＶ基因组核酶可以剪切异源性ＲＮＡ分子ＨＣＶＲＮＡ。

关键词：丁型肝炎病毒核酶基因组丙型肝炎病毒基因治疗 RNA 剪切活性

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丁型肝炎病毒与HDV样病毒

中华实验和临床病毒学杂志 2023年第5期37卷 564-570页

作者：刘慧敏范熠陈文婷伍艺毛青陆军军医大学西南医院全军感染病研究所重庆市感染病研究重点实验室重庆400038

丁型肝炎(hepatitis D,HD)是一种严重的疾病。传统认为,丁型肝炎病毒(hepatitis Dvirus,HDV)是一种δ病毒,其感染与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)密切相关。近期,有学者研究发现HDV不依赖于HBV传播的证据,并翻开了δ病毒研究的... 详细信息

丁型肝炎(hepatitis D,HD)是一种严重的疾病。传统认为,丁型肝炎病毒(hepatitis Dvirus,HDV)是一种δ病毒,其感染与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)密切相关。近期,有学者研究发现HDV不依赖于HBV传播的证据,并翻开了δ病毒研究的新篇章。本文对HDV的起源、HDV的生命周期、HBV相关的HDV感染、非HBV相关的HDV感染、HDV样病毒以及面临的问题与展望进行综述。

关键词：病毒性肝炎丁型肝炎病毒 δ病毒乙型肝炎病毒新篇章

丁型肝炎病毒感染标志物在乙型肝炎病毒感染者中的检测研究

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中华医院感染学杂志 2013年第13期23卷 3294-3295页

作者：吴志德周沛林武穴市第一人民医院检验科湖北武穴435400 随州市疾病预防控制中心检验科湖北随州441300

目的通过检测和分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者中丁型肝炎病毒(HDV)感染标志物的分布状况及HBV感染相关指标关联性分析,阐述HDV感染标志物的检测在HBV-HDV重叠感染患者中的临床意义。方法收集HBV感染者的一般资料和血样,通过酶联免疫分析... 详细信息

目的通过检测和分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者中丁型肝炎病毒(HDV)感染标志物的分布状况及HBV感染相关指标关联性分析,阐述HDV感染标志物的检测在HBV-HDV重叠感染患者中的临床意义。方法收集HBV感染者的一般资料和血样,通过酶联免疫分析法检测五项血清HBV感染免疫学标志物指标、HDVAg和Anti-HDV,结合临床诊断和生化指标进行分析,探讨指标间相关性。结果收集确诊HBV感染者样本346例,其中乙型肝炎病毒携带者62例占17.9%,急性乙型肝炎8例占2.3%,慢性乙型肝炎147例占42.5%,慢性重型乙型肝炎4例占1.2%,乙型肝炎后肝硬化125例占36.1%;检出总体HDV感染率为4.6%,男性显著高于女性,慢性重型乙型肝炎的HDV感染率最高,为25.0%,HDV感染者肝损伤发生率较高。结论重症肝病病例的HDV感染显著增高,提示HDV感染与肝病的严重程度相关,建议对肝病患者开展血清HDV感染标志物检查,鉴别是否存在HDV重叠感染。

关键词：乙型肝炎病毒丁型肝炎病毒血清学临床检验

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丁型肝炎病毒基因组核酶的反式剪切活性

第三军医大学学报 2000年第4期22卷 305-306页

作者：于乐成顾长海毛青李奇芬王宇明第三军医大学附属西南医院感染病科全军传染病专科中心重庆400038

目的观察丁型肝炎病毒2种基因组核酶(HDVgenomicribozyme,***)是否存在反式剪切活性。方法合成***74和***55的cDNA ,克隆入质粒pGEM 4Z ,体外转录获取核酶RNA ;同时从质粒pRz277B上转录出同源性底物RNA ,以α 32p UTP标志 ;再将核酶与... 详细信息

目的观察丁型肝炎病毒2种基因组核酶(HDVgenomicribozyme,***)是否存在反式剪切活性。方法合成***74和***55的cDNA ,克隆入质粒pGEM 4Z ,体外转录获取核酶RNA ;同时从质粒pRz277B上转录出同源性底物RNA ,以α 32p UTP标志 ;再将核酶与底物按比例混合 ,在一定条件下观察是否出现剪切作用。结果启动反应30min后 ,可以观察到剪切产物 ,90min后剪切反应更加明显。结论 ***74和***55均具有反式剪切活性。

关键词：丁型肝炎病毒反式剪切基因组核酶

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丁型肝炎病毒中国湖南株高变区部分序列分析

中华微生物学和免疫学杂志 1995年第3期15卷 202-205页

作者：刘芳华傅希贤田庚善陈梅龄北京医科大学第一医院 100034

用耐高温逆转录以及套式聚合酶链反应方法,对HDV中国湖南株基因组高变区1642～417片段(D1),以及保守区681～895片段(D3)进行扩增,用荧光法直接测序,对其进行序列分析。D1片段除去引物外可判读222nt(1662～197),D3片段除去引物还有176nt(... 详细信息

用耐高温逆转录以及套式聚合酶链反应方法,对HDV中国湖南株基因组高变区1642～417片段(D1),以及保守区681～895片段(D3)进行扩增,用荧光法直接测序,对其进行序列分析。D1片段除去引物外可判读222nt(1662～197),D3片段除去引物还有176nt(701～875)。两段序列分别与美国株、意大利株、日本株以及中国河南株进行了比较。结果显示,中国湖南株高变区1662～197片段(D1)与日本株的同源性仅为44.06％,与意大利株的同源性相对较高,但也仅为72.57％。日本株在该片段的同源性特别低,而中国河南株在该片段的同源性并不特别低。各株之间在该片段的同源性仅为44.06％～72.56％,说明HDV基因组1662～197片段是高变区。中国湖南株D1片段与其它各株的同源性为44.06％～72.57％,且与中国河南株同源性也仅为62.61％,提示中国湖南株可能系一新的亚型。各株之间在701～875片段(D3)的同源性较高,中国湖南株与意大利株更为接近(93.03％),而与中国河南株(91.82％)、美国株(89.54％)和日本株(89.54％)的同源性相对较低。各株之间的同源性比较接近,提示HDV基因组701～875片段是相对保守区。同源性的高低与地理位置分布不一致,其原因有待进一步研究。

关键词：丁型肝炎病毒序列分析聚合酶链反应

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丁型肝炎病毒和乙型肝炎病毒感染关系的探讨

解放军医学杂志 1990年第5期15卷 353-355页

作者：张光曙赵汇川赵世科李琳 88医院武汉同济医院临床免疫室

用免疫组化法检查283例肝组织切片的HDV染色,检出HDV39例(13.8％)。其中1例未查HBVM;19例HBVM阴性;263例曾有HBV感染的肝组织内检出HDV者39例,占14.8％(199例HBsAg阳性病例中肝组织内检出HDV者36例,占18.1％,64例HBsAg阴性者检出3例,占... 详细信息

用免疫组化法检查283例肝组织切片的HDV染色,检出HDV39例(13.8％)。其中1例未查HBVM;19例HBVM阴性;263例曾有HBV感染的肝组织内检出HDV者39例,占14.8％(199例HBsAg阳性病例中肝组织内检出HDV者36例,占18.1％,64例HBsAg阴性者检出3例,占4.7％)。国内HDV感染分布不一,除可能与地区、调查样本大小有关外,特别是与调查对象HBV感染的临床诊断分型更有密切关系。慢性乙肝HDV检出率明显高于急性乙肝,提示HDV感染可能是HBV感染慢性化因素之一。同时,大多数(87.2％)情况下,肝组织内可同时检出HDV和HBsAg、HBcAg,单独检出HDV者是少数(12.8％),说明HDV和HBV间存在密切关系。

关键词：丁型肝炎病毒乙型肝炎病毒感染

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丁型肝炎病毒感染的血清流行病学观察

中华流行病学杂志 1990年第4期11卷 202-204页

作者：赵兴耿国玉河北医学院

1987年4月至1988年10月间,本文应用酶联吸附法(EIA)对石家庄地区271例乙型肝炎病毒感染者进行了抗-HD的检测,共发现35例阳性,阳性率12.92%,其中男性阳性率14.06%(27/192),女性为10.13%(8/79),男女间差异无统计学意义(P＞0.05),提示石家... 详细信息

1987年4月至1988年10月间,本文应用酶联吸附法(EIA)对石家庄地区271例乙型肝炎病毒感染者进行了抗-HD的检测,共发现35例阳性,阳性率12.92%,其中男性阳性率14.06%(27/192),女性为10.13%(8/79),男女间差异无统计学意义(P＞0.05),提示石家庄地区可能为丁型肝炎病毒感染的高发区。在这些人群中,慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎和肝硬化的抗-HD阳性率明显高于HBsAg携带者,但三者相互间差异无统计学意义。表明合并或重叠感染HDV对乙肝慢性化及肝硬化的形成具有重要的意义。本研究证明在乙型肝炎病毒感染人群中丁型肝炎病毒与年龄、性别、职业等因素关系不密切。

关键词：丁型肝炎病毒血清流行病学感染