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2,5-DKG还原酶ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达

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微生物学通报 1999年第4期26卷 260-265页

作者：李越陈策实尹光琳中国科学院上海生物工程研究中心上海200233

参照文献上的2，5-二酮基-D-葡萄糖酸（简称2，5-DKG）还原酶II基因序列，合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点，抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体为模板进行PCR反应，克隆得到2，5-DKG还原酶II基因，酶切验证与预期... 详细信息

参照文献上的2，5-二酮基-D-葡萄糖酸（简称2，5-DKG）还原酶II基因序列，合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点，抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体为模板进行PCR反应，克隆得到2，5-DKG还原酶II基因，酶切验证与预期的结果相符合。将此片段克隆到pGEM-T载体上保存．将2，5-DKG还原酶II基因用EcoRI和BamHI内切酶切下，连接到pBV220载体上，构建成表达载体。42℃诱导不能得到稳定的蛋白表达条带和酶活力，测序发现基因的3’末端的原PCR引物外少合了一个碱基，终止密码子发生移码突变而消失。此外在5’端的启始密码子ATG前有三个碱基与pBV220载体上的SD序列发生配对。据此，重新设计和合成了PCR引物，并用pBV220和pBL4载体构建了两个表达载体。42℃诱导表达均得到了稳定的表达条带和较高的酶活力．

关键词：葡萄糖酸还原酶 ⅱ基因 PCR 克隆表达载体

不同宿主来源的维氏气单胞菌外膜蛋白Aⅱ基因的克隆及比较

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中国兽医科学 2014年第3期44卷 271-276页

作者：康元环杨滨僮孟庆峰陈龙单晓枫王惠钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心吉林长春130062

为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅱ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌O... 详细信息

为探讨外膜蛋白AⅡ(OMPAⅡ)作为维氏气单胞菌共同保护性抗原的可能性,对不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅱ基因进行了克隆,获得了1 100bp左右的目的基因,并利用多种生物学软件对其序列进行了比较。结果表明,不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅱ基因序列的同源性在95.1%以上,编码氨基酸序列的同源性在97.3%以上,而且所有分析序列均具有明显的保守结构域,说明不同宿主来源的维氏气单胞菌OMPAⅡ具有很高的保守性;相对于ATCC35624和YP004393583.1来说,它们之间的差异主要表现在,CVCC3700、QXF、WL161、NJ34、NN725和BAF63175.1的OMPAⅱ基因缺失了3个碱基(CAA)。本研究结果为OMPAⅡ作为维氏气单胞菌基因工程亚单位疫苗候选成分提供了一定的理论依据。

关键词：不同宿主维氏气单胞菌 OMPA ⅱ基因克隆

急性白血病患者Topoⅱ基因、P170蛋白表达的检测及临床意义

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中华血液学杂志 2002年第7期23卷 374-375页

作者：赵智刚董作仁林凤茹王福旭杜行严刘泽林刘林娜姚尔固河北医科大学附属第二医院石家庄050000

目的:探讨纳络酮治疗肝硬化并发肝性脑病的临床疗效及可能机制.方法:80例肝硬化并发肝性脑病患者随机分两组,在针对病因及诱因综合治疗的基础上治疗组用纳络酮治疗;对照组用精氨酸治疗,观察其疗效,测定治疗前后血浆内啡肽(β-EP)水平及... 详细信息

目的:探讨纳络酮治疗肝硬化并发肝性脑病的临床疗效及可能机制.方法:80例肝硬化并发肝性脑病患者随机分两组,在针对病因及诱因综合治疗的基础上治疗组用纳络酮治疗;对照组用精氨酸治疗,观察其疗效,测定治疗前后血浆内啡肽(β-EP)水平及血氨水平.结果:治疗组总有效率为87.5%,对照组总有效率为60.0%,治疗组优于对照组(P＜0.05).两组治疗后血氨均明显下降,无显著差异(P＞0.05).治疗组治疗后,血浆β-EP水平明显下降,较对照组有显著差异(P＜0.05).结论:纳洛酮治疗肝硬化并发肝性脑病疗效显著,推测其作用机理是纳洛酮可通过拮抗内毒素诱发的内啡肽增加使肝性脑病病人的症状改善.

关键词：急性白血病 Topo ⅱ基因 P170蛋白流式细胞术

香蕉线条病毒ORFⅱ基因的原核表达及抗体制备

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植物病理学报 2009年第1期39卷 100-103页

作者：何云蔚陈秀阮小蕾刘福秀李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642

ORFⅡ gene of Banana streak virus GuangDong isolate(BSV-GD) was amplified from a BSV-GD recombinant plasmid by PCR,and the gene was expressed by being cloned into prokaryote expression vector pET-28b(+).The fusion protein was about 16.5 kDa in size and was soluble with SDS-PAGE *** purified protein was obtained by using the histidine labeling kit of N-terminus of *** antiserum was obtained by immunizing healthy rabbits with the purified *** blot and ELISA analysis showed that the special antiserum of BSV possessed high titer,which was tested as 1∶51 *** study was a base for further research on BSV including ORFⅡ gene function and virus detection.

关键词：香蕉生产病毒病抗体制备原核表达线条 ⅱ基因 ORF 植株矮化

金定鸭Apo VLDL ⅱ基因多态性及其与生产性能的关联分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2010年第4期31卷 73-76页

作者：张依裕徐琪张海波段修军孙国波陈国宏扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

根据鸡和鸭Apo VLDL ⅱ基因序列设计3对特异性引物,对金定鸭外显子1、2和4编码区进行扩增,利用PCR-SSCP方法检测单核苷酸多态及其对体重、体尺、屠宰性能、肉品质、总蛋白、血清三酰甘油和总胆固醇的遗传效应。结果表明:外显子1和2未检... 详细信息

根据鸡和鸭Apo VLDL ⅱ基因序列设计3对特异性引物,对金定鸭外显子1、2和4编码区进行扩增,利用PCR-SSCP方法检测单核苷酸多态及其对体重、体尺、屠宰性能、肉品质、总蛋白、血清三酰甘油和总胆固醇的遗传效应。结果表明:外显子1和2未检测到多态;外显子4检测到3种基因型,即AA、AB和BB,AA为优势基因型,A为优势等位基因,序列比对发现在内含子3内发生G47A和G136A突变,外显子4编码区内发生C228T突变,为无义突变;该基因座的遗传杂合度为0.28,属中等遗传杂合度,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡;AA基因型个体的胸肌水分显著高于BB基因型,AB基因型个体的肌肉剪切力值显著高于BB基因型,而其他指标在各基因型间差异均不显著,推测该片段的多态位点可能对肉品质有一定的影响。

关键词：金定鸭 Apo VLDL ⅱ基因 PCR-SSCP 生产性能

人肝癌组织胰岛素样生长因子ⅱ基因P4启动子甲基化变化及其意义

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中华医学杂志 2006年第8期86卷 565-567页

作者：汤绍辉杨冬华黄卫周鸿科卢筱华叶刚暨南大学附属第一医院消化科广州510630

胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)是肝细胞产生的一种多功能调节因子,其基因含4个不同的启动子(P1～P4).在胎肝和新生儿肝,IGF-ⅡmRNA表达量最高,其中P3活性最大,其次分别为P4及P2,P1失活;在成人肝脏,IGF-ⅡmRNA水平显著下调,约为新生儿峰值... 详细信息

胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)是肝细胞产生的一种多功能调节因子,其基因含4个不同的启动子(P1～P4).在胎肝和新生儿肝,IGF-ⅡmRNA表达量最高,其中P3活性最大,其次分别为P4及P2,P1失活;在成人肝脏,IGF-ⅡmRNA水平显著下调,约为新生儿峰值的1/10,其中P1活性最大,P2～P4活性明显降低或失活[1].近年发现,IGF-Ⅱ在人类肝脏的癌前病变及肝癌中呈过量表达[2,3],但其详细机制尚未明确.本研究探讨了肝癌组织中P4是否存在低甲基化及其与P4转录子表达变化的关系,旨在阐明IGF-ⅡP4启动子在肝细胞癌变中的作用及其临床病理意义。

关键词：人胰岛素样生长因子Ⅱ 启动子甲基化人肝癌组织 ⅱ基因 P4 其意义 mRNA表达量 IGF-Ⅱ mRNA水平调节因子

康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅱ基因与乳酸菌非抗性穿梭表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达

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饲料工业 2017年第14期38卷 47-51页

作者：刘燕张宏福孙哲杨琳王瑞军内蒙古农业大学职业技术学院内蒙古包头014109 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100094 华南农业大学动物科技学院广东广州510642 内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018

以康宁木霉AS3.2774 m RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增了1 413 bp的CBHⅡ全长基因,利用T-A克隆,将CBHⅡ克隆至克隆载体p MD18-T Simple Vector,构建质粒p MD18-T-CBHⅡ。以Sma I和Sph I双酶切p MD18-T-CBHⅡ和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thy A)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体p W425t,将纯化的CBHⅡ亚克隆到p W425t中,得到原核表达重组质粒p W425t-CBHⅡ,可在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达。将p W425t-CBHⅡ转化在thy A基因缺陷型的大肠杆菌感受态*** X13中,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定、分析测序以及生长功能弥补筛选阳性克隆。SDS-PAGE分析,约49.6 k D的蛋白可见,刚果红染色显示重组大肠杆菌可产生明显的水解圈,并用p NPC法测得重组大肠杆菌的CBHⅡ酶活力在温度50℃、p H值5.0时达到最大。

关键词：纤维素酶 CBH ⅱ基因大肠杆菌表达

农杆菌介导WRKY ⅱ基因转化马铃薯抗旱性研究

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作物杂志 2012年第4期 30-33,I0003页

作者：张欢张丽莉卢翠华王石潘映雪林忠平东北农业大学农学院黑龙江哈尔滨150030 北京大学生命科学学院北京100871

以马铃薯品种东农308和费乌瑞它微型薯为外植体,利用农杆菌介导法,将抗逆基因p3300-Ubi-WRKY Ⅱ导入马铃薯,经PCR和Southern-blot杂交检测,东农308和费乌瑞它分别有7株和5株呈阳性,证明p3300-Ubi-WRKY ⅱ基因已整合到马铃薯基因组中。... 详细信息

以马铃薯品种东农308和费乌瑞它微型薯为外植体,利用农杆菌介导法,将抗逆基因p3300-Ubi-WRKY Ⅱ导入马铃薯,经PCR和Southern-blot杂交检测,东农308和费乌瑞它分别有7株和5株呈阳性,证明p3300-Ubi-WRKY ⅱ基因已整合到马铃薯基因组中。将转基因植株进行抗旱性试验,结果表明,转基因植株对水分胁迫的抗性比对照有显著提高。

关键词：马铃薯农杆菌介导法 WRKY ⅱ基因抗旱性

壳聚糖DNA电化学生物传感器的伏安法研究以及对NPT ⅱ基因的检测

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枣庄学院学报 2019年第2期36卷 15-21页

作者：任勇淄博师范高等专科学校数理科学系山东淄博255130

将十八碳酸作为修饰剂制得性质改良的碳糊电极,利用壳聚糖与羧基的静电作用在电极表面修饰一层天然阳离子聚合物壳聚糖膜,进而进行DNA探针的固定和靶DNA的杂交.以亚甲基蓝(MB)为杂交指示剂用循环伏安法(CV)优化了DNA的固定和杂交条件.... 详细信息

将十八碳酸作为修饰剂制得性质改良的碳糊电极,利用壳聚糖与羧基的静电作用在电极表面修饰一层天然阳离子聚合物壳聚糖膜,进而进行DNA探针的固定和靶DNA的杂交.以亚甲基蓝(MB)为杂交指示剂用循环伏安法(CV)优化了DNA的固定和杂交条件.用该电化学生物传感器以微分脉冲伏安法检测了转基因油菜外源NPTⅱ基因,性能良好.

关键词： DNA电化学生物传感器碳糊电极壳聚糖伏安法 NPT ⅱ基因