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鸡胸软骨中ⅱ型胶原的制备工艺优化

食品科学 2015年第6期36卷 24-28页

作者：程媛曹慧徐斐于劲松袁敏上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

对鸡胸软骨ⅱ型胶原的制备工艺进行优化。采用盐酸胍和Na Cl 2种抽提方法去除杂蛋白,然后用胃蛋白酶酶解并考察酶解温度、酶解时间和酶添加量对胶原提取率的影响。结果表明:4 mol/L的盐酸胍能有效去除杂蛋白;当酶解温度18℃、胃蛋白酶... 详细信息

对鸡胸软骨ⅱ型胶原的制备工艺进行优化。采用盐酸胍和Na Cl 2种抽提方法去除杂蛋白,然后用胃蛋白酶酶解并考察酶解温度、酶解时间和酶添加量对胶原提取率的影响。结果表明:4 mol/L的盐酸胍能有效去除杂蛋白;当酶解温度18℃、胃蛋白酶添加量1.59%、酶解43 h时提取率最高,且此条件下的胶原提取率为56.54%,且保持着完整的二级结构。经过酶解后制备的ⅱ型胶原电泳图谱出现α、β2条带,无其他杂带,ⅱ型胶原纯度较高。

关键词：鸡胸软骨 ⅱ型胶原提取

联合检测血清X型胶原α1链和ⅡA型前胶原氨基端肽在骨关节炎早期诊断中的意义

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中华实验外科杂志 2017年第2期34卷 332-334页

作者：马金赛任姜栋张晓岗新疆医科大学第一附属医院关节外科乌鲁木齐830054

目的评价联合检测血清Ⅹ型胶原α1链（COL10A1）和血清ⅡA型前胶原氨基端肽（PⅡANP）在骨关节炎早期诊断中的价值。方法所收集89例膝骨关节炎（KOA）患者均为2014年9月至2016年4月在新疆医科大学第一附属医院关节外科门诊就诊和住院患... 详细信息

目的评价联合检测血清Ⅹ型胶原α1链（COL10A1）和血清ⅡA型前胶原氨基端肽（PⅡANP）在骨关节炎早期诊断中的价值。方法所收集89例膝骨关节炎（KOA）患者均为2014年9月至2016年4月在新疆医科大学第一附属医院关节外科门诊就诊和住院患者，采集清晨空腹血5 ml，依据影像学Kellgren-Lawrence（K-L）分级评分系统进行病情严重程度分级，Ⅰ级20例，Ⅱ级25例，Ⅲ级23例，Ⅳ级21例，正常对照组23例，所有血清标本应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测COL10A1和PⅡANP浓度。结果人血清COL10A1水平在KOA组[（1.30±0.65） ng/ml]明显高于正常对照组[（0.46±0.15） ng/ml]，差异有统计学意义（P＝0.000），对照组血清PⅡANP水平[（23.88±4.68） ng/ml]明显高于KOA组[（13.22±4.74） ng/ml]，差异有统计学意义（P＝0.000），血清COL10A1在KOA-Ⅱ级组[（1.84±0.44） ng/ml]和Ⅲ级组水平[（1.68±0.47） ng/ml]最高，与正常对照组[（0.46±0.15） ng/ml]比较差异均有统计学意义（P＝0.000），血清PⅡANP水平在KOA各亚组随着K-L分级等级依次降低，Ⅰ级组[（19.37±3.01） ng/ml]〉Ⅱ级组[（13.14±2.68） ng/ml]〉Ⅲ级组[（11.41±3.32） ng/ml]〉Ⅳ级组[（9.44±3.58） ng/ml]，且与正常对照组[（23.88±4.68） ng/ml]比较差异均有统计学意义（P＝0.001、0.000、0.000、0.000）。结论骨关节炎患者血清COL10A1水平较正常对照组高，而PⅡANP水平较正常对照组低，因此联合检测血清生物学标志物COL10A1和PⅡANP有望成为KOA早期诊断的一种有效方法。

关键词： X型胶原 ⅱ型胶原骨性关节炎血清X型胶原d1链血清ⅡA型前胶原氨基端肽

鸡胸软骨ⅱ型胶原对大鼠类风湿性关节炎的作用

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食品与机械 2008年第1期24卷 81-85,163页

作者：曹慧许时婴江南大学食品学院江苏无锡214122

目的:获得高纯度的ⅱ型胶原,并考察其对类风湿性关节炎的作用;方法:以鸡胸软骨为原料制备ⅱ型胶原,在酸性条件下添加胃蛋白酶酶解鸡胸软骨ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,采用DEAE-Sepharose CL 6B离子交换柱纯化酶解样品制得ⅱ型胶原;通过SD... 详细信息

目的:获得高纯度的ⅱ型胶原,并考察其对类风湿性关节炎的作用;方法:以鸡胸软骨为原料制备ⅱ型胶原,在酸性条件下添加胃蛋白酶酶解鸡胸软骨ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,采用DEAE-Sepharose CL 6B离子交换柱纯化酶解样品制得ⅱ型胶原;通过SDS-PAGE电泳、氨基酸分析及X-射线衍射表征ⅱ型胶原的纯度与结构;建立大鼠类风湿性关节炎模型(CIA),研究不同浓度的ⅱ型胶原对大鼠类风湿性关节炎的影响;结果:经过纯化的ⅱ型胶原纯度为95.21%,呈典型的三股螺旋结构;口服ⅱ型胶原能明显降低CIA大鼠的关节炎指数,缓解关节红肿等症状;同时,实验组大鼠的T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2(IL-2)的分泌受到抑制,白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平也显著低于阴性对照组。结论:ⅱ型胶原能作为膳食补充剂防治人类类风湿性关节炎。

关键词：鸡胸软骨 ⅱ型胶原类风湿性关节炎

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鸡关节软骨ⅱ型胶原的制备

食品科学 2007年第4期28卷 148-152页

作者：曹慧许时婴江南大学食品学院江苏无锡214036

本文以鸡关节软骨为原料制备ⅱ型胶原。在酸性条件下添加不同浓度的胃蛋白酶酶解鸡关节软骨ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,使ⅱ型胶原由不溶性转变为可溶性,研究底物粘度随酶解时间的变化,确定最佳的酶浓度及酶解时间。采用DEAE-Sephalose C... 详细信息

本文以鸡关节软骨为原料制备ⅱ型胶原。在酸性条件下添加不同浓度的胃蛋白酶酶解鸡关节软骨ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,使ⅱ型胶原由不溶性转变为可溶性,研究底物粘度随酶解时间的变化,确定最佳的酶浓度及酶解时间。采用DEAE-Sephalose CL 6B离子交换柱和去离子水重复洗涤两种方法对酶解样品进行纯化制得ⅱ型胶原,研究表明,胃蛋白酶最适添加浓度1%(W/W),最佳酶解时间24h。两种纯化方法的ⅱ型胶原提取率分别为67%和81%。SDS-PAGE电泳、高效液相色谱、氨基酸成分分析及紫外吸收光谱测定结果证实了由鸡关节软骨所制备的ⅱ型胶原具有较高纯度。

关键词： ⅱ型胶原制备鸡关节软骨

ⅱ型胶原与Bcl-2在骨关节炎软骨细胞中的表达

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中国矫形外科杂志 2012年第19期20卷 1786-1789页

作者：马春辉阎作勤郭常安张光健上海交通大学附属第一人民医院骨科上海200080 复旦大学附属中山医院骨科上海200032

[目的]比较骨关节炎患者软骨细胞与正常软骨细胞内ⅱ型胶原mRNA与Bcl-2mRNA的表达情况,分析两者间的关系,探讨两类骨关节炎发病机制的异同。[方法]收集原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的关节软骨各8例,并以9例正常关节软骨作对照,采用... 详细信息

[目的]比较骨关节炎患者软骨细胞与正常软骨细胞内ⅱ型胶原mRNA与Bcl-2mRNA的表达情况,分析两者间的关系,探讨两类骨关节炎发病机制的异同。[方法]收集原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的关节软骨各8例,并以9例正常关节软骨作对照,采用逆转录/聚合酶链反应(reverse transcriptase/polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测ⅱ型胶原mRNA与Bcl-2mRNA在骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中的表达情况。[结果]原发性骨关节炎与继发性骨关节炎组ⅱ型胶原mRNA的表达均明显低于正常组,差异均有统计学意义(Pⅱ型胶原mRNA的表达差异没有统计学意义(P=0.716);Bcl-2 mRNA在原发性骨关节炎组与继发性骨关节炎组中的表达较对照组均升高(P0.05)。[结论]软骨细胞内ⅱ型胶原表达的减少直接导致了ⅱ型胶原质和量的改变,是骨关节炎发病的重要环节,是两类骨关节炎发病的共同途径;Bcl-2是骨关节炎发病过程的重要调节因子,是软骨细胞和细胞外基质沟通的桥梁。

关键词：骨关节炎 ⅱ型胶原 Bcl-2 软骨细胞

ⅱ型胶原羧基端端肽对骨关节炎早期诊断和病情评估的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第5期30卷 653-657页

作者：任戈亮桂鉴超王黎明徐燕蒋逸秋高航飞南京医科大学附属南京第一医院骨科江苏南京210006

目的:定量检测骨关节炎(OA)大鼠模型血清、关节软骨蛋白提取液中ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)的变化,探讨其作为OA早期诊断及病情评估指标的价值和意义。方法:SD大鼠行前交叉韧带切断术诱导OA模型,将大鼠随机分为模型组和假手术组。于造... 详细信息

目的:定量检测骨关节炎(OA)大鼠模型血清、关节软骨蛋白提取液中ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)的变化,探讨其作为OA早期诊断及病情评估指标的价值和意义。方法:SD大鼠行前交叉韧带切断术诱导OA模型,将大鼠随机分为模型组和假手术组。于造模后不同时间点分批取血并处死取关节标本,检测血清及软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平,观察病理变化。结果:模型组术后2周开始出现OA特征性病理变化且逐渐加重,CTX-Ⅱ水平在术后3天开始不断升高。两组血清及软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平在造模后各时间点均有统计学差异,血清和软骨蛋白提取液中CTX-Ⅱ水平变化具有相关性。结论:在大鼠OA模型中,血清CTX-Ⅱ水平在未出现明显病理变化时即已开始增高,并与病灶区软骨中CTX-Ⅱ表达一致,可作为OA早期诊断和病情评估的参考指标。

关键词：骨关节炎软骨 ⅱ型胶原 CTX-Ⅱ

bFGF、IGF-Ⅰ对兔关节软骨细胞ⅱ型胶原表达的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2006年第5期26卷 326-328,342页

作者：苏新戴心怡张耀娟章宏伟南京医科大学第一附属医院整形烧伤外科江苏南京210029 南京医科大学病原生物学系江苏南京210029

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(insuline-likegrowthfactor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)单独及联合应用对体外培养多次传代的兔关节软骨细胞ⅱ型胶原表达的影响,探讨传代多次的软骨细胞作为... 详细信息

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(insuline-likegrowthfactor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)单独及联合应用对体外培养多次传代的兔关节软骨细胞ⅱ型胶原表达的影响,探讨传代多次的软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:第3、5、7代体外培养的兔关节软骨细胞,以常规培养组作为对照组,bFGF(5ng/ml)或和IGF-Ⅰ(100ng/ml)单独刺激及联合刺激作为实验组,免疫组化法测定ⅱ型胶原的定性表达,并通过图像分析作半定量分析。结果:对照组细胞第5代以后无阳性表达。第3、5、7代细胞在bFGF或IGF-Ⅰ刺激下,ⅱ型胶原表达强度显著高于对照组(Pⅱ型胶原表达强度均显著高于单独以bFGF或IGF-Ⅰ刺激组(Pⅱ型胶原的表达,且联合应用时促进作用更为明显。多次传代软骨细胞在生长因子刺激下,仍有再分化的能力,而有成为软骨组织工程种子细胞的可能。

关键词：软骨细胞组织工程碱性成纤维细胞生长因子胰岛素样生长因子-Ⅰ ⅱ型胶原

降钙素对兔膝骨性关节炎ⅱ型胶原和基质蛋白酶-1的影响

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中国老年学杂志 2013年第1期33卷 130-132页

作者：尤笑迎郑州人民医院骨科河南郑州450003

目的探讨降钙素(CT)对兔膝骨性关节炎(KOA)关节软骨、ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶(MMP)-1的影响。方法将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制KOA模型,A组除切开皮肤和关节... 详细信息

目的探讨降钙素(CT)对兔膝骨性关节炎(KOA)关节软骨、ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶(MMP)-1的影响。方法将36只健康大耳白兔随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、CT治疗组(C组),B、C两组采用改良Hulth法复制KOA模型,A组除切开皮肤和关节腔外,不做其他处理,从术后第6周开始C组每天皮下注射CT 5 U/kg,A、B组给予等量生理盐水皮下注射,连续注射20 d后处死动物。观察关节软骨病理形态、软骨基质ⅱ型胶原及MMP-1的变化。结果与A组相比较,B组JP和Mankin评分明显升高,关节软骨损伤明显加重,ⅱ型胶原表达减少而MMP-1表达增高(Pⅱ型胶原表达明显增多,而MMP-1表达则明显减少(Pⅱ型胶原降解,减少软骨基质破坏,从而减轻KOA软骨的损伤。

关键词：膝骨性关节炎 ⅱ型胶原 MMP-1 降钙素

核心结合因子和ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达

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中华高血压杂志 2012年第9期20卷 847-851页

作者：余毅曹翠云南京军区福州总医院血液净化科福建福州350025

目的观察核心结合因子(Cbfα1)和ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达,探讨慢性肾脏病5期血管钙化发生的可能机制。方法 40只SD雄性大鼠随即分为4组:残肾+高磷组(n=10),残肾+正常磷组(n=10),假手术+正常磷组(n=10),假手术+高... 详细信息

目的观察核心结合因子(Cbfα1)和ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达,探讨慢性肾脏病5期血管钙化发生的可能机制。方法 40只SD雄性大鼠随即分为4组:残肾+高磷组(n=10),残肾+正常磷组(n=10),假手术+正常磷组(n=10),假手术+高磷组(n=10)。分别行5/6肾切除或假手术,术后开始给予高磷饮食或正常磷饮食16周。收集尿量检测24h尿蛋白,取血检测血清磷、肌酐、尿素氮,取胸主动组织,von kossa染色检测血管钙化,RT-PCR检测Cbfα1和ⅱ型胶原mRNA表达,免疫组化或Western-Blot检测Cbfα1和ⅱ型胶原蛋白表达。结果与其他3组比较,残肾+高磷组大鼠尿蛋白、血磷、尿素氮和肌酐明显增高(Pⅱ型胶原的表达明显增多(Pⅱ型胶原阳性积分呈正相关(r=0.525,0.640,Pⅱ型胶原mRNA表达明显上调(Pⅱ型胶原的表达呈正相关。Cbfα1、ⅱ型胶原的表达增多可能是高磷诱导的残肾大鼠血管钙化的重要机制之一。

关键词：高血磷残肾大鼠核心结合因子 ⅱ型胶原血管钙化