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ATG5通过细胞自噬调控Ⅱ型胶原表达的实验研究

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陆军军医大学学报 2023年第17期45卷 1828-1837页

作者：邓琳先梦麟杨玉有耿娜娜邝彪郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院骨科重庆400010

目的探究自噬相关蛋白ATG5通过影响自噬功能调控软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达水平。方法 GEO数据库下载13例人软骨组织样本的转录组数据分析ATG5和COL2A1表达的相关性。雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)和巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1,BafA1)处... 详细信息

目的探究自噬相关蛋白ATG5通过影响自噬功能调控软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达水平。方法 GEO数据库下载13例人软骨组织样本的转录组数据分析ATG5和COL2A1表达的相关性。雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)和巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1,BafA1)处理人软骨细胞C28/I2,Western blot及免疫荧光检测Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,COL2)的表达水平。构建人源COL2A1启动子质粒,双荧光素酶报告实验检测过表达ATG5对COL2A1启动子转录活性的影响。mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒动态监测过表达和敲低ATG5后自噬流的变化。Western blot检测过表达或敲低ATG5后Rapa及BafA1对COL2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平的影响。结果 GEO数据库相关性分析结果显示在人软骨组织中ATG5和COL2A1的mRNA表达呈现正相关;Rapa和BafA1分别显著促进和抑制C28/I2细胞COL2的表达(PⅡ型胶原的表达,且ATG5调控Ⅱ型胶原的表达依赖于细胞自噬。

关键词：骨关节炎软骨细胞 Ⅱ型胶原细胞自噬 ATG5

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吗替麦考酚酯对大鼠胚胎耳郭发育的影响

中国组织工程研究 2023年第24期27卷 3818-3823页

作者：陈倩张杨李高峰湖南师范大学附属第一医院(湖南省人民医院) 湖南省长沙市410013

背景:先天性小耳畸形发病机制尚不明确,目前研究认为小耳畸形与环境及遗传因素共同作用有关,药物致畸是环境因素中的一个重要方面。目的:观察大鼠孕鼠暴露在不同剂量吗替麦考酚酯环境中的胚胎耳郭发育指标,以期建立一种药物诱导的小耳... 详细信息

背景:先天性小耳畸形发病机制尚不明确,目前研究认为小耳畸形与环境及遗传因素共同作用有关,药物致畸是环境因素中的一个重要方面。目的:观察大鼠孕鼠暴露在不同剂量吗替麦考酚酯环境中的胚胎耳郭发育指标,以期建立一种药物诱导的小耳畸形模型,为进一步探讨小耳畸形的发病机制提供基础。方法:将成年SD大鼠按雌雄比2∶1合笼,次日检查雌鼠,发现阴栓定为孕0 d。将32只SD大鼠孕鼠随机分为4组,分别记为对照组、吗替麦考酚酯50,100,200 mg/kg组,每组8只。孕9,10 d每天早上8点分别用50,100,200 mg/kg吗替麦考酚酯玉米油灌胃1次,对照组仅灌胃玉米油,于孕20.5 d麻醉后脱颈处死各组孕鼠,大体观察各组胚胎发育情况及耳郭发育指标,micro-CT影像学观察中耳及内耳发育情况,组织学检测耳郭软骨及软组织改变。结果与结论:(1)与对照组相比,各吗替麦考酚酯组死胎数、吸收胎数增加,活胎数及活胎率降低;耳横长、耳纵长、耳纵长/耳横长、鼻枕距/双顶径、眼距、体长、体质量等指标存在明显统计学差异(PⅡ型胶原免疫组化结果示吗替麦考酚酯影响软骨细胞增生、分化以及Ⅱ型胶原表达。(4)结果表明,吗替麦考酚酯可导致大鼠胚胎耳郭组织发育不良且呈剂量依赖性,可能是因为其阻止了软骨细胞增生、分化及Ⅱ型胶原表达,吗替麦考酚酯可诱导建立小耳畸形动物模型。

关键词：吗替麦考酚酯大鼠耳畸形耳郭发育软骨细胞 Ⅱ型胶原

不同浓度GelMA水凝胶支架对大鼠髓核干细胞及细胞外基质相关蛋白的影响

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中华解剖与临床杂志 2023年第9期28卷 611-618页

作者：高许斌李伟峰刘奋斗朱军刘柯官建中蚌埠医学院第一附属医院骨科蚌埠233004

目的探讨不同浓度的甲基丙烯酸酯(GelMA)水凝胶支架的性能,以及对大鼠髓核干细胞(NPSCs)体外增殖、分化及细胞外基质相关蛋白表达的影响。方法(1)配置浓度为5%、10%、15%GelMA水凝胶溶液,经紫外光照射固化、冷冻干燥、喷金处理,制备相... 详细信息

目的探讨不同浓度的甲基丙烯酸酯(GelMA)水凝胶支架的性能,以及对大鼠髓核干细胞(NPSCs)体外增殖、分化及细胞外基质相关蛋白表达的影响。方法(1)配置浓度为5%、10%、15%GelMA水凝胶溶液,经紫外光照射固化、冷冻干燥、喷金处理,制备相应浓度的GelMA水凝胶支架。用扫描电镜观察支架并测量孔径,使用科学表面分析仪测量支架静态水接触角,使用机械测试仪测量支架压缩模量,使用精密天平测量在37℃恒温箱中放置0、2、4、6、8、10、12 h时支架的含水量。(2)取6周龄雄性清洁级SD大鼠8只,体质量为80~100 g,切开椎间盘取髓核组织,分离培养NPSCs。取第3代NPSCs分别进行成骨、成软骨及成脂分化培养,分别用茜素红、阿利新蓝及油红O对三系细胞进行染色,观察NPSCs的三系分化潜能。(3)取第3代NPSCs分为无支架的对照组和5%、10%、15%GelMA水凝胶支架组,对照组加入培养基培养3 d,不同浓度GelMA水凝胶支架组紫外光照射固化后接种NPSCs,加入培养基培养7 d。各组细胞采用免疫荧光染色,观察细胞形态的变化。(4)取第3代NPSCs分别接种于紫外光照射固化后的5%、10%、15%GelMA凝胶支架中,采用细胞计数(CCK)-8试剂盒检测细胞增殖能力,采用活细胞/死细胞双染试剂盒检测细胞活力,采用免疫荧光染色检测Agg和ColⅡ蛋白的表达情况。结果(1)5%、10%、15%GelMA水凝胶支架的孔径分别为(94.00±1.00)、(77.33±5.69)、(52.33±2.31)μm,水接触角分别为28.00°±2.65°、39.00°±2.65°、46.00°±1.00°,压缩模量分别为(45.77±8.66)、(64.63±3.06)、(86.07±10.73)kPa。不同浓度GelMA水凝胶支架随浓度的增高,支架的孔径减小,水接触角、压缩模量增大,差异均有统计学意义(F=102.40、49.40、21.51,P值均<0.05)。不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量均随时间的增加而下降;而同一时间不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量随浓度的增高而减少,3者间含水量比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(2)NPSCs三系分化结果显示,培养的NPSCs成功分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞,有多向分化的潜能,具备干细胞的特性。(3)水凝胶支架上NPSCs随着GelMA浓度的增加,细胞形态由正常的梭形逐渐变椭圆,细胞突伸展逐渐减弱,细胞质和细胞核比例逐渐减小,细胞聚集的集落逐渐变小。(4)NPSCs增殖实验显示:培养第1天时,不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs的光密度(OD)值差异无统计学意义(F=1.63,P=0.272);培养第4、7天时,随GelMA水凝胶支架浓度的增高,NPSCs的OD值均呈下降趋势,差异均有统计学意义(F=61.48、203.20,P值均<0.001)。NPSCs活力实验显示:培养第4天时,不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs活细胞占比差异无统计学意义(F=0.15,P=0.860);培养第7天时,随GelMA水凝胶支架浓度的增高,NPSCs活细胞占比呈下降趋势,差异有统计学意义(F=68.83,P<0.001)。(5)5%、10%、15%GelMA水凝胶支架中Agg蛋白的免疫荧光值分别为16.79±1.29、13.35±0.70、10.475±0.54,ColⅡ蛋白的免疫荧光值分别为17.17±1.49、13.32±1.65、9.53±1.01。随着GelMA水凝胶浓度的增高,Agg、ColⅡ蛋白的表达均呈下降趋势,差异均有统计学意义(F=22.10、36.64,P值均<0.001)。结论5%GelMA水凝胶支架具有较好的物理特性,适合NPSCs的生长、存活,能较好地促进细胞外基质相关蛋白的表达。

关键词：骨髓祖代细胞细胞增殖细胞分化聚蛋白聚糖 Ⅱ型胶原

依托咪酯对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤的影响

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中国临床药理学杂志 2023年第18期39卷 2654-2658页

作者：刘君凤赵煜黄贵祥路翔宇王宇邓敏四川省医学科学院·四川省人民医院(电子科技大学附属医院)麻醉手术中心四川成都610000 四川省医学科学院·四川省人民医院(电子科技大学附属医院)急诊科四川成都610000 四川省医学科学院·四川省人民医院(电子科技大学附属医院)肝胆外科四川成都610000 四川省医学科学院·四川省人民医院(电子科技大学附属医院)灾难医学与急诊医学研究所四川成都610000

目的探讨依托咪酯对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响。方法将人CHON-001软骨细胞分为空白组(常规培养基培养)、模型组(用10 ng·mL^(-1) IL-1β培养)、高剂量实验组(用5μmol·L^(-1)依托咪酯+10 ng·mL^(-1) IL-1β培养... 详细信息

目的探讨依托咪酯对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响。方法将人CHON-001软骨细胞分为空白组(常规培养基培养)、模型组(用10 ng·mL^(-1) IL-1β培养)、高剂量实验组(用5μmol·L^(-1)依托咪酯+10 ng·mL^(-1) IL-1β培养)、抑制药组[用5μmol·L^(-1)无翅型MMTV整合位点家族成员3a(Wnt3a)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制药IWR-1-endo+10 ng·mL^(-1) IL-1β培养]、抑制药+高剂量实验组(用10 ng·mL^(-1) IL-1β+5μmol·L^(-1)依托咪酯+5μmol·L^(-1) IWR-1-endo培养)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖情况,用膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)染色法检测细胞凋亡情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中促炎因子的含量;用蛋白质印迹法测定基质金属蛋白酶(MMP)-13、Ⅱ型胶原(COL2A1)、聚集蛋白聚糖(ACAN)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)的蛋白表达水平。结果空白组、模型组、高剂量实验组、抑制药组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100.20±5.40)%、(51.33±3.62)%、(77.28±4.87)%、(80.10±5.21)%和(88.42±6.37)%,细胞凋亡率分别为(3.21±1.14)%、(28.09±4.51)%、(15.60±3.85)%、(13.76±2.31)%和(8.09±0.98)%,TNF-α水平分别为(58.80±4.73)、(143.23±11.39)、(96.71±10.50)、(89.27±7.86)和(71.42±5.43)pg·mL^(-1),IL-6水平分别为(99.70±6.51)、(202.55±14.88)、(131.33±12.40)、(123.42±9.31)和(102.07±6.78)pg·mL^(-1),MMP-13蛋白表达水平分别为0.26±0.03、0.88±0.05、0.51±0.02、0.43±0.05和0.22±0.03,COL2A1蛋白表达水平分别为0.90±0.04、0.17±0.03、0.54±0.06、0.67±0.03和0.81±0.08,ACAN蛋白表达水平分别为0.85±0.06、0.15±0.02、0.42±0.05、0.58±0.04和0.83±0.06;DKK-1蛋白表达水平分别为0.89±0.05、0.16±0.02、0.39±0.05、0.49±0.03和0.71±0.05。模型组上述指标与空白组比较,高剂量实验组上述指标与模型组比较,抑制药+高剂量实验组上述指标与高剂量实验组、抑制药组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论依托咪酯可能通过Wnt3a/β-catenin通路对IL-1β损伤的人CHON-001软骨细胞发挥保护作用。

关键词：依托咪酯白细胞介素-1β 软骨细胞 Ⅱ型胶原无翅型MMTV整合位点家族成员3a/β-连环蛋白通路

转化生长因子β3诱导外周血源性间充质干细胞成软骨分化的量效关系

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中国组织工程研究 2022年第1期26卷 45-51页

作者：杨腾云李彦林刘德健王国梁郑竹君昆明医科大学第一附属医院运动医学科云南省昆明市650032 昆明医科大学第一附属医院康复科云南省昆明市650032

背景:随着软骨组织工程技术的发展,国内外已有应用外周血源性间充质干细胞修复软骨缺损的体外培养及动物实验,并取得了不错的进展,转化生长因子β3常被用于细胞体外培养以诱导间充质干细胞成软骨分化。但在实验应用中,很少涉及转化生长... 详细信息

背景:随着软骨组织工程技术的发展,国内外已有应用外周血源性间充质干细胞修复软骨缺损的体外培养及动物实验,并取得了不错的进展,转化生长因子β3常被用于细胞体外培养以诱导间充质干细胞成软骨分化。但在实验应用中,很少涉及转化生长因子β3量效探讨,涉及量效的细胞培养实验又经常误用单因素方差分析或t检验来分析这类资料。目的:采用重复测量方法分析转化生长因子β3诱导外周血源性间充质干细胞成软骨分化的量效关系,以期获得较佳的转化生长因子β3用量,获得较好的成软骨分化效果。方法:动员、提取、培养滇南小耳猪外周血源性间充质干细胞,分别加入含不同质量浓度转化生长因子β3(25-500μg/L)的成软骨诱导液进行成软骨诱导分化,对照组不作诱导处理,培养第2,4,6,8,10,12,14天,CCK-8法检测各组细胞增殖情况;培养第3,7,14,21天,收集各组细胞培养上清,ELISA法检测Ⅱ型胶原水平;培养第21天,进行甲苯胺蓝染色观察聚集蛋白聚糖表达;培养第21天,进行免疫细胞化学染色观察Ⅱ型胶原表达。结果与结论:在25-500μg/L范围内,转化生长因子β3质量浓度在40μg/L时外周血源性间充质干细胞生长增殖能力最强,转化生长因子β3质量浓度在40,80μg/L时更容易促进外周血源性间充质干细胞成软骨分化。

关键词：干细胞外周血源性间充质干细胞细胞因子转化生长因子β3 重复测量软骨组织工程 Ⅱ型胶原聚集蛋白聚糖软骨修复

补骨脂素联合转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

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中国组织工程研究 2022年第30期26卷 4884-4888页

作者：高子茏李婷吕政沈骅睿成都中医药大学临床医学院四川省成都市610075 西南医科大学药学院四川省泸州市646000 西南医科大学附属中医医院四川省泸州市646000

背景:软骨细胞受损后再生能力较差,以干细胞为基础的治疗方案已成为关节软骨修复的新型治疗方法。目的:观察补骨脂素联合转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。方法:全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细... 详细信息

背景:软骨细胞受损后再生能力较差,以干细胞为基础的治疗方案已成为关节软骨修复的新型治疗方法。目的:观察补骨脂素联合转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。方法:全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,CCK-8实验筛选出补骨脂素促进骨髓间充质干细胞增殖的有效浓度;将第3代骨髓间充质干细胞分为正常对照组(含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL双抗的低糖DMEM培养液)、补骨脂素组(在正常对照组基础上添加10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、补骨脂素联合转化生长因子β1组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、阳性对照组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C)。诱导21 d后,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色鉴定Ⅱ型胶原表达;RT-PCR和Western blot分别检测软骨分化标记基因Ⅱ型胶原、SOX-9的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①免疫细胞化学染色显示,正常对照组未见阳性细胞,其余3组均可见Ⅱ型胶原阳性细胞;②与正常对照组比较,补骨脂素组、联合组及阳性对照组SOX-9、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),其中联合组效果最佳(P<0.01),且明显优于阳性对照组及补骨脂素组(P<0.05);③结果表明,在一定的浓度范围内,补骨脂素可以促进骨髓间充质干细胞增殖;补骨脂素可以诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,其与转化生长因子β1联合使用具有协同促进作用。

关键词：补骨脂素骨髓间充质干细胞软骨细胞成软骨分化转化生长因子β Ⅱ型胶原 SOX-9蛋白诱导分化

长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

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中华解剖与临床杂志 2023年第4期28卷 269-274页

作者：孙中仪田纪伟南京江北医院骨科南京210048

目的探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46(38.3±4.3)岁,PfirrmannⅠ... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46(38.3±4.3)岁,PfirrmannⅠ级6例、Ⅱ级12例。取椎间盘标本常规分离、培养髓核细胞,使用10 ng/mL IL-1β处理髓核细胞获得退变髓核细胞。将退变髓核细胞分为沉默对照组、KLHL7-DT沉默组、过表达对照组、KLHL7-DT过表达组。4组细胞分别对应转染沉默对照序列、siRNA-KLHL7-DT沉默序列、过表达对照序列、KLHL7-DT过表达序列。取转染后4组退变髓核细胞采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)蛋白的表达情况。结果(1)KLHL7-DT过表达组EdU染色阳性细胞/DAPI染色阳性比值(0.147±0.002)低于过表达对照组(0.203±0.007),而KLHL7-DT沉默组比值(0.428±0.050)高于沉默对照组(0.240±0.032),差异均有统计学意义(t=14.25、-5.44,P值均<0.05)。(2)KLHL7-DT过表达组细胞凋亡率(19.01%±0.41%)高于过表达对照组(14.38%±0.31%),KLHL7-DT沉默组细胞凋亡率(16.08%±0.59%)低于沉默对照组(17.42%±0.36%),差异均有统计学意义(t=15.69、3.36,P值均<0.05)。(3)Western blot结果显示,KLHL7-DT过表达组细胞Aggrecan和ColⅡ蛋白的相对表达量(分别为0.34±0.29、0.57±0.11)均低于过表达对照组(1.00±0.22、1.05±0.10),KLHL7-DT沉默组Aggrecan和ColⅡ蛋白的相对表达量(分别为1.77±0.14、1.63±0.12)均高于沉默对照组(1.10±0.18、0.98±0.08),差异均有统计学意义(t=3.10、5.54、-5.05、-7.66,P值均<0.05)。结论上调KLHL7-DT的表达可抑制退变髓核细胞的增殖,促进退变髓核细胞的凋亡,其机制可能是通过调节细胞外基质Aggrecan、ColⅡ蛋白的合成,进而参与椎间盘退变的发展。

关键词：椎间盘退行性变髓核细胞长链非编码RNA 细胞增殖细胞凋亡聚集蛋白聚糖 Ⅱ型胶原

淫羊藿苷含药血清促进3种细胞共培养体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化

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中国组织工程研究 2024年

作者：刘琪李林臻李玉生焦泓焯杨程张君涛国家中医针灸临床医学研究中心天津中医药大学第一附属医院

背景：关节软骨损伤修复能力十分有限，组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案，其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的：构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-... 详细信息

背景：关节软骨损伤修复能力十分有限，组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案，其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的：构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系用以模拟软骨细胞体内微环境，并探究其最佳细胞接种比例，同时观察淫羊藿苷含药血清对该体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化的影响。方法：提取、培养、鉴定大鼠膝关节软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞，按不同细胞接种比例构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞非接触共培养体系，共培养72 h后观察软骨细胞增殖活性和表型能力，选择综合效应最佳的共培养体系；用淫羊藿苷溶液(0.25 mg/mL)灌胃新西兰大白兔制备淫羊藿苷含药血清，对照组共培养体系用含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的高糖DMEM培养液培养，实验组共培养体系在此基础之上加入体积分数为10%淫羊藿苷含药血清进行干预，24,48 h后检测两组软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达，14 d后采用免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化情况。结果与结论：(1)3种细胞以不同比例共培养时均可正常贴壁生长，当软骨细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞接种比例为2∶1∶1时，共培养体系中软骨细胞表现出最佳增殖活性和表型能力；(2)与对照组相比，实验组培养24 h后软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达显著升高(P Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性，实验组荧光强度明显高于对照组(P <0.01);(3)结果表明，以非接触共培养方法可以成功建立软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系且细胞比例为2∶1∶1时软骨细胞增殖活性和表型能力最佳；同时淫羊藿苷含药血清具有促进该体系中软骨细胞增殖及骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化的作用。

关键词：淫羊藿苷含药血清软骨细胞骨髓间充质干细胞滑膜间充质干细胞共培养细胞增殖 Ⅱ型胶原成软骨分化

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3种小分子拮抗剂对骨关节炎软骨细胞的作用

中国现代医学杂志 2022年第15期32卷 47-52页

作者：王坤王旭施政良宁梓文何任杰董开颜李彦林昆明医科大学第一附属医院运动医学科云南昆明650031

目的探讨3种小分子拮抗剂(TN14003、T140、AMD3100)阻断SDF-1/CXCR4信号通路对骨关节炎(OA)软骨细胞表达的影响,为寻找一种高效的OA治疗药物奠定实验基础。方法OA软骨细胞随机分成4组,A组、B组、C组分别加入TN14003、T140及AMD3100,D组... 详细信息

目的探讨3种小分子拮抗剂(TN14003、T140、AMD3100)阻断SDF-1/CXCR4信号通路对骨关节炎(OA)软骨细胞表达的影响,为寻找一种高效的OA治疗药物奠定实验基础。方法OA软骨细胞随机分成4组,A组、B组、C组分别加入TN14003、T140及AMD3100,D组为对照组。第2天、第4天时,qRT-PCR检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原(ColⅡ)mRNA相对表达量,Western blotting检测各组软骨细胞ColⅡ蛋白相对表达量。第10天时,免疫组织化学染色观察各组软骨细胞ColⅡ表达。结果培养第2天、第4天时,4组软骨细胞ColⅡmRNA和蛋白相对表达量比较:①不同时间点软骨细胞ColⅡmRNA和蛋白相对表达量有差异(P<0.05);②4组软骨细胞ColⅡmRNA和蛋白相对表达量有差异(P<0.05);③4组软骨细胞ColⅡmRNA和蛋白相对表达量变化趋势有差异(P<0.05)。进一步行两两比较,结果提示第2天、第4天时A组软骨细胞ColⅡmRNA和蛋白相对表达量均高于其他3组(P<0.05)。第10天时,免疫组织化学染色发现A组软骨细胞ColⅡ染色最深,B组、C组、D组依次变浅。结论TN14003较T140、AMD3100能明显缓解OA软骨关节退变,有望成为一种高效的抗OA治疗药物。

关键词：骨关节炎 Ⅱ型胶原软骨细胞拮抗剂