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ⅰ类整合子与大肠埃希菌多重耐药性研究

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 538-539页

作者：陈婉花伍严安胡辛兰吴长生李宁福建省泉州市第一医院检验科 362000 福建省立医院检验科

大肠埃希菌是引起人类感染最常见的肠杆菌科细菌。细菌耐药性通常由获得耐药基因引起，在抗生素选择性压力下，耐药基因的水平传播使耐药菌株广泛流行，成为一个日益严重的问题。整合子是含有位点特异重组系统和基因盒的遗传结构。整合... 详细信息

大肠埃希菌是引起人类感染最常见的肠杆菌科细菌。细菌耐药性通常由获得耐药基因引起，在抗生素选择性压力下，耐药基因的水平传播使耐药菌株广泛流行，成为一个日益严重的问题。整合子是含有位点特异重组系统和基因盒的遗传结构。整合子根据整合酶的不同而分类，其中ⅰ类整合子最常见，本研究分析大肠埃希菌中ⅰ类整合子的流行情况和分子特性。

关键词： ⅰ类整合子大肠埃希菌多重耐药性肠杆菌科细菌耐药基因细菌耐药性选择性压力人类感染

ⅰ类整合子在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用研究

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中国实验诊断学 2011年第5期15卷 885-887页

作者：胡晓波郭海艳胡传玺瞿跃红李漫王瑛张建军上海交通大学医学院附属第三人民医院检验科上海201900 上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200011

目的了解我院多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株中ⅰ类整合子的流行情况,建立一种快速简便的ⅰ类整合子聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法收集我院2008年9月至2010年9月临床分离的鲍曼不动杆菌63株,用MIC法检测耐药性,PCR技术检测Ⅰ类整合... 详细信息

目的了解我院多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株中ⅰ类整合子的流行情况,建立一种快速简便的ⅰ类整合子聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法收集我院2008年9月至2010年9月临床分离的鲍曼不动杆菌63株,用MIC法检测耐药性,PCR技术检测ⅰ类整合子基因。结果 63株鲍曼不动杆菌中ⅰ类整合子基因阳性率56%(35株)。ⅰ类整合子阳性和阴性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药性存在明显差异。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中ⅰ类整合子携带率高,携带的耐药基因为aaeA4、catB8和aadA1。PCR技术可以方便快速地检出ⅰ类整合子。

关键词：鲍曼不动杆菌 ⅰ类整合子

ⅰ类整合子介导的致病性嗜水气单胞菌的耐药性分析及R质粒的初步研究

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Ⅰ类整合子介导的致病性嗜水气单胞菌的耐药性分析及R质粒的初步...

作者：孙浩江西农业大学

学位级别：硕士

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)已成为人-畜-鱼共患病的一类重要病原菌。研究表明,该菌的耐药性已呈现快速增长趋势,而在细菌耐药性的散播中,整合子起着重要作用,这就给嗜水气单胞菌病的防治造成了很大困难。近年来,中草药和天... 详细信息

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)已成为人-畜-鱼共患病的一类重要病原菌。研究表明,该菌的耐药性已呈现快速增长趋势,而在细菌耐药性的散播中,整合子起着重要作用,这就给嗜水气单胞菌病的防治造成了很大困难。近年来,中草药和天然植物因能恢复细菌对抗生素的敏感性而逐渐成为研究的焦点。基于以上几点,本试验将针对嗜水气单胞菌的快速检测和耐药性方面进行相关研究,具体如下:1、嗜水气单胞菌气溶素和I类整合子多重PCR检测方法的建立及应用针对嗜水气单胞菌的16SrRNA、气溶素毒力因子和I类整合酶基因,本试验建立了一个三重PCR快速检测方法。通过对中华鳖、黄鳝、大鲵、鲫鱼和棘胸蛙五种来源的疑似病原菌进行检测,共分离出27株嗜水气单胞菌,其中气溶素阳性菌占70.37%(19/27),I类整合子阳性菌占44.44%(12/27)。药敏试验结果表明各分离菌均呈现出严重的多重耐药性,除8种药物的耐药率均为100%外,其余12种药物的耐药率情况相同,均为I类整合子阳性菌株的耐药率高于阴性菌株,说明整合子的存在可能导致了细菌耐药性的增加。2、I类整合子的定位本试验采用PCR扩增法和斑点杂交法,同时对12株阳性菌株进行I类整合子的定位。通过对比,发现两种检测方法的结果完全相同,即其中10株菌在染色体和质粒上均含有I类整合子,而剩余的2株菌仅在染色体上含有I类整合子。3、耐药基因的定位本试验采用大蒜芦荟汁对AH1菌株(含有大、中、小三种质粒)进行质粒消除,消除率达到90%。综合质粒转化和消除实验,发现AH1耐头孢曲松、阿米卡星、头孢哌酮、呋喃唑酮、链霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、利福平的基因位于小质粒上,耐庆大霉素、复方新诺明、强力霉素、妥布霉素、氨苄西林、阿莫西林、磺胺甲噁唑、四环素的基因位于大质粒上,耐头孢唑林、青霉素G、红霉素的基因位于染色体上。

关键词：嗜水气单胞菌三重PCR ⅰ类整合子质粒消除药敏试验

ⅰ类整合子在多重耐药大肠埃希菌中的作用探讨

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Ⅰ类整合子在多重耐药大肠埃希菌中的作用探讨

作者：吴志鹃泸州医学院

学位级别：硕士

目的：了解本地区多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli)中ⅰ类整合子的流行分布情况,并分析ⅰ类整合子与多重耐药之间可能存在的关系,探讨十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, SDS)对ⅰ类整合子的作用影响。方法：1.纸片扩散法(Ker... 详细信息

目的：了解本地区多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli)中ⅰ类整合子的流行分布情况,并分析ⅰ类整合子与多重耐药之间可能存在的关系,探讨十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, SDS)对ⅰ类整合子的作用影响。方法：1.纸片扩散法(Kerby-Bauer法,K-B法)：采用NCCLS推荐的该方法测定71株大肠埃希菌对三类4种常用抗菌药物——庆大霉素(G)、左氧氟沙星(L)、头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)的耐药性。大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控。***技术：采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒提取大肠埃希菌DNA,并用PCR方法检测ⅰ类整合子3个不同部位的基因。根据整合酶1(IntI1)基因、可变区两侧5’端和3’端保守序列及3’保守端qacE△1-sul1基因(ⅰ类整合子遗传标记)序列设计三对引物,以提取的大肠埃希菌DNA为PCR反应模板进行基因检测。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果及送检做基因测序。***处理后PCR法测定ⅰ类整合子基因：以高温(41℃)、高浓度(60μg/ml)SDS对挑选出的ⅰ类整合子阳性的多重耐药大肠埃希菌进行处理,并用PCR法对处理后的大肠埃希菌行ⅰ类整合子基因检测,与处理前结果进行比较。***处理前后细菌最低抑菌浓度(MIC)测定:SDS处理方法同前,将处理前与处理后的大肠埃希菌分别置于含不同浓度的抗生素培养基内生长,得到其MIC值,从而分析SDS对细菌耐药性的影响。结果：1.71株大肠埃希菌的耐药情况：(1)对各种常用抗生素的耐药分布：66.20%耐庆大霉素(47株)、63.38%耐左氧氟沙星(45株)、59.15%耐头孢噻肟(42株)、18.31%耐头孢他定(13株);(2)其耐药模式分布：以多重耐药菌株(23株,32.39%)和双耐菌株(25株,35.21%)为主,其次是单耐菌株(16株,22.54%),全敏感菌株(7株,9.86%)最少。其中多耐模式的表型以G+L+CTX(14株,19.72%)为主。***法检测大肠埃希菌中ⅰ类整合子的存在情况：(1)71株大肠埃希菌中ⅰ类整合子的总检出率为88.73%。各耐药模式菌株的ⅰ类整合子的检出率有差异(P整合酶基因74.65%、整合子遗传标记基因78.87%、整合子可变区基因21.13%。3.ⅰ类整合子与耐药的相关分析：(1)与4种抗生素耐药的关系：整合子阳性株与阴性株对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟耐药与敏感的分布情况有明显的差异(Pⅰ类整合子基因的阳性率最高(均为100.00%),其次为单耐菌株(13株,81.25%),全敏菌株的基因阳性率最低(2株,28.57%),且其差异有统计学差异(Pⅰ类整合子基因阳性率有不同程度的降低(100.00%降为30.43%),有统计学差异;(2)SDS处理前后,多重耐药大肠埃希菌的对庆大霉素、头孢噻肟的MIC值均有明显差异(Pⅰ类整合子的阳性率高,是多重耐药的重要原因之一;2.多重耐药大肠埃希菌整合酶基因、遗传标记基因的检出率高于可变区基因;***对多重耐药大肠埃希菌的ⅰ类整合子基因阳性率与MIC值均有不同程度的影响。

关键词：大肠埃希菌多重耐药 ⅰ类整合子十二烷基硫酸钠

水产品中6类抗生素抗性基因和ⅰ类整合子的定量检测

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现代食品科技 2017年第5期33卷 270-276页

作者：王慧平闫鹤赵俊仁石磊华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640 广东石油化工学院环境与生物工程学院广东茂名525000 暨南大学食品学院广东广州510632

论文选取广州市天河区两家菜市场、一家海鲜市场和三家超市的48份水产品为研究对象,提取了三种不同水产品:虾、鱼和贝类的总DNA,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法,对市售水产品中6类抗生素抗性基因(Antibiotic Resist... 详细信息

论文选取广州市天河区两家菜市场、一家海鲜市场和三家超市的48份水产品为研究对象,提取了三种不同水产品:虾、鱼和贝类的总DNA,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法,对市售水产品中6类抗生素抗性基因(Antibiotic Resistance Genes,ARGs):tet A、tet B、tet M、sulⅡ、flo R、aph A-1、aad A、erm B、cml A和ⅰ类整合子5’端整合酶基因int I1、3’端磺胺耐药基因sulⅠ、季铵盐化合物及溴化乙锭的耐药基因qac EΔ1进行定量。研究显示:6类ARGs及ⅰ类整合子基因在水产品中均有检出,基因拷贝数大小从10~2~10~8跨越七个数量级,最小值为1.86×10~2 copies/g,最大值为8.98×10~8 copies/g。三种水产品虾、鱼、贝类中,虾类的ARGs含量最高,贝类最低;三类采样地点中,菜市场来源的水产品中ARGs含量最高,海鲜市场来源的次之,超市来源的最低。本研究为进一步探索ARGs和可移动耐药元件整合子介导的细菌耐药性传播而引起的食源性疾病机理奠定了基础。

关键词：水产品微生物抗生素抗性基因 ⅰ类整合子实时荧光定量PCR 丰度传播

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动物源肠球菌的耐药表型及ⅰ类整合子的检测

农业生物技术学报 2010年第2期18卷 329-336页

作者：齐亚银张莉王静梅魏鲁予剡根强石河子大学动物科技学院

采用肉汤稀释法、药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)和VITEK-AMS全自动药敏实验法相结合的手段检测不同动物源性140株肠球菌分离株的耐药表型(判定标准CLSI2007);同时采用ⅰ类整合子整合酶基因PCR方法,检测ⅰ类整合子的携带率,并对代表株的整... 详细信息

采用肉汤稀释法、药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)和VITEK-AMS全自动药敏实验法相结合的手段检测不同动物源性140株肠球菌分离株的耐药表型(判定标准CLSI2007);同时采用ⅰ类整合子整合酶基因PCR方法,检测ⅰ类整合子的携带率,并对代表株的整合酶基因进行克隆测序。在140株肠球菌中,Ⅰ类整合酶基因阳性菌株73株,总阳性率为52.14%。在肠球菌中,ⅰ类整合子阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率均明显高于阴性菌株。猪、鸡、牛和羊源性肠球菌ⅰ类整合子的携带率分别为59.52%、52.63%、46.67%和46.67%;临床分离株对阿莫西林、氨苄西林、头孢唑啉、环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素、呋喃坦啶、青霉素、利福平、四环素、万古霉素的耐药率分别为62.14%、60.00%、50.71%、77.86%、17.14%、69.29%、76.43%、20.00%、68.57%、80.71%、51.43%、0.00。研究结果提示畜牧业生产中应加强肠球菌耐药性的监测,以阻断耐药菌株在不同动物和人之间的散播,且ⅰ类整合子在传播动物源性肠球菌耐药性中的作用不可忽视。

关键词：肠球菌耐药表型 ⅰ类整合子

肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌ⅰ类整合子与磺胺类耐药基因(sul1、sul2和sul3)的检测

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食品科学 2014年第24期35卷 178-183页

作者：赖海梅刘书亮邹立扣韩新锋周康朱冬梅彭珍李建龙四川农业大学食品学院四川雅安625014 四川省农产品加工及贮藏工程重点实验室四川雅安625014 四川农业大学都江堰校区微生物学实验室四川都江堰611830

目的:了解肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌ⅰ类整合子及磺胺类耐药基因携带情况。方法:采用纸片扩散法对肉鸡屠宰场84株沙门氏菌分离株进行10种抗生素敏感性实验;应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测多重耐药沙门氏... 详细信息

目的:了解肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌ⅰ类整合子及磺胺类耐药基因携带情况。方法:采用纸片扩散法对肉鸡屠宰场84株沙门氏菌分离株进行10种抗生素敏感性实验;应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测多重耐药沙门氏菌sul1、sul2、sul3和int1基因。结果:84株沙门氏菌对氨苄西林和萘啶酸耐药率高达100%,对环丙沙星、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、大观霉素、氟苯尼考、庆大霉素耐药率分别为39.29%、35.71%、35.71%、35.71%、22.62%、14.29%。38株沙门氏菌对3种及以上抗生素耐药,属于多重耐药菌株。38株多重耐药菌株中,有20株携带ⅰ类整合子。30株对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药的菌株中,均能检测到sul1或sul2或sul3基因,与表型耐药100%符合,其检出率分别为40%、100%、63.3%。结论:肉鸡屠宰场中沙门氏菌耐药现象已不容乐观,沙门氏菌多重耐药性与ⅰ类整合子的携带之间关系密切,且ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到重要作用。

关键词：沙门氏菌 ⅰ类整合子多重耐药性磺胺类耐药基因

耐复方新诺明香港海鸥型菌中ⅰ类整合子、磺胺类耐药基因(sul1、sul2)的检测

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中国人兽共患病学报 2012年第3期28卷 223-225页

作者：陈冰冯嘉丽李美霞朱江峰魏耀红张欧康燕俞守义陈清胡静南方医科大学公共卫生与热带医学学院广州510515 广州市疾病预防控制中心广州510030

目的了解香港海鸥型菌淡水鱼与蛙来源分离株磺胺类耐药性以及ⅰ类整合子介导耐药的情况。方法采用K-B纸片扩散法检测香港海鸥菌耐复方新诺明药物菌株,PCR方法扩增耐药菌株sul1、sul2和ⅰ类整合子基因。结果 128株香港海鸥菌中共有20株... 详细信息

目的了解香港海鸥型菌淡水鱼与蛙来源分离株磺胺类耐药性以及ⅰ类整合子介导耐药的情况。方法采用K-B纸片扩散法检测香港海鸥菌耐复方新诺明药物菌株,PCR方法扩增耐药菌株sul1、sul2和ⅰ类整合子基因。结果 128株香港海鸥菌中共有20株耐复方新诺明药物,耐药率15.6%;20株耐药菌株中sul1阳性率90%,sul2阳性率50%,ⅰ类整合子携带率80%。结论淡水鱼与蛙来源香港海鸥型菌菌耐磺胺的机制可能与ⅰ类整合子、sul1、sul2基因有关。

关键词：香港海鸥型菌 ⅰ类整合子磺胺类耐药基因

屠宰生猪多重耐药沙门菌I类整合子与耐药基因的检测

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中国人兽共患病学报 2008年第4期24卷 327-330页

作者：李郁焦新安魏建忠王桂军张玮王非安徽农业大学动物科技学院合肥230036 扬州大学生命科学与技术学院

目的了解屠宰生猪沙门菌分离株多重耐药与I类整合子及耐药基因的携带关系。方法采用K-B纸片法对屠宰生猪78株沙门菌分离菌株进行22种抗生素敏感试验;应用PCR技术对沙门菌分离菌株进行I类整合子及耐药基因检测。结果78株沙门菌分离株中... 详细信息

目的了解屠宰生猪沙门菌分离株多重耐药与I类整合子及耐药基因的携带关系。方法采用K-B纸片法对屠宰生猪78株沙门菌分离菌株进行22种抗生素敏感试验;应用PCR技术对沙门菌分离菌株进行I类整合子及耐药基因检测。结果78株沙门菌分离株中有41株(52.56%)对2种以上抗生素耐药,属于多重耐药株,强力霉素-四环素-卡那霉素-氯霉素是主要多重耐药谱;41株多重耐药菌中有19株(46.34%)携带I类整合子,tetB、aph(3)-IIa和Flor基因分别检出最高。结论沙门菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致。

关键词：屠宰生猪多重耐药沙门菌 ⅰ类整合子耐药基因