检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Ⅱ型鸭肝炎病毒变异株的鉴定

中国兽医杂志 2006年第5期42卷 15-16页

作者：郑献进张大丙曲丰发丁春宇中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100094

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种高度致死性传染病,其特点是发病急、病程短、传播快、死亡率高,死亡鸭多呈角弓反张,其肝脏常有特征性的出血性病变[1].鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus, DHV)是本病病原,目前归属于小RNA病毒科的未确定种[2],... 详细信息

鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种高度致死性传染病,其特点是发病急、病程短、传播快、死亡率高,死亡鸭多呈角弓反张,其肝脏常有特征性的出血性病变[1].鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus, DHV)是本病病原,目前归属于小RNA病毒科的未确定种[2],DHV分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,其中Ⅰ型呈世界范围分布,Ⅱ型仅限于英国,Ⅲ型则限于美国[3].DHV还存在一类毒株,与Ⅰ型仅有部分血清学相关性,Sandhu等(1992)称之为Ⅰ型的变异株,命名为Ⅰa型[4].

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒变异株鉴定鸭病毒性肝炎小RNA病毒 virus 世界范围传染病致死性死亡率

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达

中国畜牧兽医 2013年第10期40卷 33-37页

作者：李露程英杰李传峰陈宗艳孟春春何后军刘光清江西农业大学动物科技学院江西南昌330045 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用RT-PCR方法从ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌*** Rosetta(DE3),... 详细信息

采用RT-PCR方法从ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌*** Rosetta(DE3),经1mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测。结果显示,成功克隆了DHV-ⅠVP3基因,片段大小为711bp。序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1%～97.7%;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3%～72.6%;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3%～70.5%。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47ku;与抗ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 VP3基因原核表达序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达

动物医学进展 2012年第2期33卷 13-16页

作者：吕敏娜戚南山覃宗华廖申权余劲术袁建丰吴彩艳孙铭飞广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640 广州英赛特生物技术有限公司广东广州510663

通过RT-PCR方法克隆出GD株ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入*** BL... 详细信息

通过RT-PCR方法克隆出GD株ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入*** BL21(DE3),构建重组表达菌***21/pMAL-C2X-VP1,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明,DHV-1的结构蛋白VP1能在***21(DE3)中表达,获得可溶性重组蛋白,表达产物的分子质量约为69ku。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因重组表达

ⅰ型鸭肝炎病毒VFY株与NFY株基因全序列测定及分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Ⅰ型鸭肝炎病毒VFY株与NFY株基因全序列测定及分析

作者：陈挺婷福建农林大学

学位级别：硕士

Ⅰ型鸭病毒性肝炎是由Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒( duck hepatitis virus serotype I, DHV-I)引起的雏鸭的一种急性高度致死性传染病,主要侵害3周龄以内的雏鸭,特别是不足1周龄的雏鸭最易感染,死亡率可达90%以上,是危害养鸭业最为严重的传染... 详细信息

Ⅰ型鸭病毒性肝炎是由Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒( duck hepatitis virus serotype I, DHV-I)引起的雏鸭的一种急性高度致死性传染病,主要侵害3周龄以内的雏鸭,特别是不足1周龄的雏鸭最易感染,死亡率可达90%以上,是危害养鸭业最为严重的传染病之一。1945年在美国首次发现该病,我国于1963年在上海首次报道了该病的临床病例,并于1980年首次分离到病毒。至今,全国各养鸭地区均有不同程度的发生和流行。因此,对该病及病原进行研究具有重要的意义。本试验以实验室保存的I型鸭病毒性肝炎病毒福建地区分离毒株为研究材料,开展病毒全基因序列的克隆测序、序列分析、生物学特性预测等几个方面的研究。1.根据GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了8对特异性引物,以实验室分离鉴定并保存的两株福州地区分离的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒VFY株和NFY株的核酸为模板进行RT-PCR扩增,得到预期大小的目的片段,对其进行剪切和拼接,进而得到完整的病毒基因组序列。2.对DHV-I全基因序列开放阅读框(ORF)编码的多聚蛋白的功能性位点、二级结构进行了预测和分析。对功能性位点的预测结果表明,该多聚蛋白多肽链上有11个N-糖基化位点、26个蛋白激酶C磷酸化位点、38个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、32个N-酰基化位点、4个依赖cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点及2个酪氨酸激酶磷酸化位点。二级结构预测表明,该多聚蛋白多肽链含27.70%的α螺旋结构,23.39%的β折叠结构,48.91%的Loop或其他结构;含有两个跨膜区域,分别位于第1066-1083位和1556-1573位。3.对DHV-I基因测序结果分析表明:DHV-I VFY和NFY两株病毒基因的核苷酸序列与GDZJ株、03D株、A66株、JX株、C80株的相似性分别为97.6%/97.7%、96.9%/97.0%、95.4%/95.4%、95.3%/95.4%、95.4%/95.5%;氨基酸相似性分别为98.4%/98.4%、98.2%/98.2%、97.5% /97.5%、97.5%/97.5%、97.6%/97.6%。VFY和NFY两株病毒基因的核苷酸序列与氨基酸序列的相似性分别为99.5%和98.9%。基因进化树分析可知VFY和NFY株处于同一分支,亲缘关系最近;VFY株及NFY株与GDZJ株、03D株、C80株、A66株、JX株亲缘关系较近,处于同一小分支内。DHV-IVFY株和NFY株与国内的DHV-I各毒株基因的核苷酸和氨基酸的同源性都比较高,具有不同程度的亲缘关系。但与台湾和韩国等地近期分离到的DHV-I新型毒株处于不同的分支,核苷酸和氨基酸的同源性都较低。因此认为此两株病毒应归类于传统的DHV-I。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒基因序列克隆功能性位点二级结构预测

ⅰ型鸭肝炎病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在临床上的初步应用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Ⅰ型鸭肝炎病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在临床上的初步...

作者：胡成扬州大学

学位级别：硕士

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus, DHV)引起的一种急性、高度致死性的传染病,对养鸭业的发展影响极大。鸭肝炎病毒分为三个型,其中,ⅰ型鸭肝炎病毒属于小RNA病毒科,没有囊膜。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal... 详细信息

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus, DHV)引起的一种急性、高度致死性的传染病,对养鸭业的发展影响极大。鸭肝炎病毒分为三个型,其中,ⅰ型鸭肝炎病毒属于小RNA病毒科,没有囊膜。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是利用特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,具有操作简单、成本低廉、反应快速等优点,已在许多疾病的检测中得到应用。基于此,本实验采用LAMP技术建立了一种ⅰ型鸭肝炎病毒检测方法,并成功将其应用于鸭泄殖腔中鸭肝炎病毒的检测。为该病的诊断提供了重要的实验数据和理论依据。首先,参考GenBank中已发表的ⅰ型鸭肝炎病毒全部基因序列,利用BLAST和DNAstar等软件对生物信息学比对分析,得出一种能够编码RNA聚合酶的3D基因序列最为保守,因此将其选作本实验的靶序列。运用在线引物设计软件设计出多组LAMP引物。通过预实验成功筛选出一组可用于检测的引物组。其次,通过对反应体系(Mg2+浓度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、酶浓度、引物浓度)和反应条件(时间、温度)的逐一优化,建立并完善了ⅰ型鸭肝炎病毒LAMP检测方法。以PCR方法为对照,分析了LAMP法检测ⅰ型鸭肝炎病毒的灵敏度：LAMP法的最低检测限可达10fg,高于PCR法两个数量级,这有利于对低病毒含量的组织病料进行检测。同时,本实验以ⅰ型鸭肝炎病毒核酸作为阳性样品,其他常见鸭病原体(Ⅱ型鸭肝炎病毒、Ⅲ型鸭肝炎病毒、番鸭呼肠孤病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒)的核酸和DEPC水作为阴性样品进行检测。结果显示,阳性样品有白色沉淀产生,而阴性样品无变化,提示该方法特异性良好。LAMP扩增反应过程是在63℃水浴锅中恒温孵育45min,然后将其转入80℃水浴锅中终止反应5min,实验结果可通过肉眼观察反应管有无白色沉淀直接判定。最后,利用本实验建立的ⅰ型鸭肝炎病毒LAMP检测方法对160份临床样品进行检测,检出阳性率为27%,该鸭场带毒显现较为严重,为指导制定免疫程序、治疗用药提供依据,同时为下一步试剂盒的研制奠定重要基础。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒环介导等温扩增检测方法临床应用

ⅰ型鸭肝炎病毒SN株和弱毒疫苗株全基因组克隆及序列分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

广东农业科学 2011年第12期38卷 140-141,159页

作者：黄良宗刘鳗仪王淑敏司兴奎顾万军佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231 佛山市三水南山动物防疫站广东佛山528000

根据ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对鸭肝炎病毒SN株和弱毒疫苗株全基因分段扩增并克隆测序。比较分析SN株、弱毒疫苗株和参考毒株多聚蛋白基因和VP1基因核苷酸序列构建系统进化树。结果表明,所测定的... 详细信息

根据ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对鸭肝炎病毒SN株和弱毒疫苗株全基因分段扩增并克隆测序。比较分析SN株、弱毒疫苗株和参考毒株多聚蛋白基因和VP1基因核苷酸序列构建系统进化树。结果表明,所测定的2个毒株多聚蛋白基因核苷酸序列与DHV-Ⅰ型GFS99广东株相似性最高(99.5%)。DHV-ⅠVP1基因核苷酸序列系统进化树分为3个群:SN株在以韩国强毒株R85952为代表的强毒株群中,弱毒疫苗株在以A66为代表的弱毒株群中,另外一群是以SY1为代表的从浙江分离的强毒株。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 DHVSN株分子克隆序列分析

NO及NOS在ⅰ型鸭肝炎病毒致雏鸭肝损伤机制中的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2012年第4期32卷 513-516,524页

作者：谷长勤谢长清毕丁仁胡薛英张万坡程国富华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

人工感染4日龄雏鸭病毒性肝炎模型,探讨一氧化氮合酶(NOS)和NO在ⅰ型鸭肝炎病毒感染后的肝脏中的动态变化及与肝损伤的关系。120羽4日龄雏鸭随机分为试验组和对照组,试验组腿部肌注ⅰ型鸭肝炎病毒,对照组注射等量生理盐水。感染后动态... 详细信息

人工感染4日龄雏鸭病毒性肝炎模型,探讨一氧化氮合酶(NOS)和NO在ⅰ型鸭肝炎病毒感染后的肝脏中的动态变化及与肝损伤的关系。120羽4日龄雏鸭随机分为试验组和对照组,试验组腿部肌注ⅰ型鸭肝炎病毒,对照组注射等量生理盐水。感染后动态观察肝脏的病变、测定肝组织内NOS活性和NO的浓度以及肝组织内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的分布规律。结果显示,病毒感染后,雏鸭肝功能和肝脏结构都受到不同程度的损害;NO对肝脏的损伤在感染后3d内持续增强,从4d开始逐渐减弱;iNOS主要存在于雏鸭的巨噬细胞中,其含量在感染早期上升,后期逐渐下降;肝组织内NOS活性及NO的浓度变化与免疫组化显示结果一致。结果表明,鸭肝炎病毒感染的雏鸭肝脏的损伤程度与NOS、NO浓度变化一致,提示NO在鸭肝炎病毒导致的雏鸭肝损伤中起重要作用。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒肝损伤 NOS NO

抗ⅰ型鸭肝炎病毒RdRp蛋白噬菌体单链抗体库构建及单链抗体的淘选

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 334-338页

作者：王永娟李碧春沈明君洪伟鸣左伟勇扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300

为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RN... 详细信息

为构建抗1型鸭肝炎病毒(DHV-1)RdRp蛋白的单链抗体(scFv)库,并淘选特异性scFv,本研究采用RT-PCR方法从DHV-1基因组中扩增Rd Rp基因,将其克隆于pET-32a载体中进行重组RdRp蛋白原核表达。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,以提取的免疫鼠脾脏总RNA为模板,利用抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)简并引物,经RT-PCR扩增抗体的VL和VH编码序列,由Linker序列连接,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增完整的sc Fv基因(VL-Linker-VH)。将扩增的scFv基因克隆于pCANTAB5E载体中构建噬菌体scFv文库,利用纯化的重组RdRp蛋白开展4轮吸附-洗脱-富集以淘选抗RdRp的ScFv;最后对淘选到的阳性ScFv进行可溶性表达,以ELISA方法检测其免疫结合活性。结果显示,获得了7株具有良好抗原结合活性的ScFv。淘选到的DHV-1 RdRp特异的基因工程ScFv,为鸭病毒性肝炎防制新策略研究奠定了基础。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 RdRp 噬菌体抗体库单链抗体

抗ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 487-489页

作者：李晓军张婷婷孟凡依刘明李刚张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6... 详细信息

为制备抗ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的DHV-1免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,按常规方法制备MAb,通过间接ELISA方法进行筛选获得4株能稳定传代并分泌抗DHV-1的MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为AF8、BF5、BG6和DB6。Dot-ELISA、间接免疫荧光试验和中和试验等结果表明4株MAbs效价为1∶1 600～1∶3 200,与新型DHV无交叉反应。其中,BF5和BG6具有中和活性。抗DHV-1的MAb的制备为DHV-1的生物学特性研究及其快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体鉴定