检索结果-南通市图书馆

ⅰ型鸭肝炎病毒SYBR-Green实时荧光定量PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2014年第8期34卷 1248-1252页

作者：王文秀张倩曲光刚莫玲沈志强山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为建立一种快速、特异的ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据GenBank已登录的DHV-Ⅰ型疫苗株C80(DQ864514.3)的非编码区基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出230bp的靶序列,并克隆到pMD18-T载体上,构建重... 详细信息

为建立一种快速、特异的ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据GenBank已登录的DHV-Ⅰ型疫苗株C80(DQ864514.3)的非编码区基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出230bp的靶序列,并克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒;将纯化的重组质粒10倍梯度稀释后作为标准阳性模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并建立标准曲线,对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果显示,建立的标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系(R2=0.998 2),产物Tm值为87.2～87.9℃,检测灵敏度为71.5拷贝/μL。对55份疑似病料进行检测,荧光定量检测48份为阳性,而用常规PCR方法只能检出39份阳性,ELISA方法只检出30份阳性。这表明所建立的DHV-Ⅰ的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和重复性良好等优点,可用于临床DHV-Ⅰ感染的快速检测,为DHV的分子诊断、流行病学调查及定量分析奠定了基础。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR ELISA

ⅰ型鸭肝炎病毒内部核糖体进入位点的结构与功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 1-5页

作者：赵伟李传峰陈宗艳刘光清中国农业科学院上海兽医研究所国家家禽工程技术研究中心上海200241 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为验证ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组5'非编码区(UTR)是否含有内部核糖体进入位点元件,本研究利用体外翻译系统,结合细胞转染试验对DHV-Ⅰ5'UTR的结构和功能进行分析。结果表明:DHV-Ⅰ的5'UTR具有典型的内部核糖体结合元件(IRES)功能,... 详细信息

为验证ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)基因组5'非编码区(UTR)是否含有内部核糖体进入位点元件,本研究利用体外翻译系统,结合细胞转染试验对DHV-Ⅰ5'UTR的结构和功能进行分析。结果表明:DHV-Ⅰ的5'UTR具有典型的内部核糖体结合元件(IRES)功能,能够内部起始下游蛋白的翻译,IRES元件位于360 nt～620 nt,共260个碱基。对IRES的二级结构进行预测和分析显示,DHV-ⅠIRES的结构与丙型肝炎病毒相似。利用定点突变方法,破坏IRES的颈环结构(SL)1、2以及IIIe区的关键性核苷酸,检测该突变对IRES功能的影响。研究结果显示,SL1、SL2和IIIe结构的破坏使得DHV-ⅠIRES的功能消失,表明SL1、SL2和IIIe区是维持IRES启动内部翻译起始功能的关键性结构域。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 5'非编码区内部核糖体进入位点

I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学通报 2008年第7期35卷 1068-1071页

作者：孔留五罗玉均张桂红陈建红徐小芹廖明康艳梅何逸民华南农业大学兽医学院广州510642 佛山科学技术学院生命科学学院南海52823

根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转... 详细信息

根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因 3D基因克隆表达

ⅰ型鸭肝炎病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2008年第1期38卷 25-28页

作者：黄显明张小飞李春芬廖俊伟毛火云安徽农业大学动物科技学院江苏省农业科学院兽医研究所

根据GenBank中登录的ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)A66株的RNA聚合酶基因序列,设计合成了2对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的逆转录套式PCR方法(RT-nested-PCR),采用该方法对DHV-ⅠA66弱毒株和R85952强毒株进行了检测。结果显示,均能扩增到30... 详细信息

根据GenBank中登录的ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)A66株的RNA聚合酶基因序列,设计合成了2对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的逆转录套式PCR方法(RT-nested-PCR),采用该方法对DHV-ⅠA66弱毒株和R85952强毒株进行了检测。结果显示,均能扩增到304 bp的条带,而正常鸭胚、健康鸭肝组织、鸭瘟病毒、鹅细小病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性腔上囊病病毒、减蛋综合征病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌和鸭源多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。表明,所建立的逆转录套式PCR方法可用于鸭病毒性肝炎(DVH)的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒逆转录套式PCR 检测

ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华南农业大学学报 2011年第4期32卷 101-104页

作者：张婧董嘉文罗永文郭霄峰华南农业大学兽医学院广东广州510642

为了构建含有ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的... 详细信息

为了构建含有ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞.原始病毒液在鸭胚成纤维细胞上盲传3代后仍能观察到绿色荧光;以ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清对pBlueSK-TK-EGFP-VP1转染的细胞样品作Westen-blot检测,出现特异条带,且相对分子质量约为54 000.结果表明该研究已成功构建携带ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体,其能够在真核细胞中正确表达.

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒 VP1基因载体构建

ⅰ型鸭肝炎病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2011年第7期41卷 728-732页

作者：李娇王金良祖立闯赵金花沈志强山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 青岛农业大学山东青岛266109

根据GenBank中ⅰ型鸭肝炎病毒的基因组序列,应用Oligo6.0软件设计合成了2对特异性引物,建立了ⅰ型鸭肝炎病毒的巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速检测出极低含量(1pg)的Ⅰ... 详细信息

根据GenBank中ⅰ型鸭肝炎病毒的基因组序列,应用Oligo6.0软件设计合成了2对特异性引物,建立了ⅰ型鸭肝炎病毒的巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速检测出极低含量(1pg)的ⅰ型鸭肝炎病毒。本研究解决了该病在组织病料中检出困难的难题,为Ⅰ型鸭病毒性肝炎的快速诊断、净化及深入研究奠定了基础。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒巢式反转录聚合酶链反应检测

ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒MY株的培育及实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2010年第1期31卷 9-14页

作者：罗薇张金灵刘内生裴超信岳华杨晓农西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 四川省畜牧科学研究院成都610066 四川省动物疫病预防控制中心 610041

将Ⅰ型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株。该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD50/0.1m... 详细信息

将Ⅰ型鸭肝炎分离株XC-1适应鸡胚,培育成1株毒力弱而稳定、免疫原性良好的鸭肝炎鸡胚化MY弱毒株。该毒株毒力为1011.40ELD50/0.1mL,1013.62TCID50/0.1mL;对雏鸭无致病性;在雏鸭体内连续盲传5代未见毒力返强;1日龄雏鸭用8,000 ELD50/0.1mL的MY株致弱毒腿部肌注0.2ml免疫后3d强毒原液0.5mL/只攻击,可产生2/5的保护,第6d-21d产生完全保护,免疫后第3d、5d、6d、7d、9d、14d、21d抗DHVⅠ的中和抗体滴度分别为10-1.38、10-1.55、10-1.64、10-1.65、10-1.68、10-1.8、10-1.89,表明MY是1株理想的鸡胚弱毒疫苗后备株;通过MY株的鸡胚的繁殖规律观察,确定该病毒的最佳收毒时间为接胚后的72h^84h,为疫苗生产条件的建立提供了依据。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒鸡胚致弱毒培育致病性免疫原性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆与序列分析

湖北农业科学 2014年第21期53卷 5208-5212,5216页

作者：任邵娜袁生蒲文珺彭巧丽王辉陈志伟张浩吉李国清华南农业大学兽医学院广州510642 佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231 香港大学李嘉诚医学院艾滋病研究所深圳研究室深圳市第三人民医院广东深圳518112 香港大学李嘉诚医学院艾滋病研究所

为了了解鸭肝炎病毒的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采自广东省各地12个DHV临床分离株的VP1基因进行了扩增、克隆、测序和序列分析.结果表明,12个DHV分离株的VP1基因序列长度均为714 bp,编码238个氨基酸,12个分离株与GenBank公布... 详细信息

为了了解鸭肝炎病毒的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采自广东省各地12个DHV临床分离株的VP1基因进行了扩增、克隆、测序和序列分析.结果表明,12个DHV分离株的VP1基因序列长度均为714 bp,编码238个氨基酸,12个分离株与GenBank公布的参考株核苷酸同源性为91.7％～95.8％,氨基酸同源性为94.5％～98.3％,而12个分离株之间的核苷酸序列同源性达到99.2％～100％,氨基酸同源性为97.9％～100％.系统分析证明,12个DHV分离株均为DHV-Ⅰ型,不同分离株VP1基因无碱基插入和缺失,但存在点突变,各DHV分离株间亲缘关系较近,但存在一定的遗传差异.

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒 VP1基因克隆序列分析

ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山东农业大学学报（自然科学版） 2010年第4期41卷 539-544页

作者：刘标高继明姜世金司兴奎辛英豪刘少宁谢之景朱岩丽周恩民山东农业大学动物医学院山东泰安271018 佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231

自山东寿光地区疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织中分离到一株鸭肝炎病毒,命名为SG株DHV-Ⅰ。该病毒能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,该病毒第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2 mL,对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2 mL。全基因组序... 详细信息

自山东寿光地区疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织中分离到一株鸭肝炎病毒,命名为SG株DHV-Ⅰ。该病毒能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,该病毒第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2 mL,对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2 mL。全基因组序列比较分析发现,SG株DHV-Ⅰ基因组结构为5’UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3’UTR,与A型DHV-Ⅰ毒株的核苷酸同源性为94.9%~99.7%,氨基酸同源性为94.5%~99.7%,表明SG株DHV为一株A型DHV-Ⅰ强毒。

关键词： ⅰ型鸭肝炎病毒分离鉴定全基因组