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龙胆科藏药“蒂达”类的DNA条形码鉴定研究

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中国中药杂志 2016年第4期41卷 567-571页

作者：刘川张雨欣刘悦陈一龙范刚向丽徐江张艺成都中医药大学民族医药学院四川成都611137 中国中医科学院中药研究所北京100700

应用ITS2序列对多基原龙胆科藏药"蒂达"进行DNA条形码鉴定,为保障该类药材的准确鉴定及其临床用药安全提供科学依据。以青藏高原地区龙胆科中獐牙菜属Swertia、花锚属Halenia、扁蕾属Gentianopsis、喉毛花属Comastoma、肋柱花属Lomatogo... 详细信息

应用ITS2序列对多基原龙胆科藏药"蒂达"进行DNA条形码鉴定,为保障该类药材的准确鉴定及其临床用药安全提供科学依据。以青藏高原地区龙胆科中獐牙菜属Swertia、花锚属Halenia、扁蕾属Gentianopsis、喉毛花属Comastoma、肋柱花属Lomatogonium 5个属,共计13个种,151份实验样本为研究对象,提取"蒂达"药材的基因组DNA、扩增ITS2序列并双向测序。采用Codon Code Aligner V3.7.1对测序峰图进行校对拼接。ITS2序列经比对后长度为231 bp,13个种共31种单倍型,G+C平均含量达61.40%。最小距离法和NJ树结果显示,龙胆科藏药"蒂达"类11个种能够各自聚为一支相互区分,并表现出良好的单系性,二叶獐牙菜和华北獐牙菜不能准确鉴定。ITS2序列可准确、稳定的鉴别龙胆科藏药"蒂达"类药材,从而为进一步构建复杂多基原藏药品种真伪鉴别方法提供了科学参考。

关键词：藏药 “蒂达” 龙胆科 DNA条形码 ITS2序列物种鉴定

“蒂达”龙胆科基原植物酮类成分及其DNA条形码的研究进展

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中成药 2017年第1期39卷 160-165页

作者：杨晓泉夏从龙大理大学药学与化学学院云南大理671000

"蒂达"是藏药中一类治疗肝胆疾病药物的总称,龙胆科獐牙菜属、花锚属等为其主要基原植物,临床应用广泛,具有良好的发展前景。其酮类成分具有保肝、利胆、抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制、舒张血管、抗氧化、清除氧自由基等多种活性,但其... 详细信息

"蒂达"是藏药中一类治疗肝胆疾病药物的总称,龙胆科獐牙菜属、花锚属等为其主要基原植物,临床应用广泛,具有良好的发展前景。其酮类成分具有保肝、利胆、抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制、舒张血管、抗氧化、清除氧自由基等多种活性,但其品种繁多、基原复杂,传统鉴别具有局限性。本文浅析蒂达品种及资源分布,并综述10年来"蒂达"龙胆科基原植物酮类成分及其DNA条形码的应用进展,为其进一步研究提供参考。

关键词： “蒂达” 龙胆科基原植物 (口山)酮 DNA条形码

四种“蒂达”类藏药提取物对四氯化碳损伤人肝细胞的保护作用研究

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时珍国医国药 2017年第8期28卷 1797-1799页

作者：李博张寿文李姗姗曹岚慕泽泾杜小浪钟国跃蒋伟江西中医药大学中药资源与民族药研究中心江西南昌330004 江西民族传统药现代科技与产业发展协同创新中心江西南昌330004 江西中医药大学实验动物科技中心江西南昌330004

目的考察四种"蒂达"类藏药提取物对体外四氯化碳损伤人肝细胞的保护作用,为该类药材的开发利用提供药理学研究依据。方法采用四氯化碳诱导的人肝L-02细胞损伤模型,以四种"蒂达"类藏药提取物进行干预,水飞蓟宾为对照,MTT法测定细胞存活... 详细信息

目的考察四种"蒂达"类藏药提取物对体外四氯化碳损伤人肝细胞的保护作用,为该类药材的开发利用提供药理学研究依据。方法采用四氯化碳诱导的人肝L-02细胞损伤模型,以四种"蒂达"类藏药提取物进行干预,水飞蓟宾为对照,MTT法测定细胞存活率并测定细胞培养上清液中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力、丙二醛(MDA)的含量,以及细胞裂解上清液中的超氧化物气化酶(SOD)的活力。结果四种"蒂达"类藏药提取物均可显著提高肝细胞的存活率,可显著性降低四氯化碳致肝细胞损伤的转氨酶(ALT、AST)的活力,显著升高超氧化物气化酶(SOD)的活力,降低丙二醛(MDA)的含量,其中篦齿虎耳草提取物对上述指标的影响改变尤为显著。结论四种"蒂达"类藏药均可减轻四氯化碳致肝细胞损伤程度,其中篦齿虎耳草效果最为明显,其作用机制与抗自由基而减轻脂质过氧化损伤相关。

关键词： “蒂达” L-02细胞肝细胞损伤

藏药“蒂达”DNA条形码鉴定及中国沙棘生态适宜性研究

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藏药“蒂达”DNA条形码鉴定及中国沙棘生态适宜性研究

作者：刘川成都中医药大学

学位级别：硕士

近年来,随着市场需求和自然环境变化的影响,藏药资源遭到破坏。因此,摸清藏药资源分布状况、开展野生资源的保护显得尤为紧迫。另一方面,藏药长期存在的“同名异物”、“同物异名”等多基原现象,导致藏药品种鉴定困难,严重影响了藏药质... 详细信息

近年来,随着市场需求和自然环境变化的影响,藏药资源遭到破坏。因此,摸清藏药资源分布状况、开展野生资源的保护显得尤为紧迫。另一方面,藏药长期存在的“同名异物”、“同物异名”等多基原现象,导致藏药品种鉴定困难,严重影响了藏药质量控制和评价研究。本文分为两个部分：第一,以复杂多基原藏药“蒂达”((?))为研究对象,重点采用DNA条形码开展其品种鉴定研究;第二,以常用藏药中国沙棘Hippophae rhamnoides L. subsp. sinensis Rousi为研究对象,开展其资源调查、规范化种植、生态适宜区划、化学成分积累与生态因子相关性研究。以期为藏药品种鉴定、野生资源保护和适宜区推广人工栽培种植提供科学依据。目的：建立藏药“蒂达”的DNA条形码鉴定方法;对中国沙棘进行科学的潜在分布预测和适生等级划分;确定影响中国沙棘叶黄酮类成分积累的生态因子及其最佳范围。方法：1.采用试剂盒法对藏药“蒂达”提取总DNA,采用通用引物ITS2(2F/3R)进行PCR扩增,并对扩增成功的PCR产物进行测序。同时对序列进行拼接、比对,计算种内种间K2P距离,构建系统进化NJ树,评价其barcoding gap,从而实现对藏药“蒂达”的DNA条形码分子鉴定;2.从全球气候数据库中提取生态因子,基于Maxent模型设置ROC评价曲线,同时运用ArcGIS软件,对中国沙棘进行适宜区区划研究;3.采用TLC法对中国沙棘叶黄酮类成分进行定性鉴别;采用HPLC法对不同产地中国沙棘叶黄酮类成分进行含量测定;对17批次不同产地中国沙棘叶进行HPLC特征指纹图谱研究,构建准确可靠的中国沙棘叶色谱指纹图谱。4.应用Pearson相关分析、逐步回归分析和偏最小二乘回归法(PLSR),分析不同产地中国沙棘叶化学成分与其生态因子间的相关性。结果：1.ITS2序列可准确鉴定龙胆科藏药“蒂达”类药材：样品共151条序列,比对后序列长度达231 bp;平均GC含量为61.40%,种内变异大,共31个单倍型。其中四数獐牙菜Swertia tetraptera、祁连獐牙菜S. przewalskii、镰萼喉毛花Comastoma falcatum、辐状肋柱花Lomatogonium rotatum各只有1个单倍型。13个“蒂达”物种中,除二叶獐牙菜S. bifolia和华北獐牙菜S. wolfangiana2个种外,11个物种均能准确鉴定。2.课题组建立了产业化治沙科技试验示范基地、红原县藏医院沙棘规范化栽培示范基地和松潘县川主寺贝母基地(沙棘规范化栽培示范基地)等3个沙棘防沙漠化规范化栽培示范基地,共计6亩。基于Maxent模型区划结果表明：中国沙棘在我国分布的适宜指数为0-0.708。适宜区面积大59.05万km,占全国总面积的6.13%,分布范围涉及山西、陕西、宁夏、四川、甘肃、青海、四川、西藏、内蒙古、辽宁等10个省(自治区);较适宜区面积达55.25万km,占全国总面积的5.73%,分布范围包括河北、辽宁、内蒙古省(自治区)。3.以槲皮素、山柰素和异鼠李素为对照品建立了中国沙棘叶的薄层色谱鉴别方法;17批次中国沙棘叶HPLC含量测定结果表明：槲皮素含量在0.1929%-0.5236%之间、异鼠李素含量在0.2242%-0.6236%之间、山柰素含量在0.0772%-0.1775%之间。可见,不同产地间中国沙棘叶中槲皮素、山柰素和异鼠李素含量差异明显;不同批次的中国沙棘叶HPLC指纹图谱研究结果显示,17批次中国沙棘叶共有14个共有峰,与标准品对照,可确定山柰素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、异鼠李素-3-O-p-D-槐二糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、异鼠李素-3-0-p-D-葡萄糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、芦丁、异鼠李素-3-O-p-D-葡萄糖苷等5个色谱峰。对17批中国沙棘叶的特征指纹图谱进行相似度计算,结果表明17批样品中,相似度均在0.80以上,来自四川省阿坝州红原县、西藏拉萨市达孜县、西藏拉萨市曲水县、陕西省晋中市4批次相似度小于0.9,其余13批次相似度达0.9以上。4.确定了影响中国沙棘叶中槲皮素、山柰素和异鼠李素含量积累的主导生态因子及其最佳范围,在最佳范围内,相应化合物含量最高,具体如下：影响槲皮素积累的主导因子为海拔高度、1月月均降水量和8月月均降水量,其最佳范围分别为3009-3320 m、4.0-6.0mm和118-152mm;影响山柰素含量积累的主导因子为海拔高度、最冷季度降水量、12月月均降水量和3月平均气温,其最佳范围分别为2999-3315 m、9.0-12.0mm、1.0-2.0 mm和-1.9-0.1℃;影响异鼠李素含量积累的主导因子为8月月均降水量、1月月均降水量、最冷季度降水量和海拔高度;其最佳范围分别为：118-122mm、4.0-5.0 mm、13.0-22.0 mm和3158-3568 m。结论：

关键词：藏药 “蒂达” 中国沙棘 DNA条形码品种鉴定 GIS Maxent模型生态适宜区

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藏药“蒂达”研究概况

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