检索结果-南通市图书馆

中国农业科学 2022年第24期55卷 4895-4911页

作者：由玉婉张雨孙嘉毅张蔚华中农业大学园艺林学学院/园艺植物生物学教育部重点实验室/农业农村部华中都市农业重点实验室

【目的】从‘月月粉’月季全基因组中鉴定NAC家族成员，并进行生物信息学和表达模式分析，为研究‘月月粉’NAC的潜在功能提供理论基础，筛选可能参与皮刺发育的候选基因。【方法】以拟南芥NAC氨基酸序列为参考，利用双向Blast及HMM结... 详细信息

【目的】从‘月月粉’月季全基因组中鉴定NAC家族成员，并进行生物信息学和表达模式分析，为研究‘月月粉’NAC的潜在功能提供理论基础，筛选可能参与皮刺发育的候选基因。【方法】以拟南芥NAC氨基酸序列为参考，利用双向Blast及HMM结构域检索筛选RcNAC；对筛选成员进行理化性质、亚细胞定位、序列特征、顺式元件和系统进化分析；基于已释放转录组数据，分析RcNAC在不同组织器官，和不同逆境处理条件下的表达特性；同时通过‘月月粉’不同发育阶段皮刺组织转录组测序，筛选与皮刺发育可能相关的RcNAC。【结果】共鉴定得到116个RcNACs，均含有完整典型的NAM保守结构域，其编码蛋白包含69—713个氨基酸，等电点从4.43—9.54，分子质量从7.87—79.99 kD,81个RcNACs被预测定位于细胞核内；115个RcNACs在7条染色体上不均匀分布，1个RcNAC未明确位置信息；系统进化树分析将AtNACs、OsNACs和RcNACs聚为21类；在不同组织器官中，116个RcNACs表达模式各异，遭受水胁迫和感染灰霉病之后，31个RcNACs表达量发生变化；在衰老的花组织中，6个RcNACs表达量上升；皮刺转录组数据中检测到53个RcNACs，其中26个RcNACs为差异表达基因。【结论】基于已有转录组数据分析，RcNACs协同调控植物组织发育及逆境胁迫响应；结合皮刺转录组数据，部分成员可能参与皮刺细胞增殖、次生细胞壁生物合成及细胞程序性死亡等过程，可作为皮刺发育相关候选基因进行深入研究。

关键词： ‘月月粉’ NAC转录因子转录组测序皮刺发育

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‘月月粉’的再生及刺玫月季育种研究

‘月月粉’的再生及刺玫月季育种研究

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作者：林毅雁北京林业大学

学位级别：硕士

‘月月粉’(R. chinensis’Old Blush’)有四季开花性的古老品种之一,为现代月季品种群的重要亲本之一。本研究建立‘月月粉’再生体系,为将来通过转基因研究四季开花特性奠定前提基础;采用中国原产野生蔷薇种与现代月季品种进行远缘杂... 详细信息

‘月月粉’(R. chinensis’Old Blush’)有四季开花性的古老品种之一,为现代月季品种群的重要亲本之一。本研究建立‘月月粉’再生体系,为将来通过转基因研究四季开花特性奠定前提基础;采用中国原产野生蔷薇种与现代月季品种进行远缘杂交,继续开展培育具有较强抗逆性和观赏价值的全新月季品种群——刺玫月季,为进一步的育种工作奠定基础。在课题研究期间,调查记录北京植物园近年引进的部分月季品种487个,记录整理442个品种的形态性状及种源背景,观测266个月季品种的天然可育性。进行了单瓣黄刺玫(R. xanthina f. normalis)、报春刺玫(R. primula)、黄刺玫(R.xanthina)、黄蔷薇(R. hugonis)、金樱子(R. laevigata)与现代月季品种间的远缘杂交试验。2008年,杂交组合共计90个,802朵花,由于人为影响,最终仅得到15个果实,87粒种子,1株杂种苗。2009年,杂交组合共计93个,1344朵花,43个果实,304粒种子,目前仍均未出苗。建立了‘月月粉’直接器官发生途径的植株再生体系。无菌体系以带茎段的腋芽为外植体,表面灭菌方式采用75%酒精灭菌40s后,稀释8倍的巴氏溶液灭菌14min为宜。最适启动培养基为MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.15mg/L;最适继代培养基为MS+6-BA1.Omg/L+IBAO.1 mg/L;最适诱导不定芽培养基MS+TDZ1.5mg/L+NAA0.05mg/L+ AgNO310mg/L+CH100mg/L+L-proline600mg/L,在弱光(113.2-114.51ux)下培养30天,再生率9.5%;最适诱导愈伤组织培养基为TDZ1.Omg/L+NAA0.2mg/L+AgNO320mg /L+CH150mg/L或TDZ1.0mg/L+NAA0.3mg/L+AgNO320mg/L+CH 150mg/L,暗培养8天后转入在14h／d弱光下培养,愈伤诱导率100%;最适愈伤组织增殖培养基为MS+ 6-BA1.Omg/L+NNAO. 1mg/L+Ads20mg/L或MS+6-BA2.0mg/L+NNA0.15mg/L+Ads20mg／L;最适不定芽发枝培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.01 mg/L;最适生根培养基：1/2MS+IBA0.1mg/L,生根率75.0%。

关键词：月季野生蔷薇种 ‘月月粉’ 再生远缘杂交

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中国古老月季离体保存技术研究

中国古老月季离体保存技术研究

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作者：刘芊北京林业大学

学位级别：硕士

中国古老月季是指出现于1867年以前的原产中国的多季开花的月季花(Rosa chinensis)的品种,统计至2006年我国现存100多个古老月季品种。中国古老月季具有很高的观赏、文化、经济价值,同时也是重要的基因资源,因此保存该类资源非常重要。... 详细信息

中国古老月季是指出现于1867年以前的原产中国的多季开花的月季花(Rosa chinensis)的品种,统计至2006年我国现存100多个古老月季品种。中国古老月季具有很高的观赏、文化、经济价值,同时也是重要的基因资源,因此保存该类资源非常重要。建立多层次的保存体系是提高种质资源保存安全性的重要措施。组织培养和超低温保存是种质资源离体保存的重要技术,后者由于可以长期保存种质资源,近年受到更多的重视。目前中国古老月季主要保存于种质圃中。本文以13个中国古老月季品种为材料研究其离体保存技术,分别研究了中国古老月季品种的组织培养离体保存技术、‘月月粉’茎尖的常规玻璃化法超低温保存技术程序及该程序在其他中国古老月季品种茎尖超低温保存中的适用性。结果如下：(1)建立了11个中国古老月季品种的组织培养离体保存技术体系。在春季(4-5月份)以各品种带腋芽茎段为外植体,初代培养基为不添加激素的MS培养基;增殖培养基为MS+6-BA1.5mg-L-1+NAA0.1mg-L"1,13个品种增殖系数从1.7～3.8不等;生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg-L-1,11个品种生根率均达到70%以上;将试管苗移栽至蛭石：草炭：珍珠岩=5：4：1的基质中,11个品种的移栽成活率均达60%以上。综上可知该体系适用性良好,11个品种可实现再生。(2)建立了中国古老月季品种‘月月粉’茎尖常规玻璃化法超低温保存技术体系。将‘月月粉’试管苗剪为5mm左右的带顶芽小苗,接入含0.3mol·L-1蔗糖的预培养基并放入4℃冰箱中黑暗条件下冷锻炼12d;切取大小约1.5～2.0mm,带3～4片叶原基的茎尖放入Loading溶液中在室温下处理20min,然后在0℃下用PVS2溶液处理60min后迅速投入液氮,冻存时间至少1h;从液氮罐中取出迅速在37℃水浴中化冻1min,使用Unloading溶液处理室温下震荡洗涤2次,每次10min。经TTC染色检测冻存后的茎尖存活率最高为88.4%。将洗涤后的茎尖接入不添加激素的MS培养基中,经暗培养14d后转入正常光下培养,恢复生长率最高为43.3%。(3)进行了‘月月粉’茎尖三种玻璃化超低温保存方法的比较研究。以TTC法检测存活率,常规玻璃化法、包埋玻璃化法和滴冻玻璃化法茎尖冻存后的存活率分别为88.4%、0%和93.0%。常规玻璃化法和滴冻玻璃化法存活率无显著差异,且常规玻璃化法操作简便,因此常规玻璃化法更适合中国古老月季品种‘月月粉’茎尖的超低温保存。(4)为探索液氮保存对于茎尖组织结构的影响,对‘月月粉’超低温保存前后的茎尖使用石蜡切片法进行了组织结构观察。结果表明超低温保存前后顶端分生组织(约8-10层细胞,厚度0.05mm左右)细胞及第1-2片叶原基细胞无明显差别;而超低温保存后,距离顶端分生组织较远的叶原基及顶端分生组织以下的部分组织结构破坏严重,质壁分离明显或出现原生质体破裂、细胞壁变形或破裂的现象。(5)检测了‘月月粉’茎尖常规玻璃化法超低温保存程序在其他中国古老月季品种上的适用性。将该程序应用于其他9个品种,经TTC法检测所得存活率从73.1%～97.0%不等,其中7个品种的恢复生长率为26.7%～45.6%不等,适用性良好。本文建立了中国古老月季的试管离体保存技术体系,并成功建立了中国古老月季品种‘月月粉’的常规玻璃化法超低温保存技术程序,该程序在其他9个中国古老月季品种中适用性良好。本研究初步实现了建立多层次保存中国古老月季种质资源的目标,并为建立中国古老月季品种茎尖超低温保存库提供了良好的基础。

关键词：中国古老月季组织培养 ‘月月粉’ 玻璃化法超低温保存

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月季2n花粉的秋水仙素诱导及其萌发特征的研究

月季2n花粉的秋水仙素诱导及其萌发特征的研究

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作者：张凡北京林业大学

学位级别：硕士

月季经历了漫长的育种历史,至今多倍体杂交育种仍是主要育种手段。‘月月粉’是中国古老二倍体月季,然而现代月季大多为四倍体,通过2n花粉获得异源多倍体,可解决杂交不育问题,有效利用‘月月粉’和‘月月红’的遗传资源。使用花粉母细... 详细信息

月季经历了漫长的育种历史,至今多倍体杂交育种仍是主要育种手段。‘月月粉’是中国古老二倍体月季,然而现代月季大多为四倍体,通过2n花粉获得异源多倍体,可解决杂交不育问题,有效利用‘月月粉’和‘月月红’的遗传资源。使用花粉母细胞压片、秋水仙素诱导花粉加倍、花粉体外萌发、花粉在雌蕊内萌发的荧光显微镜观察等技术,主要获得了下列结论:(1)‘月月粉’花粉减数分裂属于连续型并且存在很强的异步性,诱导处理的有效时期是早期减数分裂,此时花粉母细胞处于细线期到后期Ⅰ。‘月月粉’可天然产生FDR和SDR两种类型的2n花粉,FDR型2n花粉来自垂直纺锤体和平行(融合)纺锤体,SDR型来自减数分裂Ⅱ核分裂或胞质分裂缺失。(2)采用秋水仙素注射结合包裹法,0.50%处理24 h,可获得4.31%有活力的2n花粉,极显著地提高2n花粉的产生率以及FDR型2n花粉的比例。秋水仙素处理的花粉样品中出现了 2n花粉畸形、花粉碎片,以及2n花粉萌发孔由沟状发展为孔状的变化。(3)‘月月粉’花粉在‘桔红色火焰’和‘DEE’两个亲本上,4h开始萌发,8h进入引导组织,24 h进入花柱,72 h进入子房。2n花粉主要在从柱头进入花柱这一阶段(8-24 h)表现出竞争强势,并具有胼胝质塞薄且密度低的特点。(4)诱导花粉管在雌蕊内的生长活性整体低于天然花粉,出现了形态异常现象,但仍有一定比例的2n花粉管进入子房。‘月月红’诱导花粉在‘美景’上萌发率和柱头与花柱的比例均显著高于天然花粉,体现了诱导花粉在杂交中的利用价值。本研究详细记录了‘月月粉’2n花粉的产生,获得了可在雌蕊上萌发的诱导2n花粉,并初步观察了 2n花粉竞争强势的发生阶段和形态特征差异,以及诱导花粉在授粉中的表现。

关键词： ‘月月粉’ 2n花粉人工诱导竞争强势

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