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Prognostic significance of γ-h2ax in laryngeal squamous cell carcinoma after surgery

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中华医学杂志(英文版) 2014年第14期127卷 2664-2667页

作者： Zhang Jingyi Cheng Lei Zhou Liang Department of ENT Eye Ear Nose & Throat Hospital Fudan University

Background The clinical significance of γ-h2ax in laryngeal squamous cell carcinoma(LSCC) has not yet been established. This study was performed to assess the expression of nuclear γ-h2ax in benign and malignant laryngeal lesions and to assess its clinicopathological significance.Methods A total of 70 LSCC tumor-normal tissue paired samples were evaluated for γ-h2ax expression using immunohistochemical staining. Their expression was correlated with different clinicopathological parameters.Results Nuclear γ-h2ax expression was frequently detected in LSCC tissues(P high nuclear γ-h2ax levels were not associated with any clinicopathological characteristics of LSCC(P >0.05). Univariate Kaplan-Meier analysis showed that positive nuclear γ-h2ax expression was associated with a decreased overall survival(P=0.017). Multivariate Cox regression analysis showed that nuclear γ-h2ax expression was an independent risk factor for overall survival.Conclusion The expression of nuclear γ-h2ax might be closely related to the prognosis of LSCC.

关键词： γ-h2ax laryngeal squamous cell carcinoma DNA damage response immunohistochemistry

γ-h2ax与DNA双链断裂关系的研究进展

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卫生研究 2007年第4期36卷 520-522页

作者：宾萍郑玉新中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所北京100050

h2ax是组蛋白的一个种类,普遍存在于整个基因组中。据报道,DNA双链断裂后可诱导位于丝氨酸-139位C-端保守区域内的h2ax磷酸化形成γ-h2ax,在荧光显微镜下形成可见的γ-h2ax焦点。用特异性抗体的免疫荧光法检测γ-h2ax已成为测定DSB的金... 详细信息

h2ax是组蛋白的一个种类,普遍存在于整个基因组中。据报道,DNA双链断裂后可诱导位于丝氨酸-139位C-端保守区域内的h2ax磷酸化形成γ-h2ax,在荧光显微镜下形成可见的γ-h2ax焦点。用特异性抗体的免疫荧光法检测γ-h2ax已成为测定DSB的金标准。目前,多种物理性、化学性和生物性的因素都能诱导形成γ-h2ax焦点。本文综述了不同因素诱导形成γ-h2ax的机制及其与DNA双链断裂之间的关系的研究进展。

关键词： DNA损伤 γ-h2ax DNA双链断裂

基于γ-h2ax生物标志物DNA遗传毒性检测方法的研究进展

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中国新药杂志 2016年第4期25卷 418-424页

作者：黄鹏程周长慧常艳国家上海新药安全评价研究中心上海201210

DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)是细胞DNA损伤类型中最严重的一种。DSBs可以激活细胞的DNA损伤应答(DNA damage response,DDR)机制,从而使组蛋白h2ax迅速磷酸化(磷酸化的h2ax组蛋白被称为γ-h2ax)。随后,γ-h2ax聚集在双... 详细信息

DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)是细胞DNA损伤类型中最严重的一种。DSBs可以激活细胞的DNA损伤应答(DNA damage response,DDR)机制,从而使组蛋白h2ax迅速磷酸化(磷酸化的h2ax组蛋白被称为γ-h2ax)。随后,γ-h2ax聚集在双链断裂处,形成由大量γ-h2ax聚集成的灶点(foci)。检测细胞中的γ-h2ax灶点数目就可以用于评价DNA双链断裂情况,进而可以用来评价遗传毒性因子的致突变能力。目前,国内外有多种对γ-h2ax灶点的检测方法,包括蛋白质印迹法(Western blotting)、免疫荧光染色显微镜检测法、全细胞酶联免疫反应(Whole-cell ELISA)检测法和流式细胞术检测法等,每种方法各有优缺点。本文将重点阐述近几年国内外γ-h2ax检测方法的新进展,并总结对比不同方法之间的操作步骤、统计参数及优缺点,分析γ-h2ax检测方法在遗传毒理方面的应用前景。

关键词： γ-h2ax DSBs 生物标志物遗传毒理

电离辐射对Jurkat细胞γ-h2ax蛋白表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2010年第5期36卷 895-899页

作者：倪冠英何淑梅董娟聪金顺子吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室吉林长春130021 吉林省肿瘤医院核医学科吉林长春130012 吉林大学第一医院干部病房吉林长春130021

目的:探讨电离辐射诱导Jurkat细胞γ-h2ax蛋白表达的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)分别检测2.0GyX线照射后不同时间点(0、0.5、1.0、4.0、8.0、16.0及24.0h)和0.5、1.0、2.0、4.0及6.0Gy不同剂量X线照射后Jurkat细胞γ-h2ax表达变化,... 详细信息

目的:探讨电离辐射诱导Jurkat细胞γ-h2ax蛋白表达的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)分别检测2.0GyX线照射后不同时间点(0、0.5、1.0、4.0、8.0、16.0及24.0h)和0.5、1.0、2.0、4.0及6.0Gy不同剂量X线照射后Jurkat细胞γ-h2ax表达变化,并于量效实验同时进行Jurkat细胞凋亡率检测。结果:与假照组比较,2.0GyX线照射后Jurkat细胞γ-h2ax表达水平于1.0h内达最大值,1.0h后开始呈时间依赖性下降,16.0h仍高于假照水平(P24.0h降至与对照无明显差异;不同剂量X线照射后1.0h,Jurkat细胞γ-h2ax的表达水平在0.5Gy以内没有明显变化,0.5Gy以后呈剂量依赖性升高,4.0Gy时达最高水平(Ph,γ-h2ax表达在0～4.0Gy范围内随剂量增大而逐渐升高,4.0Gy时达到最高水平(Pγ-h2ax表达增高,在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。

关键词：电离辐射蛋白表达 γ-h2ax Jurkat细胞

DNA损伤及其标志物γ-h2ax检测的研究进展

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分析试验室 2020年第10期39卷 1131-1136页

作者：王丽娜罗志张立广东环境保护工程职业学院佛山528216 华南师范大学广州510631

DNA易受各种内源性和外源性作用的干扰而出现损伤,这些损伤会引起遗传信息载体产生不可修复性的变化,从而导致癌症等重大疾病的发生。当DNA发生损伤时,大量的γ-h2ax会聚集于损伤位点,释放生物信号并引导修复蛋白对DNA进行修复,因此,γ-... 详细信息

DNA易受各种内源性和外源性作用的干扰而出现损伤,这些损伤会引起遗传信息载体产生不可修复性的变化,从而导致癌症等重大疾病的发生。当DNA发生损伤时,大量的γ-h2ax会聚集于损伤位点,释放生物信号并引导修复蛋白对DNA进行修复,因此,γ-h2ax被认为是DNA损伤的重要标志物之一。本文结合国内外研究,对不同的DNA损伤类型进行了论述,同时对包括免疫荧光染色法、流式细胞术法、蛋白质印迹法和全细胞酶联免疫反应法在内的多种γ-h2ax检测方法进行了总结,为DNA损伤研究和γ-h2ax检测提供了借鉴与参考。

关键词： DNA损伤 γ-h2ax 标志物检测方法

硫酸镁抑制经辐射后人脐静脉血管内皮细胞γ-h2ax的表达

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中华放射医学与防护杂志 2015年第3期35卷 161-164页

作者：徐华林孙阳崔凤梅涂彧苏州大学放射医学与防护学院 215123

目的探讨不同浓度硫酸镁对照射后人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial,hUVEC）存活率及γ-h2ax表达的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度的硫酸镁对hUVEC存活率的影响;激光共聚焦显微镜检测4GyX射线照射后不同时间hUVE... 详细信息

目的探讨不同浓度硫酸镁对照射后人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial,hUVEC）存活率及γ-h2ax表达的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度的硫酸镁对hUVEC存活率的影响;激光共聚焦显微镜检测4GyX射线照射后不同时间hUVEC中γ-h2ax簇集点（foci）的数量;流式细胞术和Western blot检测γ-h2ax蛋白的表达情况.结果 CCK-8法显示,1.25 mg/ml浓度的硫酸镁能提高照射后的细胞存活率（t=-6.34,P＜0.05）;细胞免疫荧光结果显示,照射后0.5～1 hfoci焦点数达到最高值,平均达45个,随着时间的延长loci点数变少,强度减弱,具有时间依赖性,而硫酸镁在照后0.5、1、2、6、12 h均可以明显减少loci的形成（t=12.62、6.36、11.93、5.75、9.43,P＜0.05）;流式细胞仪检测表明,硫酸镁在照后0.5、1、2h可以抑制X射线照射后γ-h2ax蛋白表达量的增加（t=6.07、5.32、11.85,P＜0.05）;Western blot结果与细胞免疫荧光结果一致.结论硫酸镁可以增加照射后hUVEC的存活率,降低X射线诱导的DNA损伤蛋白γ-h2ax的表达.

关键词：硫酸镁人脐静脉血管内皮细胞 X射线 CCK-8 γ-h2ax

γ射线诱导人淋巴细胞损伤及磷酸化组蛋白h2ax和ATM表达

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中华放射医学与防护杂志 2011年第2期31卷 126-129页

作者：田梅潘艳刘建香阮健磊苏旭中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所北京100088

目的探讨人外周血经不同剂量”℃0 γ射线照射后淋巴细胞损伤情况，以及与磷酸化的h2ax、ATM表达的关系。方法永生化淋巴细胞及人新鲜外周血淋巴细胞经0-8Gy ^60Co γ射线照射后0.5h，分别采用Westernblot和流式细胞术检测磷酸化ATM和1-... 详细信息

目的探讨人外周血经不同剂量”℃0 γ射线照射后淋巴细胞损伤情况，以及与磷酸化的h2ax、ATM表达的关系。方法永生化淋巴细胞及人新鲜外周血淋巴细胞经0-8Gy ^60Co γ射线照射后0.5h，分别采用Westernblot和流式细胞术检测磷酸化ATM和1-h2ax的表达情况，并通过CB微核法检测受照射后人外周血淋巴细胞微核验证细胞损伤程度。结果流式细胞检测发现人外周血淋巴细胞照射后0.5h，,γ-h2ax表达的剂量效应关系呈线性平方模式，其拟合曲线为：Y=3.96＋11.29D-0.45D。，而相同方法检测磷酸化ATM蛋白的表达未见明显变化。Westernblot检测结果表明，照射后0．5h，各受照射组磷酸化ATM表达在0．1～8Gy范围内具有呈剂量依赖性增高的趋势。人外周血淋巴细胞微核结果显示，γ射线照射后DNA损伤情况明显加重，随吸收剂量的增加，微核细胞率明显增多。结论”Co γ射线可诱导DNA双链断裂，随着吸收剂量的增加，微核率明显增加，磷酸化的h2ax、ATM表达水平亦明显增高，本研究为辐射损伤及辐射事故生物剂量估算领域的研究提供了理论依据。

关键词： ^60Co γ 射线淋巴细胞 γ-h2ax ATM磷酸化微核

γ-h2ax分析电离辐射诱发小鼠神经元DNA双链断裂及修复

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中华放射医学与防护杂志 2009年第1期29卷 5-8页

作者：董晓荣 Ruebe Claudia Ruebe Christian 伍钢华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤研究中武汉430022 Department of Radiation Oncology Saarland University Hospital Germany

目的观察临床剂量的电离辐射后小鼠神经元DNA双链的断裂及修复，探讨γ-h2ax是否能作为衡量体内正常脑组织神经元DNA双链断裂（DSB）形成和修复的指标。方法电离辐射诱导DSB形成试验，C57BL／6小鼠行0．1、0．5和1．0Gy全身照射后10min... 详细信息

目的观察临床剂量的电离辐射后小鼠神经元DNA双链的断裂及修复，探讨γ-h2ax是否能作为衡量体内正常脑组织神经元DNA双链断裂（DSB）形成和修复的指标。方法电离辐射诱导DSB形成试验，C57BL／6小鼠行0．1、0．5和1．0Gy全身照射后10min，收集脑组织进行分析；DSB修复试验，修复功能正常小鼠（C57BL／6）和修复缺陷鼠（BALB／c，A—T和SCID）在全身照射2Gy后0．5、2．5、5、24和48h收集脑组织进行分析。未照射的小鼠作为对照组。γ-h2ax和NeuN免疫荧光双重染色和免疫组织化学染色分析脑组织神经元DSB形成和修复。结果DSB形成试验，在对照组脑组织皮质区神经元的细胞核内仅有数目很少的γ-h2ax焦点，而受照射后细胞核内γ-h2ax焦点数目显著增加，并显示出明显的剂量相关。通过分析不同放射敏感性的小鼠电离辐射后脑组织皮质区神经元的DSB修复动力学，发现C57BL／6小鼠细胞核内γ-h2ax焦点随时间的延长迅速减少，在照射后24和48h仅有很低水平DSB未修复；而免疫缺陷SCID鼠在照射后所有的时间点都显示出γ-h2ax焦点的明显增加，A—T小鼠表现出较低的修复缺陷，主要表现在较晚的时间点（≥5h）γ-h2ax焦点的中度增加；放射敏感的BALB／c小鼠与C57BL／6小鼠相比γ-h2ax焦点数量轻度增加。结论γ-h2ax焦点分析可以作为一项精确的量化指标，在体内衡量临床相关剂量电离辐射诱导的DSB形成和修复。

关键词： γ-h2ax DNA双链断裂放射敏感性

γ-h2ax分析用于检测电离辐射致hepG2细胞DNA双链断裂的研究

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中华放射医学与防护杂志 2007年第5期27卷 450-454页

作者：任精华林菊生刘瑶陈琼董旭昇华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所武汉430030

目的应用γ-h2ax分析检测电离辐射导致肝癌细胞株hepG2基因组DNA双链断裂的情况，并检测在不同细胞周期时相中的表达差异，从而了解不同时相hepG2细胞株的辐射敏感性。方法利用胸腺嘧啶核苷（TdR）阻断hepG2细胞于G1期末，于不同时间... 详细信息

目的应用γ-h2ax分析检测电离辐射导致肝癌细胞株hepG2基因组DNA双链断裂的情况，并检测在不同细胞周期时相中的表达差异，从而了解不同时相hepG2细胞株的辐射敏感性。方法利用胸腺嘧啶核苷（TdR）阻断hepG2细胞于G1期末，于不同时间点分别得到同步化的S期和G2/M期细胞，用60Coγ射线照射细胞，建立DNA双链断裂模型，采用免疫荧光法和Westemblotting检测γ-h2ax的表达。结果TdR阻断后继续培养至34和40h，分别得到了较高同步化程度的S期和G2／M期hepG2细胞；受照后的hepG2细胞中Y-h2ax表达较照射前显著增高，处于S期的细胞γ-h2ax表达增加更为突出。结论不同周期时相的hepG2细胞受照后均检测出不同程度的DNA双链断裂，其中S期细胞尤为敏感。γ-h2ax对DNA双链断裂快速敏感的反应使γ-h2ax分析在检测早期DNA双链损伤中具有广泛的廊用前景。

关键词： γ-h2ax DNA双链断裂电离辐射