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合浦珠母贝β-肌动蛋白基因的克隆和序列分析

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海洋科学 2006年第8期30卷 64-70页

作者：凌立谢莉萍张勇蒲训张荣庆清华大学生物科学与技术系海洋生物技术研究所北京100084 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000

为进一步研究珍珠质基质蛋白外排机制,同时为今后合浦珠母贝(Pinctada fucata)不同组织的基因表达研究提供阳性对照,根据大鼠(Rattus norvegicus)胞质型肌动蛋白β-actin设计引物,通过RT-PCR方法克隆鉴定了合浦珠母贝肌动蛋白同源基因... 详细信息

为进一步研究珍珠质基质蛋白外排机制,同时为今后合浦珠母贝(Pinctada fucata)不同组织的基因表达研究提供阳性对照,根据大鼠(Rattus norvegicus)胞质型肌动蛋白β-actin设计引物,通过RT-PCR方法克隆鉴定了合浦珠母贝肌动蛋白同源基因片段。序列分析表明,该片段编码的氨基酸序列与相应同源片段具有较高的保守性。合浦珠母贝β-肌动蛋白有多个特有的氨基酸残基。合浦珠母贝可能是在系统进化上较早分出的一支。

关键词：合浦珠母贝(Pinctada fucata) β肌动蛋白序列分析进化

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鳡β-肌动蛋白基因的克隆及表达分析

常熟理工学院学报 2011年第4期25卷 65-70页

作者：郁建锋王蕾张燕萍李建林顾志良中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点实验室江苏无锡214081 常熟理工学院生物与食品工程学院江苏常熟215500

肌动蛋白(actin)在维持细胞结构、细胞运动和细胞分裂等过程中发挥着重要的作用.为了克隆鳡(Elopichthys bambusa)β-肌动蛋白(β-actin)全长cDNA,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,从鳡肌肉获得全长为1775bp的β-actin cDNA序列,其中包含1128bp的开放性阅读框,编码375个氨基酸,5′-非翻译(UTR)区为98个核苷酸,3′-UTR区为549个核苷酸.核苷酸与氨基酸的同源性分析发现,鳡β-actin与鲤形目类硬骨鱼的同源性均在98%以上,其中与团头鲂(Megalobrama amblycephala)的同源性最高,分别为98.94%和99.73%,而与其他脊椎类动物如哺乳类、鸟类、两栖类的同源性也分别在85%和97%以上,说明该基因在生物的分子进化过程中具有很高的保守性.采用核苷酸系统发育分析结果显示鳡β-actin与鲤形目类硬骨鱼聚类在一起,且与团头鲂的亲缘关系最近.RT-PCR分析结果显示,β-actin基因在鳡的肝脏、肾、肠、脑、心脏、鳃和肌肉等7个组织均有表达.

关键词：鳡 β肌动蛋白克隆表达

大鼠CCl_4所致肝纤维化自发逆转的基因表达谱研究

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世界华人消化杂志 2005年第13期13卷 1544-1549页

作者：潘勤谢渭芬张忠兵张新韩泽广中国人民解放军第二军医大学附属长征医院消化内科上海市200003 国家人类基因组南方研究中心上海市201203

目的:利用cDNA微阵列杂交筛选肝纤维化自发逆转过程中的差异表达基因,从而揭示纤维化逆转的基因表达谱. 方法:通过四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)注射SD大鼠8 wk,随后停药6 wk建立肝纤维化自发逆转的动物模型.提取纤维化逆转过程... 详细信息

目的:利用cDNA微阵列杂交筛选肝纤维化自发逆转过程中的差异表达基因,从而揭示纤维化逆转的基因表达谱. 方法:通过四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)注射SD大鼠8 wk,随后停药6 wk建立肝纤维化自发逆转的动物模型.提取纤维化逆转过程中不同时间段的肝组织mRNA,与cDNA微阵列杂交,筛选表达水平明显上调或下调的差异基因,并结合Cluster分析等进行分类.此外选择α共核蛋白、A-raf、早老素2及β肌动蛋白作RT-PCR以验证检测结果. 结果:CCl4诱导的肝纤维化在停止毒剂注射后出现进行性消退.cDNA微阵列杂交证实,肝纤维化消退过程中共有254条基因出现转录水平改变,占基因总数的21.59%. 其中8,10,12,14 wk的差异表达基因分别为54, 85,97,132条.筛选所得的肝纤维化逆转相关基因主要涉及代谢相关酶、脂肪代谢相关蛋白、离子通道、转录因子、胃肠激素及受体、MAPK及PI3k/Akt信号转导通路等.RT-PCR检测与cDNA微阵列杂交一致,证实了结果的可靠性. 结论:肝纤维化逆转过程中基因表达谱发生显著改变, 主要涉及代谢相关酶、转运蛋白/协同转运蛋白、胃肠激素及受体、脂蛋白/脂肪酸结合蛋白、转录因子/ 核因子、MAPK信号转导通路等6类基因.

关键词：基因表达谱 CCl4 cDNA微阵列杂交自发 MAPK信号转导通路 RT-PCR检测肝纤维化逆转脂肪酸结合蛋白差异表达基因转录因子胃肠激素转运蛋白 β肌动蛋白杂交筛选四氯化碳 SD大鼠 mRNA 动物模型差异基因检测结果早老素2

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荧光多重PCR对α地中海贫血的基因诊断

湖南医科大学学报 2003年第2期28卷 123-126页

作者：文曙邬玲仟李崎潘乾龙志高夏家辉夏昆中南大学中国医学遗传学国家重点实验室长沙410078 粤北人民医院遗传中心韶关512000

目的 :建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法 :应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR ,同时扩增α1和α2 珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白 ( β actin) ,用PerkinElmerABIPRISMTM3 77DNASequencer自动分析结果 ,并对所得数... 详细信息

目的 :建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法 :应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR ,同时扩增α1和α2 珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白 ( β actin) ,用PerkinElmerABIPRISMTM3 77DNASequencer自动分析结果 ,并对所得数据进行统计。用连锁分析的方法PCR扩增同一批模板α2 珠蛋白基因上游的 (CA) n,跑变性胶并将结果与前一种方法对照。结果 :荧光多重PCR自动分析和扩增 (CA) n 连锁分析得出的结论与实际情况完全相符 ,结果判断容易。结论 :荧光多重PCR法灵敏、简便 ,单管内就能完成 ,适合运用于α地中海贫血的快速诊断 ,并有可能运用于移植前诊断和母体外周血分离胎儿有核红细胞产前诊断。

关键词：荧光多重PCR α地中海贫血基因诊断 α2珠蛋白基因 β肌动蛋白

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根据mRNA稳定性推断死亡时间的研究

法医学杂志 2005年第1期21卷 19-20页

作者：肖俊辉陈玉川王江峰高翠莲刘水平成建定中山大学基础医学院法医病理教研室广东广州510080

目的检测大鼠肺、胸肌β肌动蛋白(β-actin)mRNA在死后不同时间的表达,为死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠断颈处死后于21℃温度控制系统模拟死后改变,在不同时间点抽提相应组织总RNA,利用RT-PCR技术检测β-actinmRNA的表达水平变... 详细信息

目的检测大鼠肺、胸肌β肌动蛋白(β-actin)mRNA在死后不同时间的表达,为死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠断颈处死后于21℃温度控制系统模拟死后改变,在不同时间点抽提相应组织总RNA,利用RT-PCR技术检测β-actinmRNA的表达水平变化并对扩增产物进行半定量分析。结果大鼠肺β-actinmRNA于死后12d仍可检出,胸肌在死后8d的检测呈阴性。β-actinmRNA在肺脏和胸肌的稳定性呈现器官差异性和时间差异性。结论观察死后肺、胸肌β-actinmRNA的变化,可为死亡时间推断提供客观依据。

关键词：死亡时间 RT-PCR β肌动蛋白大鼠肺脏胸肌

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巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常

中国实验血液学杂志 2006年第4期14卷 759-762页

作者：赵广圣林茂芳浙江大学医学院附属第一医院血液科骨髓移植中心杭州310003

本研究探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态,采用RT-PCR检测β-actin表达,Western-blot检测胞内肌动蛋白质含量,间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE)与微丝骨... 详细信息

本研究探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态,采用RT-PCR检测β-actin表达,Western-blot检测胞内肌动蛋白质含量,间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE)与微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果表明CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。感染后72、96小时,受染细胞内β-actin表达呈渐进性下调,差异显著(P肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。

关键词：巨细胞病毒人胚成纤维细胞 β肌动蛋白微丝

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早产儿严重并发症分析及相关诱发因素研究

山西医药杂志 2016年第14期45卷 1679-1682页

作者：代锡阳佟瀛李海鑫林颖孟新姚义忠辽宁省沈阳市苏家屯区妇婴医院儿科 110101

早产儿是临床上胎龄低于37孕周的新生儿,约占分娩总数的5%～15%。早产儿由于孕周较短,胎儿的各个器官发育不成熟,出生时体质量低、预后差,并且容易发生各种并发症。

关键词：并发症分析器官发育预后差体质量缺血缺氧性脑病通路相关高氧细胞增殖神经肽 β肌动蛋白

人脂肪细胞总RNA的抽提及对脂联素mRNA的扩增

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中国药物与临床 2005年第4期5卷 265-268页

作者：杨泽华解军于保锋杨琦张悦红牛勃山西医科大学生物化学教研室 030001

目的建立一种提取脂肪组织总RNA并能够有效地进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法。方法利用Trizol试剂提取人皮下脂肪组织总RNA,用紫外分光光度法鉴定其产率及纯度,用琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR鉴定所提取的总RNA的完整性。结果采用选... 详细信息

目的建立一种提取脂肪组织总RNA并能够有效地进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法。方法利用Trizol试剂提取人皮下脂肪组织总RNA,用紫外分光光度法鉴定其产率及纯度,用琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR鉴定所提取的总RNA的完整性。结果采用选择性mRNART-PCR试剂盒特异性地扩增出脂联素(adiponectin)和β肌动蛋白(β-actin)的mRNA。结论在脂肪组织总RNA抽提中容易混入基因组DNA,而采用选择性mRNART-PCR只针对mRNA进行特异的扩增。

关键词： mRNA 总RNA 脂联素脂肪细胞抽提 Trizol试剂紫外分光光度法琼脂糖凝胶电泳聚合酶链反应皮下脂肪组织 PCR试剂盒基因组DNA RT-PCR PCR鉴定 β肌动蛋白 PCR) 反转录提取特异性

竞争RT-PCR法定量检测多药耐药基因的表达

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 163-163页

作者：李勇王玉芝军事医学科学院放射医学研究所北京100850

MDR1基因的表达量与肿瘤细胞的耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达的方法中RT-PCR检测MDR1的过程中一般使用β肌动蛋白作为... 详细信息

MDR1基因的表达量与肿瘤细胞的耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达的方法中RT-PCR检测MDR1的过程中一般使用β肌动蛋白作为外参照,通过计算MDR1 cDNA与β肌动蛋白cDNA的比值来表示MDR1基因的表达量。这样只能得到MDR1基因相对β肌动蛋白基因的表达量,而不能测出其绝对表达量。

关键词：多药耐药基因定量检测 RT-PCR法基因表达 β肌动蛋白 MDR1基因表达量耐药性放射医学研究所肿瘤细胞