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Gut-homing α4β7 CD4+ T cells: potential key players in both acute HIV infection and HIV-associated cancers

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Cellular & Molecular Immunology 2018年第2期15卷 190-192页

作者： Yang Wang Xiaofan Lu Hao Wu Wei Li Center of Interventional Oncology and Liver Diseases Beijing You'an HospitalCapital Medical UniversityBeijing100069China Beijing Key Laboratory for HIV/AIDS Research Beijing100069China Center of Infectious Disease Beijing You'an HospitalCapital Medical UniversityBeijing100069China

During acute human immunodeficiency virus(HIV)infection,depletion of CD4^(+) T cells in the host gut mucosa occurs prior to its occurrence in the peripheral blood and other lymphoid tissues.Expression of integrinα4β7,a gut-homing receptor on CD4^(+) T cells,not only provides a potential receptor for HIV but also plays a critical role in lymphocyte migration from the circulation to the intestine.In our previous study,it was found that circulating gut-homingα4β7 CD4^(+) T cells,including the Th17 and Th1 subsets,were significantly depleted during acute HIV-1 infection.1 Moreover,no gut-homing Treg cells were depleted.Thus,the gut-homing Treg:Th17 ratio was inversely correlated with the CD4 T+cell count.

关键词： α4β7 Th17 acute

Distinct chemokines selectively induce HIV-1 gp120-integrinα4β7 binding via triggering conformer-specific activation ofα4β7

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Signal Transduction and Targeted Therapy 2021年第8期6卷 2303-2306页

作者： Shu Wang ChangDong Lin Yue Li ZhaoYuan Liu JunLei Wang YouHua Zhang ZhanJun Yan YueBin Zhang GuoHui Li JianFeng Chen State Key Laboratory of Cell Biology Center for Excellence in Molecular Cell ScienceShanghai Institute of Biochemistry and Cell BiologyChinese Academy of SciencesUniversity of Chinese Academy of SciencesShanghai 200031China Deportment of Orthopedics Suzhou Ninth People's HospitalSoochow UniversitySuzhou 215000China State Key Laboratory of Molecular Reaction Dynamics Dalian Institute of Chemical PhysicsChinese Academy of SciencesDalian 116023China School of Life Science Hangzhou Institute for Advanced StudyUniversity of Chinese Academy of SciencesHangzhou 310024China

Dear Editor,Gut associated lymphoid tissue(GALT)is the principal site where human immunodeficiency virus 1(HIV-1)replicates.CD4^(+) T cells residing in GALT are predominant targets of HIV-1 during the acute phase of infection.CD4^(+) T cells expressing a high level of gut-homing receptor integrin α4β7 are more susceptible to productive infection by HIV-1.

关键词： α4β7 acute gp120

Binding of HIV-1 virions to α_4β_7 expressing cells and impact of antagonizing α_4β_7 on HIV-1 infection of primary CD4^+ T cells

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Virologica Sinica 2014年第6期29卷 381-392页

作者： Chang Li Wei Jin Tao Du Biao Wu Yalan Liu Robin J Shattock Qinxue Hu State Key Laboratory of Virology Wuhan Institute of VirologyChinese Academy of Sciences University of Chinese Academy of Sciences Department of General Surgery Wuhan No.1 Hospital Section of Infectious Diseases Faculty of MedicineImperial College LondonSt.Mary's CampusLondon W21PGUK Institute for Infection and Immunity St George’s University of LondonLondon SW170REUK

HIV-1 envelope glycoprotein is reported to interact with α4β7, an integrin mediating the homing of lymphocytes to gut-associated lymphoid tissue, but the significance of α4β7 in HIV-1 infection remains controversial. Here, using HIV-1 strain Ba L, the gp120 of which was previously shown to be capable of interacting with α4β7, we demonstrated that α4β7 can mediate the binding of whole HIV-1 virions to α4β7-expressing transfectants. We further constructed a cell line stably expressing α4β7 and confirmed the α4β7-mediated HIV-1 binding. In primary lymphocytes with activated α4β7 expression, we also observed significant virus binding which can be inhibited by an anti-α4β7 antibody. Moreover, we investigated the impact of antagonizing α4β7 on HIV-1 infection of primary CD4+ T cells. In α4β7-activated CD4+ T cells, both anti-α4β7 antibodies and introduction of shorthairpin RNAs specifically targeting α4β7 resulted in a decreased HIV-1 infection. Our findings indicate that α4β7 may serve as an attachment factor at least for some HIV-1 strains. The established approach provides a promising means for the investigation of other viral strains to understand the potential roles of α4β7 in HIV-1 infection.

关键词： HIV-1 integrin α4β7 binding infection RNA interference primary CD4+ T cells

PD-1对脓毒症肠相关淋巴细胞归巢的抑制机制研究

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PD-1对脓毒症肠相关淋巴细胞归巢的抑制机制研究

作者：蔡威南昌大学

学位级别：硕士

背景:脓毒症晚期机体将诱导淋巴细胞高表达PD-1通过多种途径如干扰淋巴细胞能量代谢、蛋白合成、诱导淋巴细胞凋亡和耗竭来负性调控淋巴细胞的免疫活动以维护机体的抗炎和促炎反应的平衡。肠道作为脓毒症最常损伤器官之一,其损伤表现主... 详细信息

背景:脓毒症晚期机体将诱导淋巴细胞高表达PD-1通过多种途径如干扰淋巴细胞能量代谢、蛋白合成、诱导淋巴细胞凋亡和耗竭来负性调控淋巴细胞的免疫活动以维护机体的抗炎和促炎反应的平衡。肠道作为脓毒症最常损伤器官之一,其损伤表现主要为肠道细菌屏障、黏液层Ig A、黏膜屏障破坏,肠道正常菌群失衡、细菌移位致使脓毒症患者晚期容易因肠源性感染而死亡,脓毒症肠道损伤具体机制尚不清楚,目前认为炎症、脓毒症治疗时广谱抗生素的使用有着重要的驱动作用。因此探讨脓毒症PD-1对肠道淋巴细胞功能影响,尽早阐明脓毒症肠道免疫功能损伤机制并制定对应保护措施,对脓毒症的防治具有重要意义。目的:研究脓毒症PD-1对肠相关淋巴细胞归巢活动的影响,并探讨其与PI3K/AKT通路的关系。方法:动物实验1.将8周龄雄性SD大鼠200-230g随机分为空白对照组(NC)组、脓毒症组(CLP)组。实验内容:评估大鼠术后24小时摄食量、行动能力、毛发变化、腹腔情况观察24小时后各组大鼠外周血白细胞数变化,HE染色观察CLP组大鼠术后1、3、7天肠系膜淋巴组织形态学变化,蛋白印迹技术(Western blot)检测大鼠肠集合淋巴结组织PD-1表达2.将8周龄SD雄性大鼠,体重200-230g随机分空白对照组(NC组)、脓毒症术后1天组(CLP 1)、脓毒症术后3天组(CLP 3)、脓毒症术后7天组(CLP7)组;脓毒症+抗PD-1 1天组(CLP+anti PD-1 1)、脓毒症+抗PD-1 3天组(CLP+anti PD-1 3)脓毒症+抗PD-1 7天组(CLP+anti PD-7)实验内容:酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大小鼠肠黏液IGA分泌量的变化。HE染色法观察各组大鼠小肠形态学变化。蛋白印迹技术(Western blot)检测各组大鼠肠集合淋巴结(PP结)淋巴细胞PD-1、AKT、P-AKT术后各时间点的表达量变化。流式细胞术检测各组大鼠外周血血液中的淋巴细胞肠道特异性归巢受体α4β7的表达情况。另取大鼠每组设立CLP组和Anti-PD-1 1天组、Anti-PD-1 3天组、Anti-PD-17天组。实验内容:观察比较各组大鼠术后7天的死亡率实验结果:1.CLP 24小时大鼠外周血白细胞数量明显增加;大鼠24小时摄食量明显减少、蜷缩、活动差;术后第3天、第7天肠系膜淋巴组织组织结构紊乱,淋巴细胞分布均匀、细胞数目较NC组明显减少,但术后第7天病变更为严重呈现出荒芜景象。2.CLP组与NC组相比第7天死亡率明显升高(P7天组与NC组比其肠集合淋巴结组织细胞PD-1的表达水平明显升高(Pα4β7的表达比例降低(P7天死亡率无明显变化(P>0.05),肠黏液Ig A水平无明显差异,肠黏膜损伤程度无明显差异,PD-1、P-AKT的表达水平无统计学差异(P>0.05),其血液淋巴细胞α4β7的表达水平无明显变化。Anti-PD-1 3天组与CLP组术后第3天比较大鼠7天死亡率明显下降,其肠黏液Ig A水平下降程度明显低于CLP组(Pα4β7表达有明显差异(P7天组与CLP组术后第7天术后第3天比较大鼠7天死亡率明显下降,其肠黏液Ig A水平下降程度明显低于CLP组(Pα4β7表达水平降低较轻明显差异(Pα4β7的表达,抑制肠相关淋巴细胞归巢活动。

关键词：脓毒症 PD-1 AKT α4β7 肠道

基于文献计量及实验研究枸杞多糖的分析及其对肠道免疫的影响

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第7期 20-23页

作者：李相玲余浚龙温如燕艾军李璐广西中医药大学科学实验中心中医基础研究重点实验室广西南宁530200 广西中医药大学基础医学院广西南宁530200

通过文献计量研究得出枸杞多糖目前研究热点关键词,并通过实验研究不同分子量枸杞多糖的成分以及对肠道黏膜的影响。方法通过中国知网以枸杞多糖以为关键词检索2012年1月1日至2022年12月31日的文献,用VOS viewer version1.6.19(VOS) ... 详细信息

通过文献计量研究得出枸杞多糖目前研究热点关键词,并通过实验研究不同分子量枸杞多糖的成分以及对肠道黏膜的影响。方法通过中国知网以枸杞多糖以为关键词检索2012年1月1日至2022年12月31日的文献,用VOS viewer version1.6.19(VOS) 进行关键词分析,得出近年来研究的聚类以及热点关键词。在不同分子量枸杞多糖含量监测方面,应用恒温干燥法测各样品含水量,煅烧法测灰分含量,索氏回流法测粗脂肪含量,Bradford法测蛋白含量,硫酸苯酚法测定总糖含量,4-羟基苯肼,(4-Hydroxybenzhydrazide,HBAH)法检测样品中还原性糖的含量,四硼酸-硫酸法测定糖醛酸的含量;BALB/c小鼠在体实验,脏器指数反应不同分子量的枸杞多糖的免疫调节作用,流式检测肝门静脉血以及肠道派氏节中淋巴细胞亚群及黏附分子α4β7+的表达量。结果文献计量研究发现目前对枸杞多糖的研究以提取分析、抗氧化、细胞凋亡、免疫调节等为主。对五种不同分子量的枸杞多糖成分检测发现NO.1号粗多糖中灰分,蛋白,脂肪的含量最高,总多糖的含量最少。NO.2号枸杞多糖中多糖的含量最高为66.88%,还原性糖以及糖醛酸的含量最高。NO.3,NO.4,NO.5各含量接近。动物实验结果表明,NO.2号和NO.4号小鼠肠道派氏节个数增加比较显著,并能明显改善派氏节中淋巴细胞比例以及增加黏附分子α4β7+的表达量。结论文献计量分析可以预测枸杞多糖的研究热点,实验验证不同分子量枸杞多糖成分不同以及NO.4号可纠正环磷酰胺对肠道粘膜免疫的影响。

关键词：文献计量枸杞多糖成分分析肠道免疫 α4β7

不同中药水提物对小鼠肠系膜淋巴结细胞α4β7及CCR7的影响

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广东医学 2016年第S1期37卷 16-18页

作者：李相玲余浚龙温如燕邓高丕谢龙旭周联广州中医药大学附属第一临床医学院广州510405 广州中医药大学基础医学院广州510006 广州中医药大学中药学院广州510006 广东凯普生物科技股份有限公司药品部广东潮州521000

目的观察不同中药水提物对小鼠肠系膜淋巴结细胞α4β7及CCR7表达的影响,为中药水提物对肠道黏膜免疫的影响提供研究思路。方法 2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型特异性超敏反应(DTH)小鼠模型,口服各类中药水提物1 g/kg,连续给药14 d,之... 详细信息

目的观察不同中药水提物对小鼠肠系膜淋巴结细胞α4β7及CCR7表达的影响,为中药水提物对肠道黏膜免疫的影响提供研究思路。方法 2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型特异性超敏反应(DTH)小鼠模型,口服各类中药水提物1 g/kg,连续给药14 d,之后检测耳肿胀度及胸腺脾脏脏器指数;流式细胞仪检测肠系膜淋巴结中,细胞表面α4β7及CCR7的表达及淋巴细胞的比例。结果茯苓、羧甲基茯苓、枸杞、香菇、苦瓜、四君子汤均能改善环磷酰胺引起的胸腺脾脏萎缩;香菇、枸杞能改善环磷酰胺导致的DNFB引起的耳肿胀降低;枸杞、苦瓜、茯苓能明显促进肠系膜淋巴结中细胞α4β7的表达;但这些多糖对肠系膜淋巴结中细胞CCR7表达的影响较小。结论不同中药水提物对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫的免疫调节的重点有所不同。

关键词：枸杞水提物香菇水提物苦瓜水提物肠系膜淋巴结 α4β7 CCR7

乳腺炎奶牛整合素α4β7表达规律的初步研究

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乳腺炎奶牛整合素α4β7表达规律的初步研究

作者：王海霞吉林大学

学位级别：硕士

奶牛乳腺炎是目前影响奶牛业发展的主要疾病之一,给生产者带来重大的经济损失。乳腺是一个复杂的器官,乳腺中的淋巴细胞不仅需要对抗病原菌的侵袭,而且需要通过乳汁给幼畜提供被动免疫。淋巴细胞的迁移不是随机的过程,具有组织特异性,... 详细信息

奶牛乳腺炎是目前影响奶牛业发展的主要疾病之一,给生产者带来重大的经济损失。乳腺是一个复杂的器官,乳腺中的淋巴细胞不仅需要对抗病原菌的侵袭,而且需要通过乳汁给幼畜提供被动免疫。淋巴细胞的迁移不是随机的过程,具有组织特异性,主要的分子基础是依赖于细胞表面和血管内皮上粘附分子的表达。国内外学者对乳腺炎的研究多集中于从病原的角度出发,本研究从淋巴细胞再循环中的细胞归巢角度出发,以淋巴细胞归巢受体α4β7为切入点进行研究。对临床型乳腺炎患牛淋巴细胞表面α4β7的表达规律进行了初步检测,为后续研究奶牛乳腺感染免疫提供相应的实验依据。合成奶牛整合素α4的cDNA片段,双酶切后成功构建重组表达质粒pET28a-α4,转化大肠杆菌BL21, IPTG诱导表达,在分子量约30kDa处可见单一目的条带,重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化复性后免疫大鼠制备多克隆抗体,ELISA检测效价达到1:16000, Western Blot检测结果显示大鼠抗牛α4多抗能够识别变性状态下的淋巴细胞表面a4亚基,表明此抗体具有较好的免疫原性和反应原性。同时合成奶牛β7的cDNA片段,构建重组质粒pET28a-β7,诱导表达后的重组蛋白主要以可溶形式存在,纯化后免疫兔子制备多抗,经ELISA和Western Blot检测结果显示兔抗牛β7多抗具有较好的免疫原性和反应原性,能够识别变性状态下的淋巴细胞表面β7亚基。采集患临床型乳腺炎和健康奶牛的血液及乳汁,以自制大鼠抗牛α4和兔抗牛β7多克隆抗体作为一抗,以荧光标记的抗IgG抗体为二抗,进行流式细胞仪检测,结果显示,患临床型乳腺炎的奶牛血液及乳汁中表达α4和β7双阳细胞的比率显著高于健康组奶牛(P<0.05)。本实验为今后的研究工作奠定基础。

关键词：奶牛乳腺炎淋巴细胞 α4β7 抗体流式细胞分析

腺病毒重组CTLA4Ig和α4β7诱导的耐受性树突状细胞治疗食物过敏的体内研究

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腺病毒重组CTLA4Ig和α4β7诱导的耐受性树突状细胞治疗食物过敏...

作者：王丽重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分腺病毒重组CTLA4Ig、α4β7的扩增及转染树突状细胞目的通过扩增AdCTLA4Ig和Adα4β7确定AdCTLA4Ig和Adα4β7的感染效率,构建稳定表达CTLA4Ig和α4β7基因的耐受性树突状细胞疫苗。方法AdCTLA4Ig和Adα4β7转染293细胞扩增腺病... 详细信息

第一部分腺病毒重组CTLA4Ig、α4β7的扩增及转染树突状细胞目的通过扩增AdCTLA4Ig和Adα4β7确定AdCTLA4Ig和Adα4β7的感染效率,构建稳定表达CTLA4Ig和α4β7基因的耐受性树突状细胞疫苗。方法AdCTLA4Ig和Adα4β7转染293细胞扩增腺病毒,TCID50(50%组织培养感染量)法测病毒滴度。取小鼠胫骨及股骨骨髓制成细胞悬液,分离出单个核细胞,在GM-CSF及IL-4作用下培养7天,在光学显微镜下观察其形态学变化。流式细胞术(FCM)鉴定为树突状细胞后,感染AdCTLA4Ig和Adα4β7。荧光显微镜下观察目的基因表达,FCM鉴定不同阶段DC表面标志表达。结果TCID50测AdCTLA4Ig和Adα4β7转染293细胞的病毒滴度分别为5.01×108pfu/ml、4.8×108pfu/ml。42%左右细胞具有CD11c表型,确定为树突状细胞。荧光显微镜下观察约80%DC表达CTLA4Ig和α4β7,当MOI为50时,感染效率最高。FCM检测结果显示经AdCTLA4Ig和Adα4β7共感染的DC表面标志CD86下降明显,而MHCⅡ无改变。结论腺病毒重组CTLA4Ig、α4β7修饰树突状细胞可使其同时表达CTLA4Ig和α4β7两种蛋白,具有耐受性DC的表型,共刺激分子CD86表达减少,而MHCⅡ无改变。第二部分耐受性树突状细胞预防和治疗食物过敏的实验研究目的通过小鼠尾静脉将重组AdCTLA4Ig和Adα4β7诱导的耐受性DC回输于食物(OVA)过敏小鼠体内,观察其对食物过敏小鼠的预防、治疗效果,为临床治疗儿童食物过敏提供新的思路。方法对象:选用无鸡蛋喂养4～6周龄的SPF级BALA/c雌鼠48只为实验对象,随机分为6组。基础致敏24小时后回输耐受性DC为预防组(P组);肠道激发4小时后回输DC为治疗组(T组);预防组和治疗组按照回输AdCTLA4IgDC和AdCTLA4Ig/Adα4β7DC分为预防1组(P1组)、预防2组(P2组)和治疗1组(T1组)、治疗2组(T2组);同时设置生理盐水为阴性对照组和OVA过敏小鼠为阳性对照组。方法:(1)观察各组症状表现;(2)HE染色及甲苯胺兰观察各组小肠组织形态学变化;(3)ELISA法检测血清中OVA特异性IgE水平;(4)免疫组化法检测小鼠小肠组织中IL-10;(5)免疫荧光法检测TGF-β表达水平;(6)免疫荧光检测小肠组织中α4β7表达。结果T1及T2组小鼠经尾静脉注射耐受性DC对OVA介导的速发型变态反应有缓解作用,其中T1组有75%(6/8)、T2组有87.5%(7/8)过敏小鼠腹泻情况减轻;OVA特异性IgE水平明显降低;HE染色可见两组小肠绒毛中上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层炎症细胞浸润现象明显改善;肥大细胞聚集和脱颗粒现象改善,IL-10表达增高。P1、P2组较阳性对照组无明显改善。各组TGF-β表达无差异。免疫荧光检测T2组小鼠小肠组织中α4β7表达高于其他各组。结论:尾静脉回输AdCTLA4Ig/Adα4β7修饰的耐受性树突状细胞证实对卵清蛋白过敏小鼠具有治疗作用,可以缓解小鼠急性发作症状,减轻肠道炎症反应,促进免疫耐受形成,但耐受性树突状细胞对食物过敏无预防作用。

关键词：树突状细胞 CTLA4Ig α4β7 腺病毒食物过敏耐受性树突状细胞免疫治疗

基于整合素α4β7的药物筛选和假选药物作用机制初步研究

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基于整合素α4β7的药物筛选和假选药物作用机制初步研究

作者：霍玉奇郑州大学

学位级别：硕士

目的：整合素（integrin）是表达于细胞膜上,由α/β异二聚体通过非共价键结合形成的膜受体。整合素在免疫系统介导的炎症中起重要作用,可以介导炎症细胞向病灶部位的迁移和聚集。目前整合素家族有多个成员,其中α4β7在肠道炎症中起主... 详细信息

目的：整合素（integrin）是表达于细胞膜上,由α/β异二聚体通过非共价键结合形成的膜受体。整合素在免疫系统介导的炎症中起重要作用,可以介导炎症细胞向病灶部位的迁移和聚集。目前整合素家族有多个成员,其中α4β7在肠道炎症中起主导作用。目前已经确定与α4β7有关的肠道炎症疾病包括克罗恩病（Crohn’s disease）,溃疡性结肠炎（ulcerative colitis）等。α4β7的主要配体为黏膜地址素细胞粘附分子（mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MADCAM-1）。MAdCAM-1是选择性表达于黏膜淋巴器官高内皮静脉和肠道固有层静脉的一种跨膜糖蛋白分子。炎症情况下,多种细胞因子可以促进内皮细胞高表达MAdCAM-1,然后MAdCAM-1介导表达α4β7的白细胞向炎症部位迁移。无论是靶向整合素α4β7或者是MAdCAM-1都可以减轻肠道炎症程度。目前市场上并没有针对α4β7所介导炎症的特异性小分子化合物,临床上使用的Natalizumab是一种人源化的单克隆抗体,靶点为α4亚基,主要用于治疗多发性硬化症和克罗恩病。本课题主要通过筛选影响α4β7和MAdCAM-1相互作用的化合物,其一为寻找特异性小分子抑制剂,开发临床用药,其二通过研究筛选的抑制剂或激动剂作用更好的了解α4β7信号转导通路,以便为开发更好的特异性药物提供理论基础。方法 1.用本实验室构建好的含有MAdCAM-1全长并融合有Fc片段的质粒pcDNA3-MAdCAM-1-Fc构建新质粒pEF-1-MAdCAM-1-Fc并建立293T稳转株。Western blot方法挑选并鉴定高表达MAdCAM-1-Fc稳转株。培养收集稳转株细胞培养基上清,通过Protein A柱子纯化MAdCAM-1-Fc融合蛋白。Protein A粗纯的靶蛋白含有杂蛋白,用AKTA Purifier进行进一步纯化。纯化的MAdCAM-1-Fc蛋白包被96孔ELISA酶标板用于基于细胞黏附实验的药物筛选;2.基于细胞黏附实验的药物筛选选用高表达a4β7的RPMI8866细胞,用荧光染料BCECF-AM处理RPMI8866细胞,然后和不同化合物在包有MAdCAM-1-Fc的ELISA板里共孵育30分钟后洗去未结合或者若弱结合的细胞,最后用荧光仪器进行荧光读数;3.对筛选出的候选药物通过细胞黏附实验进行IC50测定;4. Flow chamber assay对细胞黏附实验筛选出的候选药物进行进一步的验证;5. Western blot检测离子霉素在RPMI8866细胞中对磷酸化Paxilin和磷酸化FAK的蛋白量影响;6.免疫共沉淀检测在离子霉素作用下talin-α4β7的相互作用状态。结果 1.经鉴定共筛出3株高表达MAdCAM-1-Fc的细胞株,分别为1F4,3C8和3F9;2.通过对8个种类的药物库共计2100多种化合物的筛选,共找到五个候选化合物,分别为离子霉素（ionomycin）,雷帕霉素（Rapamycin）,AG879, Tyrphostin A9, SU1498。 3.细胞黏附实验测定四种化合物（Rapamycin为激活剂）的IC50分别为：离子霉素（5.5μM）,AG879（14.18μM）, Tyrphostin A9（11.2μM）,SU1498（15.12μM）。 4. Flow chamber assay实验中观察到在50μM的情况下,离子霉素对RPMI8866细胞和MAdCAM-1结合有抑制作用。而AG879, Tyrphostin A9和SU1498在10μM的情况下没有观察到明显的抑制现象,雷帕霉素在10μM的情况下没有观察到明显的激活现象。 5. western blot结果显示,离子霉素可以抑制paxilin和FAK的磷酸化。 6.免疫共沉淀结果显示离子霉素抑制了Talin与a4β7的结合。结论 1.离子霉素为一种特异性钙离子通道药,可以介导胞外钙离子向胞内转运,本实验发现胞内钙离了浓度可以调节整合素a4β7的活性。雷帕霉索在细胞黏附实验中观察到激活作用,在Flow chamber assay中没有观察到激活作用;AG879, Tyrphostin A9和SU1498在细胞黏附实验中观察到抑制现象,但在后续的Flow chamber assay中并没有观察到抑制作用。这可能归结于两个实验环境不一样,细胞黏附实验中药物在MADCAM-1配体存在的情况下和药物在37度培养箱中孵育30分钟,而Flow chamber assay中药物处理细胞是在没有配体存在的情况下进行的。其次,Flow chamber Assay是比细胞黏附实验灵敏度高得多的技术,这也是我们为何选择这种方法进行药物验证的原因。 2.研究证实Paxilin,黏着斑激酶（focal adh

关键词：整合素 α4β7 MAdCAM-1 药物筛选