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Preparation, characterization and evaluation of multi-component-loaded liposomes containing Tat-tos, phospholipase D inhibitor and doxorubicinPreparation, characterization and evaluation of multi-component-loaded liposomes containing Tat-tos, phospholipase

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2018年第5期27卷 332-341页

作者： Maoyuan Song Yuanyuan Zhang Wenxi Zhang Guanghua Peng Jiaxing Wang Mengya Yin Jiajia Li Yajie Liu Xinru Li Beijing Key Laboratory of Molecular Pharmaceuties and New Drug System ＂ School of Pharmaceutical Sciences Peking University Health Science Center Beijing 100191 China

In the present study, we aimed to co-load the α-tos conjugate Tat-tos with the phospholipase D inhibitor FIPI and the antitumor drug doxorubicin（DOX） in a liposome delivery system for antitumor metastasis. Firstly, Tat-tos was synthesized by solid-phase synthesis, and its structure was confirmed. The ability of free and liposomal Tat-tos to induce apoptosis in vitro was evaluated by flow cytometry. Biodistribution of Tat-tos-loaded liposomes was investigated by a molecular imaging system. Multi-component-loaded liposomes modified with Tat-tos containing FIPI and DOX was prepared by thin film dispersion method in combination with p H gradient method and post-insertion method. Physicochemical properties were determined, and the in vitro uptake ability of the formulations was evaluated. The results showed that the prepared liposomes were characterized by a uniform particle size distribution and small particle size. The encapsulation efficiency of FIPI and DOX exceeded 85%. Both free and liposomal Tat-tos significantly improved the activity of inducing apoptosis of tumor cells. The liposomes modified with Tat-tos were apparently accumulated in normal lung tissue and tumor metastasized lung. Multi-component-loaded liposomes exhibited the strongest cell uptake capacity, suggesting a stronger anti-metastatic effect and anti-tumor activity in vivo.

关键词： Doxorubicin FIPI Liposomes α-tos Tat

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α-生育酚琥珀酸酯通过NFκB信号途径诱导erbB2表达的乳腺癌细胞凋亡

α-生育酚琥珀酸酯通过NFκB信号途径诱导erbB2表达的乳腺癌细胞...

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作者：张媛河北医科大学

学位级别：硕士

目的：维生素E同系物是一类具有预凋亡活性的维生素E的衍生物，其中以α-生育酚琥珀酸酯（α-tocopheryl succinate, α-tos）为代表。研究证明α-tos能够引发多种肿瘤细胞凋亡，并且对恶性肿瘤细胞具有高度选择性而对正常细胞没有毒性... 详细信息

目的：维生素E同系物是一类具有预凋亡活性的维生素E的衍生物，其中以α-生育酚琥珀酸酯（α-tocopheryl succinate, α-tos）为代表。研究证明α-tos能够引发多种肿瘤细胞凋亡，并且对恶性肿瘤细胞具有高度选择性而对正常细胞没有毒性，使之成为一种有前途的肿瘤预防及治疗药物。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率占妇女肿瘤的31%，其中10%-34%属于erbB2表达乳腺癌。erbB2（HER-2/neu）为人类表皮生长因子受体家族成员之一，它参与抑制细胞凋亡，维持或促进肿瘤细胞生长。因此erbB2表达乳腺癌恶性程度较高。常规治疗乳腺癌的方法包括手术、化疗和内分泌治疗等，而erbB2表达的乳腺癌对许多化疗药物不敏感。erbB2基因的激活导致其下游的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶Akt的自动活化。Akt引起核转录因子κB（nucler factor-κB,NFκB）的激活，在大多数非恶性细胞中，NFκB复合体（通常由抑制亚单位IκB和p50以及p65亚基组成的异三聚体）主要位于细胞质中。NFκB的激活导致其易位进入细胞核并结合到某些特定基因的启动子区域，例如与IAP和FLIP基因的启动子区域结合，从而使肿瘤细胞能抵抗凋亡。因此，抑制erbB2表达乳腺癌细胞的NFκB活性的药物具有临床治疗意义。最近，发现α-tos能够诱导erbB2表达的乳腺癌细胞的凋亡。所以本实验以人乳腺癌细胞系MCF-7（erbB2低表达）及MDA-MB-453（erbB2高表达）为模型，通过测定Akt的活性，NFκB p65的核移位，caspase的活性，以及经α-tos处理后，MCF-7及MDA-MB-453细胞形态学变化，并测定α-tos对MCF-7及MDA-MB-453细胞的半数抑制浓度即IC50值，研究α-tos诱导erbB2表达乳腺癌细胞凋亡的分子机制，并探讨α-tos是否通过NFκB信号途径诱导erbB2表达乳腺癌细胞的凋亡。方法：1细胞培养和处理人类乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-453培养在10％初生小牛血清-DMEM培养基中。细胞浓度达到50-70％汇合时，在细胞培养基中加入不同浓度的α-tos。药物处理一定时间后，收集细胞进行实验。 2MTT检测MCF-7和MDA-MB-453细胞分别接种于96孔培养板，贴壁后加入浓度不同的α-tos继续培养24h和48h，每个剂量设6个复孔，处理时间结束后加入MTT5mg/ml，继续培养4小时，二甲基亚砜（DMSO）溶解结晶，用酶标仪在490nm波长下测定各孔OD值。通过SPSS软件进行数据分析，计算细胞半数抑制浓度（IC50）值，并以α-tos浓度为横坐标，生长抑制率为纵坐标作图。细胞生长抑制率（%）=（对照组平均OD值-处理组平均OD值）/对照组平均OD值×100% 3Hoechst染色观察细胞凋亡形态取无菌盖玻片置于6孔板内，MCF-7细胞和MDA-MB-453细胞接种于6孔板内培养过夜，使约为70%汇合。加α-tos刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟。去固定液，用PBS洗2次，每次3分钟，吸尽液体。加入0.5ml Hoechst33258染色液染色5分钟，去染色液，用PBS洗2遍，每次3分钟，吸尽液体。滴一滴抗荧光淬灭封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。荧光显微镜观察染色结果，并拍照。 4免疫印迹收集细胞，使用蛋白提取试剂提取细胞总蛋白。蛋白质样品变性后，使用10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移到硝酸纤维素膜。膜封闭后加入一抗孵育，然后进一步加入辣根过氧化物酶标记的二抗继续孵育。用β-actin或组蛋白1抗体作为蛋白质的加样对照。 5RT-PCR检测用Trizol试剂提取细胞中总RNA。使用AMV反转录酶，以oligo（dT）18为引物进行反转录。取一至三微升的cDNA用于扩增，PCR扩增运行30个循环。扩增c-IAP1的引物对为：上游引物：5′-GAATACTCCCTGTGATTAATGGTGCCGTGG-3′，下游引物：5′-TCTCTTGCTTGTAAAGACGTCTGTGTCTTC-3′，扩增产物的长度为230bp;扩增FLIP的上游引物为：5′-CATACTGAGATGCAAGAATT-3′，下游引物为：5′-GCTGAAGTCATCCATGAGGT-3′,扩增产物的长度为875bp;扩增β-actin的上游引物为：5′-TGACGGGGTCACCCACACTGTGCC-3′，下游引物为：5′-CTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATGGAGGG-3′,扩增产物的长度为662bp。用于PCR扩增的条件如下：94℃30秒，6

关键词： erbB2 α-tos 乳腺癌 NFκB信号途径细胞凋亡

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α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中Bcl-2家族蛋白表达的影响

α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中Bcl-2家族蛋白表达的影响

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河北省免疫学会第六次免疫学大会

作者：谢英吕占军段肖翠侯洁韩丽枝王秀芳河北医科大学实验动物学部河北省实验动物重点研究室

目的:检测α-生育酚琥珀酸酯(α-tos)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中Bcl-2家族蛋白表达的影响。方法:体外培养的人乳腺癌细胞株MCF7和MDA-MB-453

关键词： α-tos Bcl-2 人乳腺癌细胞

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