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小鼠α烯醇化酶基因真核表达载体的构建与鉴定

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国际免疫学杂志 2011年第5期34卷 306-308页

作者：贾卫红罗德炎段跃强李志奎王希良第四军医大学西京医院呼吸科西安710032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室北京100071

目的构建小鼠α烯醇化酶（En01）基因的真核表达载体。方法以健康小鼠肾脏组织细胞的eDNA为模板，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增Enol基因编码区的全部序列，克隆至真核细胞表达载体pCDNA3．1^＋中，测序鉴定目的基因用阳离子脂质体转... 详细信息

目的构建小鼠α烯醇化酶（En01）基因的真核表达载体。方法以健康小鼠肾脏组织细胞的eDNA为模板，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增Enol基因编码区的全部序列，克隆至真核细胞表达载体pCDNA3．1^＋中，测序鉴定目的基因用阳离子脂质体转染的方法转染中国仓鼠卵巢CHO细胞。结果PCR扩增的特异性片段长度为1304bp，以此构建重组质粒pCDNA3．1^＋-Enol，测序结果与***中的鼠源Enol基因eDNA序列一致。转染中国仓鼠卵巢细胞后可检测到Enol蛋白的表达。结论构建的真核表达载体pCDNA3．1^＋-Enol可在真核细胞内正确表达，这为进一步的疫苗研究奠定了基础。

关键词： α烯醇化酶基因克隆真核表达载体

抗α烯醇化酶抗体在自身免疫性甲状腺炎中的表达

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中国医科大学学报 2016年第6期45卷 499-502页

作者：张红梅秦娟项阳李静单忠艳滕卫平中国医科大学附属第一医院内分泌科中国医科大学内分泌研究所辽宁省内分泌疾病重点实验室沈阳110001

目的对自身免疫性甲状腺炎(AIT)患者外周血抗α-烯醇化酶抗体(ENO1Ab)表达及其与抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)产生和甲状腺功能(甲功)变化的相关性进行分析。方法 ELISA检测患者抗ENO1总IgG及4种亚型滴度... 详细信息

目的对自身免疫性甲状腺炎(AIT)患者外周血抗α-烯醇化酶抗体(ENO1Ab)表达及其与抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)产生和甲状腺功能(甲功)变化的相关性进行分析。方法 ELISA检测患者抗ENO1总IgG及4种亚型滴度。罗氏E601检测患者甲功和TPOAb、TgAb。结果与非AIT患者相比,无论是甲功正常还是减退的AIT患者,其血清抗ENO1总IgG和IgG1、IgG2、IgG3亚型的滴度均显著升高,而IgG4水平无统计学差异。在AIT患者中,血清抗ENO1总IgG和4种亚型的滴度均未显示与血清游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、促甲状腺素(TSH)、TPOAb、TgAb水平有明显相关,并且甲减组与甲功正常组相比,其滴度及血TPOAb、TgAb水平也无统计学差异。结论在甲状腺自身免疫反应中ENO1Ab的产生显著增加,但可能不是影响甲功的主要抗体。

关键词： α烯醇化酶自身抗体自身免疫甲状腺炎

基于α烯醇化酶的抗血管内皮细胞抗体磁酶免疫化学发光检测方法的建立及初步评价

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基于α烯醇化酶的抗血管内皮细胞抗体磁酶免疫化学发光检测方法的...

作者：宁兴旺湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的建立并初步评价基于α烯醇化酶(alpha enolase, ENO1)的抗内皮细胞抗体(antiendothelial cell antibody, AECA)磁酶免疫化学发光检测方法。方法以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)总RNA为模板合成cDNA;根据ENO1基因序列,设计上下游引物,以cDNA为模板,经多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到目的基因片段ENO1;用T4DNA连接酶连接酶切产物和原核表达载体pET28(a),获得重组表达质粒pET28(a)-ENO1;将pET28(a)-ENO1在BL21(DE3) ***.大肠杆菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化重组ENO1蛋白;采用改良过碘酸钠法耦联纯化的ENO1与辣根过氧化物酶(HRP);用生物素标记抗人AECA抗体(二抗)并包被磁珠,初步建立与ENO1目关的AEC磁酶免疫化学发光检测方法;用建立的方法与传统ELISA法同时检测23例系统性红斑狼疮(SLE)、19例类风湿性关节炎(RA)患者和20例体检健康者样本的AECA光量子值和S/CO值,比较两种方法的阳性检出率。结果重组表达质粒pET28(a)-ENO1中的ENO1测序结果与GeneBank上的序列一致;经纯化获得了高纯度重组人ENO1蛋白,其相对分子质量47,000;初步建立了基于ENO1的AECA磁酶免疫化学发光检测方法;以20例健康体检者光量子值均值的2倍为阳性截断值,特异性为92%,23例SLE和19例RA患者血清中AECA日性率分别为69.56%和52.63%,检出率高于ELISA法。结论利用原核表达系统高效表达了重组人ENO1并初步建立了一种基于ENO1用于检测AECA的磁酶免疫化学发光检测方法。

关键词： α烯醇化酶抗内皮细胞抗体重组质粒原核表达磁酶免疫化学发光

液相色谱-质谱法研究唾液α烯醇化酶在原发性干燥综合征中表达及意义

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液相色谱-质谱法研究唾液α烯醇化酶在原发性干燥综合征中表达及...

2018年中华口腔医学会第十次全国口腔黏膜病学术大会暨...

作者：魏攀陈峰华红北京大学口腔医院

目的:通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法筛选p SS唾液生物标记物,选取其中可能与pSS发病相关的α烯醇化酶(ENO1)进行验证,并初步探讨ENO1与pSS可能的发病机制。方法:在唾液蛋白标记物筛选阶段纳入10例pSS患者和10例非SS受试者。使用乙... 详细信息

目的:通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法筛选p SS唾液生物标记物,选取其中可能与pSS发病相关的α烯醇化酶(ENO1)进行验证,并初步探讨ENO1与pSS可能的发病机制。方法:在唾液蛋白标记物筛选阶段纳入10例pSS患者和10例非SS受试者。使用乙醇沉淀法提取唾液全蛋白,对提取的样本进行一维SDS-PAGE蛋白分离、质谱前样本处理,进行LC-MS/MS分析。通过生物信息数据库检索,发现两组间差异表达蛋白。验证阶段选择差异表达的ENO1作为研究对象,分别使用ELISA和Western Blot法验证其在pSS和对照组唾液中的表达水平,使用RealTime PCR法验证ENO1 mRNA在唾液腺中表达水平,使用免疫组化研究ENO1蛋白在唾液腺中的表达和分布。ENO1基因功能探索阶段,通过对比突变型ENO1质粒转染的大鼠颌下腺上皮细胞SMG-16(SMG-16-ENO1)与空载质粒转染的SMG-16细胞(SMG-16-Ctr)的LC-MS/MS检测结果,发现两组间差异表达蛋白。经蛋白分类、功能和参与的生物过程分析,初步探索ENO1基因在SMG-16细胞中的作用,探索ENO1与pSS发病的关系。结果在唾液蛋白生物标记物筛选阶段,发现在pSS组和对照组出现表达差异的唾液蛋白共21个,其中包括ENO1在内的17个蛋白在pSS组高表达,另外4个蛋白在pSS组低表达。在验证阶段,ELISA和Western Blot结果发现ENO1在pSS患者唾液中表达量显著高于对照组(p酶涉及唾液的跨细胞分泌,紧密连接ZO-1、ZO-2蛋白与旁细胞分泌途径相关,STAT3和STAT6与唾液腺上皮细胞凋亡及免疫应答有关。结论 1.本研究通过LC-MS/MS的方法发现了一组pSS唾液蛋白生物标记物,共包括21个唾液蛋白。2.使用ELISA和Western Blot的方法,在新受试者中证实pSS唾液ENO1表达水平显著高于对照组,并首次在pSS患者唾液腺组织中发现ENO1基因高表达。通过免疫组化方法验证pSS患者唾液腺高表达的ENO1蛋白分布于腺泡和导管上皮细胞。根据以上结果推测pSS患者唾液ENO1可能直接来源于唾液腺,并提示ENO1可能与pSS发病机制相关。

关键词：原发性干燥综合征唾液诊断 α烯醇化酶

来源： cnki会议评论

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抗ENO1抗体与狼疮性视网膜病变的相关性

北京大学学报（医学版） 2022年第6期54卷 1099-1105页

作者：张琳崎赵静王红彦王宗沂李英妮汤稷旸李思莹曲进锋赵明威北京大学人民医院眼科、眼视光中心眼病与视光医学研究所视网膜脉络膜疾病诊治研究北京市重点实验室北京大学医学部眼视光学院北京100044 北京大学人民医院风湿免疫科北京100044

目的:研究抗α烯醇化酶抗体[抗ENO1(enolase 1)抗体]水平与狼疮性视网膜病变及系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)活动性的相关性。方法:选择2017年4月至2022年5月北京大学人民医院风湿免疫科住院的活动性SLE患者,分为SL... 详细信息

目的:研究抗α烯醇化酶抗体[抗ENO1(enolase 1)抗体]水平与狼疮性视网膜病变及系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)活动性的相关性。方法:选择2017年4月至2022年5月北京大学人民医院风湿免疫科住院的活动性SLE患者,分为SLE合并和不合并狼疮性视网膜病变两组,同时以年龄匹配且不合并视网膜病变的健康志愿者作为阴性对照组,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组血清中抗ENO1抗体水平和阳性率,同时收集前两组SLE患者活动性相关的临床特征和实验室结果,分析抗ENO1抗体水平与其他SLE临床资料与实验室指标之间的相关性。结果:SLE合并狼疮性视网膜病变患者眼底出现了多种视网膜病变,占比排名前三的是视网膜出血(14/32,43.75%)、棉絮斑(8/32,25.00%)和视网膜静脉阻塞(3/32,9.38%)。在32例SLE合并狼疮性视网膜病变患者中,有13例(40.63%)出现了两种及以上的视网膜病变。SLE合并狼疮性视网膜病变患者的血清抗ENO1抗体水平和阳性率显著高于不合并狼疮性视网膜病变组(P<0.05),狼疮性视网膜病变患者具有更高的SLE疾病活动度评分(P<0.001)。将SLE患者分为抗ENO1抗体阳性和阴性两组进行研究发现,在临床表现上,抗ENO1抗体阳性与发热和尿潜血有关的可能性大(P=0.011,P=0.042);在实验室指标上,与抗ENO1抗体阴性的SLE患者相比,抗ENO1抗体阳性的SLE患者具有更高的红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和血小板计数(blood platelet count,PLT,P<0.01),此外,抗ENO1抗体阳性患者还具有更高的免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA,P<0.05)。结论:合并狼疮性视网膜病变的SLE患者血清中抗ENO1抗体的水平和阳性率明显升高,且具有更高的疾病活动性。

关键词：系统性红斑狼疮狼疮性视网膜病变自身抗体 α烯醇化酶抗ENO1抗体

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蛋白印迹法检测寿胎丸对反复自然流产模型小鼠子宫蜕膜的蛋白表达

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湖南中医药大学学报 2013年第3期33卷 12-16页

作者：雷磊李慧芳谭展望罗蕾卢丽丽湖南中医药大学分子病理实验室湖南长沙410208 河北省妇幼保健中心妇女保健科河北石家庄050031

目的采用蛋白印迹法验证寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜影响的差异蛋白质。方法建立小鼠复发性流产模型,寿胎丸干预后,采用蛋白印迹方法检测差异蛋白质热休克蛋白27(HSP27)、α烯醇化酶(α-enolase)、转铁蛋白(Transferrin)、膜联蛋白A2(An... 详细信息

目的采用蛋白印迹法验证寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜影响的差异蛋白质。方法建立小鼠复发性流产模型,寿胎丸干预后,采用蛋白印迹方法检测差异蛋白质热休克蛋白27(HSP27)、α烯醇化酶(α-enolase)、转铁蛋白(Transferrin)、膜联蛋白A2(Annexin A2)蛋白表达。结果小鼠模型组与正常组相比,蜕膜HSP27、α-enolase表达明显升高,Transferrin、Annexin A2表达明显降低,差异有显著统计学意义(P0.05)。结论 HSP27、α-enolase、Transferrin、Annexin A2的蛋白印迹验证结果与蛋白质组学分析结果一致,从一定程度上证明了蛋白质组学实验方法的稳定性及其结果的准确性;寿胎丸通过下调复发性流产小鼠蜕膜组织HSP27、α-enolase蛋白的表达,同时上调Transferrin、Annexin A2蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一。

关键词：寿胎丸复发性流产蜕膜蛋白印迹热休克蛋白27 膜联蛋白A2 α烯醇化酶转铁蛋白