检索结果-南通市图书馆

作者：徐菲安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景作为p53家族的成员,p63根据其N端转录激活区不同分为TA型和ΔN型,根据转录本3’端的选择性剪切产生不同的C端,至少包含6种亚型TAp63a,TAp63β,TAp63γ,Δnp63a,Δnp63β,Δnp63γ[2-4]。p63是诱导基底细胞分化的重要调控基因,... 详细信息

研究背景作为p53家族的成员,p63根据其N端转录激活区不同分为TA型和ΔN型,根据转录本3’端的选择性剪切产生不同的C端,至少包含6种亚型TAp63a,TAp63β,TAp63γ,Δnp63a,Δnp63β,Δnp63γ[2-4]。p63是诱导基底细胞分化的重要调控基因,并且特别是在上皮分层和终末分化过程中。本课题组前期研究结果发现,ΔΝp63α是宫颈上皮组织中主要的表达亚型,在低分化的宫颈鳞癌中表达量低。LncRNA是一类大于200个核苷酸的非编码RNA[24]。因与肿瘤的紧密关联而备受瞩目。LncRNAs可以在各种水平上调节基因表达,包括染色质修饰,转录和转录后调控。LncRNA的异常表达会引起癌症的发生和进展,包括乳腺癌,肺腺癌和宫颈癌。本研究的目的是探讨子宫颈癌中ΔNP63α的LncRNA表达谱。通过分析这些筛选出mRNA和LncRNA,来构建ΔNP63α调控上皮增殖和分化的调控网络。方法通过慢病毒载体的构建和包装体系,构建了ΔNP63α稳定表达的SiHa细胞系及其对照细胞,分别命名为SiHa/ΔNP63α和SiHa/con。通过对SiHa/ΔNP63α细胞系及其对照细胞进行芯片测序,检测出有明显表达差异的mRNA和LncRNA。通过qRT-PCR在SiHa/ΔNP63α细胞系和瞬时沉默ΔNP63α的ME-180的细胞中多次验证候选序列,筛选出与ΔNP63α有明显相关性的mRNA和LncRNA,并对其进行分析。结果1.通过ΔNP63α的LncRNA表达谱分析和qRT-PCR验证,我们筛选出9个与ΔNP63α具有相关性的LncRNA,包括ENST00000447565（Lnc-LIF-AS）,TCONS00012062,ENST00000570197,ENST00000563036,TCONS00011964,ENST00000439517,TCONS00004869,TCONS00014003,ENST00000469965。2.对这些LncRNA的UCSC分析之后,我们发现了由Lnc-LIF-AS和ΔNP63α共同调节的靶基因白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）。ΔNP63α可在转录水平直接抑制LIF的表达,并通过抑制Lnc-LIF-AS的表达间接抑制LIF的表达。3.Lnc-LIF-AS通过与LIF mRNA的3’端的重叠区,吸附可能降解LIF的非编码RNA,促进LIF基因的表达。结论1.ΔNP63α通过下调Lnc-LIF-AS来间接抑制LIF的表达;2.ΔNP63α通过直接结合作用抑制LIF的转录,3.Lnc-LIF-AS与LIF mRNA的3’端UTR区重叠,吸附可能降解LIF的非编码RNA,促进LIF基因的表达。

关键词：子宫颈癌 ΔNP63α LncRNA 白血病抑制因子

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小干扰RNA抑制ΔNP63α表达对人食管鳞癌细胞生物学特性的影响

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第二军医大学学报 2013年第8期34卷 813-818页

作者：李白翎杜大海张冠鑫徐志云第二军医大学长海医院胸心外科上海 200433 第二军医大学长海医院实验诊断科上海 200433

目的通过腺相关病毒介导的小干扰RNA(siRNA)抑制人食管鳞癌细胞Eca109中ΔNP63α的表达,观察其对食管鳞癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对ΔNP63α的siRNA重组腺相关病毒AAV-ΔNP63αshRNA并感染Eca109细胞。同... 详细信息

目的通过腺相关病毒介导的小干扰RNA(siRNA)抑制人食管鳞癌细胞Eca109中ΔNP63α的表达,观察其对食管鳞癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对ΔNP63α的siRNA重组腺相关病毒AAV-ΔNP63αshRNA并感染Eca109细胞。同时以感染空腺相关病毒AAV-Null的细胞及不加腺相关病毒的细胞分别作为对照组和空白对照组,观察siRNA干扰ΔNP63α表达在体外及体内对Eca109细胞生长、增殖、致瘤及凋亡的影响。结果与对照组和空白对照组比较,Eca109细胞感染AAV-ΔNP63αshRNA后ΔNP63α蛋白表达下降(P均ΔNP63α的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

关键词： ΔNP63α 食管肿瘤鳞状细胞肿瘤 Eca109细胞株腺相关病毒 RNA干扰

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ΔNP63α转录激活SOD2以及在细胞凋亡中的作用

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兰州大学学报（医学版） 2018年第4期44卷 9-15页

作者：赵志强曾朋罗洪肖智雄张渝君王阳四川大学生命科学学院生长代谢衰老中心四川成都610064

目的研究p53家族成员ΔNP63α转录激活锰超氧化物歧化酶(SOD2)在细胞凋亡中的抑制作用。方法在人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A中过表达ΔNP63α,检测SOD2 mRNA和蛋白水平的变化情况;在悬浮条件下检测过表达ΔNP63α的MCF-10A细胞中SOD2、... 详细信息

目的研究p53家族成员ΔNP63α转录激活锰超氧化物歧化酶(SOD2)在细胞凋亡中的抑制作用。方法在人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A中过表达ΔNP63α,检测SOD2 mRNA和蛋白水平的变化情况;在悬浮条件下检测过表达ΔNP63α的MCF-10A细胞中SOD2、活性氧小分子(ROS)和细胞凋亡的变化情况。结果在人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A中过表达ΔNP63α后可以转录激活SOD2;ΔNP63α通过转录激活SOD2来清除ROS进而抑制细胞凋亡。结论ΔNP63α通过转录激活SOD2并抑制细胞凋亡,提示这可能是其参与肿瘤发生的机制之一。

关键词： ΔNP63α 锰超氧化物歧化酶活性氧小分子人永生化乳腺上皮细胞细胞凋亡

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Reduced expression of △np63α in cervical squamous cell carcinoma

Reduced expression of △Np63α in cervical squamous cell car...

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代...

作者： Ying Zhou MD~1,Qianqian Xu BSc~1,Bin Ling MD~1,Weihua Xiao MD~2 1.Department of Obstetrics and Gynecology,Anhui Provincial Hospital Affiliated with Anhui Medical University,Hefei,230001,China 2.Hcfci National Laboratory for Physical Sciences at the Microscale and the School of Life Sciences,University of Science & Technology of China,230027,Hcfci,China.

Purpose:As a member of the p53 family,p63 is considered to be an important differentiation regulation transcriptional factor,but the roles of p63 in many epithelial tumourigenesis and metastasis processes are still not clear,this study was designed to investigate the expression of p63 and its isoform in normal tissues and squamous cell cancer tissues of uterine cervix,and its significance in cancer cell differentiation. Methods:The expression of p63 was assessed in cervical tissue and cell lines by immunohistochemistry, RT-PCR and Western blotting.The relationships between p63 protein,various clinico-pathological features, and the differentiation marker involucrin were analyzed.Results:ΔNP63αis the predominant isoform expressed in cervical epithelial tissues,and it is decreased in moderately or poorly differentiated cervical squamous carcinoma,as well as in the HeLa,SiHa and C33A cervical cancer cell lines.The expression level ofΔNP63αwas positively correlated with that of involucrin in cervical squamous cancer tissue,and the expression ofΔNP63αis decreased with the degree of tumour invasion.Conclusion:The decrease ofΔNP63αin cervical squamous cell cancer appears to be associated with the tumour progression,andΔNP63αmay be a sensitive marker for cervical squamous cancer differentiation.

关键词： cervical squamous cancer ΔNP63α cell differentiation

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TP63基因在重型痤疮中的表达及对痤疮相关表型的影响

TP63基因在重型痤疮中的表达及对痤疮相关表型的影响

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作者：曾彦超昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]明确TP63基因不同亚型在重型痤疮皮损及健康对照组织中的表达差异,并利用构建的体外细胞模型探讨差异表达的TP63基因亚型对细胞增殖、炎症因子释放等痤疮相关表型的影响及其可能的作用机制,探讨TP63基因在重型痤疮发生发展中的作... 详细信息

[目的]明确TP63基因不同亚型在重型痤疮皮损及健康对照组织中的表达差异,并利用构建的体外细胞模型探讨差异表达的TP63基因亚型对细胞增殖、炎症因子释放等痤疮相关表型的影响及其可能的作用机制,探讨TP63基因在重型痤疮发生发展中的作用,为疾病预警预测和防治应用奠定理论基础。[方法]利用全转录组测序数据分析重型痤疮皮损组织及健康对照皮肤组织中TP63基因不同转录本的表达差异。用qRT-PCR检测HaCaT细胞株中TP63亚型的本底表达。利用慢病毒转染构建稳定过表达ΔNP63α及过表达对照、敲减TP63及敲减对照的细胞株（OE-ΔNP63α株和OE-NC株、sh-TP63株和sh-NC株）。用qRT-PCR和Western blot检测细胞株的敲减和过表达效率。用CCK8法检测各细胞株增殖活性。用流式细胞术检测各细胞株凋亡和细胞周期的变化。用qRT-PCR检测各细胞株中炎症因子IL-6、IL-8的表达变化和痤疮丙酸杆菌刺激各细胞株后炎症因子的表达变化。利用全转录组测序数据筛选TP63敲减细胞株差异表达的基因,结合前期重型痤疮皮损转录组测序数据筛选表达变化趋势一致的差异基因,通过GO、KEGG pathway富集差异基因涉及的功能及信号通路,探讨TP63影响痤疮相关表型的机制。[结果]1.重型痤疮皮损转录组测序共检测到TP63基因亚型的12个转录本是编码蛋白的mRNA。12个mRNA转录本中10个是已知的亚型,其中Anp63α亚型在重型痤疮组中的表达较对照组减少,且差异具有统计学意义（FC=0.48,P＜0.05）,Anp63β亚型的表达差异在重型痤疮组中有一定下调（FC=0.66）,但差异无统计学意义。其余转录本在多个皮肤组织样本中的表达量极低。2.qRT-PCR结果显示在HaCaT细胞株中ΔNP63α亚型表达高,TAp63低表达;CCK8结果显示与过表达对照组相比,ΔNP63α过表达显著抑制了 HaCaT细胞增殖活性（P＜0.05）,而与敲减对照组相比,TP63敲减显著促进HaCaT细胞的增殖活性（P＜0.05）;细胞周期检测结果显示,与过表达对照组相比,ΔNP63α过表达组处于S期的细胞比例明显降低（P＜0.05）,G0/G1和G2/M期细胞在两组细胞间无显著差异;与敲减对照组相比,TP63敲减对细胞周期的影响没有明显差异;检测细胞的凋亡情况,结果显示,与过表达对照组细胞相比,Anp63α过表达呈现促进HaCaT细胞凋亡趋势;而与敲减对照组相比,TP63敲减呈现抑制凋亡的趋势,细胞的早凋亡和总凋亡水平具有相同的趋势,但差异无统计学意义。3.痤疮丙酸杆菌刺激HaCaT细胞株后可以显著上调细胞中IL-6和IL-8的mRNA表达水平;与敲减对照组相比,痤疮丙酸杆菌刺激后,TP63敲减组IL-6 mRNA的表达显著上调;与过表达对照组相比,Anp63α过表达组中IL-8 mRNA的表达显著下调。4.在HaCaT细胞转录组测序结果中显示TP63敲减及敲减对照组中共有844个基因有显著差异,其中有600个基因差异表达显著上调（FC＞1.64,P＜0.05）,244个差异基因表达显著下调（FC＜0.58,P＜0.05）;TP63敲减细胞株及重型痤疮皮损转录组测序数据得到差异表达趋势一致的基因58个,其中均上调基因47个,均下调基因11个;GO分析结果显示富集到IL-6生物合成过程的调控、白细胞迁移等过程。KEGG pathway分析结果显示富集到补体和凝血级联信号通路、Toll样受体信号通路等。[结论]1.TP63基因的亚型ΔNP63α在重型痤疮皮损中表达下调。2.下调的ΔNP63α可促进体外角质形成细胞的增殖活性。3.ΔNP63α亚型可影响炎症因子IL-6、IL-8的表达。4.下调的ΔNP63α亚型可能经由补体和凝血级联信号通路影响细胞增殖活性,进而参与重型痤疮中毛囊漏斗部角质形成细胞过度增殖。5.下调的ΔNP63α亚型可能经由Toll样受体信号通路影响炎症因子释放,进而参与重型痤疮中的炎症反应过程。

关键词：重型痤疮 ΔNP63α 角质形成细胞增殖炎症因子

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