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清胆滋肾方治疗大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的实验研究

清胆滋肾方治疗大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的实验研究

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作者：骆黎静湖北中医学院

学位级别：硕士

妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是以妊娠期发生皮肤瘙痒、黄疸为主要症状，伴胆酸、肝酶等生化异常，产后各种症状迅速消失为特征的妊娠期并发症。该病主要对胎儿造成较大的危害，易引起早产、养水... 详细信息

妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是以妊娠期发生皮肤瘙痒、黄疸为主要症状，伴胆酸、肝酶等生化异常，产后各种症状迅速消失为特征的妊娠期并发症。该病主要对胎儿造成较大的危害，易引起早产、养水胎粪污染、胎儿宫内窘迫、胎死宫内等不良预后，现在已被列入高危妊娠。目前，ICP的临床治疗以药物治疗为主，西医以熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)、消胆胺，苯巴比妥，地塞米松等为主要治疗药物。这些药物治疗虽可取得缓解症状作用，但停药后症状反复，若临床长期使用均有不良反应，且对胎儿的毒性作用较大。中医药在临床治疗ICP方面有其独到调节治疗作用，且至今未见明显不良反应报道。清胆滋肾方是在临床名老中医经验用方基础上自拟而成，本课题试图从血生化指标、胎鼠成活率和肝组织病理学改变、肝细胞间黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1，ICAM-1)和胎盘雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达、胎盘细胞凋亡及凋亡调控基因Bax、Bcl-2的表达等方面来研究清胆滋肾汤对ICP的治疗作用及其可能的作用机制。第一部分清胆滋肾汤对肝内胆汁淤积孕鼠血清生化指标、胎鼠成活率及肝脏组织病理学改变的影响 [目的]探讨ICP大鼠血清生化指标、胎鼠成活率及肝脏组织病理学改变的影响，为清胆滋肾汤治疗ICP提供生化和病理学实验依据。 [方法]采用苯甲酸雌二醇(Estradioli Benzoas，EB)来诱导大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的模型，设立正常组、模型组、清胆滋肾汤高剂量组、中剂量组、低剂量组和UDCA组六个组，造模的同时连续给药，中药治疗组灌胃至临产，西药治疗组连续灌胃5天。各组均于见阴道血性分泌物时终止妊娠，摘眼球法取血，断头处死后留取2块新鲜肝脏和1块胎盘组织，待做光镜和电镜标本。剖宫取出胎鼠，观察胎鼠成活率。运用全自动生化分析仪测定各组孕鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、总胆红素(total bilirubin，TBIL)、总胆酸(total bile acid，TBA)值。 [结果]模型组的各项生化指标水平升高，与正常组相比有极显著性差异(P＜0.01)，经治疗后，高剂量组的AST、ALP水平无显著改善(P＞0.05)，其ALT、TBIL、TBA水平则显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。其它各治疗组相关生化指标均有极显著性下降(P＜0.01)。在对ALT、AST、ALP、TBIL的改善上，中剂量组疗效最好，与正常组相比无统计学差异(P＞0.05)，中剂量组ALP、TBIL的水平显著低于UDCA组(P＜0.05)，而中剂量组ALT、AST的水平与UDCA组相比无显著差异(P＞0.05);在对TBA的改善上，UDCA组效果最好，与正常组相比无显著差别(P＞0.05)，中药治疗组中中剂量组效果最好，与UDCA组相比无统计学差异(P＞0.05)，与正常组相比亦无明显差异(P＞0.05)。胎鼠成活率结果显示：模型组的胎鼠成活率降低，与正常组相比有极显著性差异(P＜0.01)，除高剂量组外，各治疗组均可非常显著地提高ICP孕鼠的胎鼠成活率(P＜0.01)，且与正常组相比无统计学差异(P＞0.05)，尤以中剂量组效果最好，但与UDCA组相比无显著差异(P＞0.05)。肝脏组织病理学研究显示：光镜下可见正常组肝细胞结构清晰，无变性与坏死。模型组肝细胞肿胀，部分呈空泡样变性，肝窦间隙狭窄明显，少数肝毛细胆管扩张，内有胆拴形成。清胆滋肾汤高剂量组孕鼠肝脏光镜下可见肝细胞结构较紊乱，肝窦间隙较狭窄，但未见明显胆栓形成。中、低剂量组和UDCA组光镜下观察与正常组无显著差异。电镜下可见，正常组肝细胞线粒体嵴正常，毛细胆管不扩张，无胆盐沉积，超微结构无明显改变;模型组部分毛细胆管扩张，微绒毛脱落，内见电子密度高的无定形物(可能为胆汁淤积)。 [结论]清胆滋肾汤可能通过改善ICP大鼠的血清生化指标，影响其肝脏病理学形态，从而提高胎鼠的成活率。提示该方药具有良好的治病安胎之功效。第二部分清胆滋肾汤对肝内胆汁淤积孕鼠肝脏ICAM-1及胎盘ER表达的影响 [目的]通过检测各组孕鼠肝脏ICAM-1及其胎盘ER的表达，来探讨清胆滋肾汤的疗效及其可能的作用机理。 [方法]孕鼠肝组织和胎盘组织石蜡切片采用免疫组化SABC法分别检测ICAM-Ⅰ和ER的表达。 [结果](1)模型组ICAM-1的表达增强，与正常组相比较有极显著性差异(P＜0.01);各中药组ICA

关键词： @清胆滋肾汤胆汁淤积,肝内细胞间黏附分子受体,雌激素凋亡

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