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CR16在睾丸组织中的表达及其与无精子症发病相关性的初步探讨

CR16在睾丸组织中的表达及其与无精子症发病相关性的初步探讨

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作者：温子娜华中科技大学

学位级别：硕士

实验一CR16在正常SD大鼠睾丸组织中的表达目的检测糖皮质激素区域表达基因16 (Corticosteroids and regional expression 16,CR16)在正常SD大鼠睾丸组织中的表达,为后续研究CR16在人类生殖系统的表达提供前期动物实验及方法学准备。 ... 详细信息

实验一CR16在正常SD大鼠睾丸组织中的表达目的检测糖皮质激素区域表达基因16 (Corticosteroids and regional expression 16,CR16)在正常SD大鼠睾丸组织中的表达,为后续研究CR16在人类生殖系统的表达提供前期动物实验及方法学准备。方法采用免疫组织化学法检测CR16蛋白在5只正常SD大鼠睾丸组织中的表达情况。结果CR16蛋白表达于大鼠睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞、支持细胞与生精细胞连接区(Sertoli cell-spermatid junctions, SspJs)。结论CR16在大鼠睾丸组织中定位于支持细胞及SspJs,提示CR16可能参与精子发生过程。实验二CR16在无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达目的研究CR16在非梗阻性无精子症患者、梗阻性无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达,探讨CR16与无精子症发病的相关性。方法采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptpolymerase chain reaction,RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRNA在6例非梗阻性无精子症患者、23例梗阻性无精子症患者和6例正常男性睾丸组织中的表达情况。结果CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞胞浆、胞膜及SspJs,非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16蛋白的表达明显弱于梗阻性无精症患者及正常男性。非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16 mRNA的表达(0.640±0.021)显著弱于正常男性(0.952±0.036)(P16 mRNA的表达(0.953±0.036)与正常男性睾丸组织中CR16 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低,提示CR16 实验三CR16在无精子症发病机制中的初步探讨目的研究神经型威奥综合征蛋白(neural Wiscott-Aldrich syndrome protein,N-WASP)在非梗阻性无精子症患者及正常男性睾丸组织中的定位及定量表达,探讨CR16与N-WASP在人睾丸组织中的相关性及其在精子发生中的作用。方法采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测N-WASP mRNA在6例非梗阻性无精子症患者和6例正常男性睾丸组织中的定位及定量表达;用免疫荧光双标记法及激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy, LSCM)观察CR16与N-WASP在非梗阻性无精子症患者和正常男性睾丸组织中的共表达情况。结果N-WASP蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞胞浆、胞膜及SspJs,非梗阻性无精子症患者睾丸组织中N-WASP蛋白的表达明显弱于正常男性。非梗阻性无精子症患者睾丸组织中N-WASP mRNA的表达(0.645±0.025)显著弱于正常男性(0.960±0.031)(P16 mRNA与N-WASP mRNA在非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的相对表达量约为1:1,二者在正常男性睾丸组织中的mRNA相对表达量也约为1:1。免疫荧光双标结果显示,CR16与N-WASP在睾丸SspJs处的表达相叠加,说明二者是以复合物的形式存在于人类睾丸组织中。结论非梗阻性无精子症患者睾丸组织中CR16与N-WASP表达水平均显著降低,CR16与N-WASP在SspJs处共表达,提示二者可能以N-WASP-CR16复合物的形式发挥协同作用,可能参与非梗阻性无精子症的发病。

关键词：糖皮质激素区域表达基因16 SD大鼠睾丸支持细胞支持细胞与生精细胞连接区 =糖皮质激素区域表达基因16 非梗阻性无精子症梗阻性无精子症神经型威奥综合征蛋白无精子症 N-WASP-CR16复合物

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