检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

用ssrna探针检测水中甲型肝炎病毒和其它肠道病毒

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国外医学(微生物学分册) 1991年第6期 276-277页

作者：李洁

作者用ssrna探针对水中甲型肝炎病毒(HAV)和其他肠道病毒进行检测。其先分别将含有HAV和柯萨基B3病毒(CB3)基因组5’端起始部分约一个Kb的cDNA克隆,再分别亚克隆到pSPT18和pCBⅢ51载体上。这两个载体均含有T7和SP6两个启动子,cDNA片段... 详细信息

作者用ssrna探针对水中甲型肝炎病毒(HAV)和其他肠道病毒进行检测。其先分别将含有HAV和柯萨基B3病毒(CB3)基因组5’端起始部分约一个Kb的cDNA克隆,再分别亚克隆到pSPT18和pCBⅢ51载体上。这两个载体均含有T7和SP6两个启动子,cDNA片段就插在T7和SP6中间。在体外T7在相应T7RNA多聚酶作用下转录成RNA,能分别同正股HAV或CB3基因组RNA杂交。由于

关键词：肠道病毒 CB ssrna HAV 甲型肝炎病毒

正义ssrna病毒侵染寄主植物的病生理学研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

电子显微学报 2006年第S1期 229-230页

作者：洪健周雪平浙江大学分析测试中心浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029

正义ssrna病毒侵染寄主植物的病生理学研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

电子显微学报 2006年第B8期25卷 215-216页

作者：洪健周雪平浙江大学生物技术研究所

马铃薯种苗复合感染病毒多重RT-PCR同步快速检测

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物病理学报 2005年第2期35卷 109-115页

作者：王中康夏玉先袁青谭万忠殷幼平重庆大学基因工程研究中心西南农业大学植保学院重庆400716

基于马铃薯病毒ssrna的快速制备方法,根据马铃薯病毒CP基因序列设计PVX、PVS、PVY和PLRV特异性引物对、P1基因序列设计PVA特异性引物对,建立了多重RT-PCR快速检测体系,可以同步检出复合侵染马铃薯种苗主要病毒,灵敏度比传统的ELISA至少... 详细信息

基于马铃薯病毒ssrna的快速制备方法,根据马铃薯病毒CP基因序列设计PVX、PVS、PVY和PLRV特异性引物对、P1基因序列设计PVA特异性引物对,建立了多重RT-PCR快速检测体系,可以同步检出复合侵染马铃薯种苗主要病毒,灵敏度比传统的ELISA至少高100倍.结合生物活性稳定剂研制的固相化检测试剂盒,已用于四川和重庆等省区的15个县市田间与苗圃248个马铃薯显症或无症样品的实际检测,表明四川和重庆地区2～3种马铃薯病毒往往复合侵染(PVX、PVA和PVS三种病毒复合侵染或PLRV和PVY二种病毒复合侵染).

关键词：多重RT-PCR 检测马铃薯种苗 ssrna

维普期刊数据库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究

中国人兽共患病学报 2014年第12期30卷 1223-1226页

作者：李瑞芳管志玉付玉荣伊正君山东省潍坊医学院病原生物学教研室潍坊261053 山东省潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室潍坊261031

目的将TLR7激活基序ssrna加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssrna,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬... 详细信息

目的将TLR7激活基序ssrna加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssrna,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬率;无菌TritonX-100裂解细胞,罗氏培养基培养计数活细菌;电镜观察细胞内自噬小体;ELISA检测细胞上清中IL-12、TNF-α与IL-4的含量。结果感染3h后RAW264.7细胞吞噬率最高(P>0.05);处理3h后电镜观察,ssrna组细胞状态明显好于对照组;36h后ssrna组IL-12(Pssrna组低于对照组(Pssrna可以用于治疗结核分枝杆菌感染。

关键词： TLR7 ssrna 小鼠巨噬细胞结核分枝杆菌

维普期刊数据库

ART-PCR方法的建立及扩增低拷贝RNA的初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药物生物技术 2013年第6期20卷 475-479页

作者：李铁军周宋峰陆毅祥朱远源江苏莱芙时代生物科技有限公司百奥迈科生物技术有限公司南通大学小核酸技术与应用研究所中国药科大学

建立依赖反义RNA和核糖核酸酶T1(RNase T1)的PCR方法,称为ART-PCR,用于扩增高拷贝RNA和复杂RNA样本中的低拷贝RNA。首先,设计待检低拷贝RNA的反义RNA分子,在高拷贝和复杂RNA样本中与待检低拷贝RNA退火后用RNase T1消化,反转录后用PCR扩... 详细信息

建立依赖反义RNA和核糖核酸酶T1(RNase T1)的PCR方法,称为ART-PCR,用于扩增高拷贝RNA和复杂RNA样本中的低拷贝RNA。首先,设计待检低拷贝RNA的反义RNA分子,在高拷贝和复杂RNA样本中与待检低拷贝RNA退火后用RNase T1消化,反转录后用PCR扩增。进一步,用ARPE-19细胞中低表达基因干扰素γ(IFNG)作为实例,用ART-PCR和常规实时定量PCR(RT-qPCR)检测。结果显示,用ART-PCR可以很好地消除常规RT-qPCR中低拷贝RNA的PCR抑制效应。研究结果初步表明ART-PCR可以作为检测低拷贝RNA的理想工具,这对于RNA功能的基础研究以及基于多重PCR的临床复合病毒感染的基因诊断方法的优化、推广具有重要的参考价值。

关键词：依赖反义RNA的核糖核酸酶T1 PCR 低拷贝高拷贝基因 RNase T1 dsRNA ssrna 病毒

靶向Pim-3的双功能载体对小鼠黑色素瘤的治疗作用及机制研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

靶向Pim-3的双功能载体对小鼠黑色素瘤的治疗作用及机制研究

作者：刘静山东大学

学位级别：硕士

目的黑色素瘤因其恶性程度极高而成为皮肤恶性肿瘤致死的主要原因之一,高发的侵袭和转移是其最为显著的特征和影响患者生存的首要因素。黑色素瘤的发病主要与紫外线的过度照射、环境因素、遗传因素、外界刺激等因素相关,目前治疗的主要... 详细信息

目的黑色素瘤因其恶性程度极高而成为皮肤恶性肿瘤致死的主要原因之一,高发的侵袭和转移是其最为显著的特征和影响患者生存的首要因素。黑色素瘤的发病主要与紫外线的过度照射、环境因素、遗传因素、外界刺激等因素相关,目前治疗的主要方式包括手术、化疗、放疗和药物治疗,但预后较差,复发率高,病死率高。肿瘤细胞的无限生长和机体抗肿瘤免疫应答之间的相互作用是影响肿瘤发生发展的主要原因,为了有效激活机体抗肿瘤免疫应答,肿瘤免疫治疗得到了广泛的关注和迅速发展。研究发现,黑色素瘤免疫原性高,通过对其进行免疫治疗,增强机体抗肿瘤免疫应答,能有效的抑制肿瘤的生长,这也使得黑色素瘤的免疫治疗得到迅速的发展。Pim-3作为一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在多种癌症中异常表达增加,主要通过磷酸化特异性底物使其失去活性,导致细胞凋亡减少、增殖增多,最终调控肿瘤的发生发展,因此Pim-3可能成为抗肿瘤治疗的一个新靶点。基于以上背景,我们尝试一方面利用具有免疫刺激作用的单链RNA(ssrna)序列激活机体TLR-7受体,进而诱导细胞因子的产生,活化免疫效应细胞,最终刺激机体抗肿瘤免疫应答,引起机体免疫系统对癌细胞的自主杀伤及清除;另一方面我们通过RNA干扰技术特异性沉默原癌基因Pim-3的表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,从肿瘤细胞本身出发抑制肿瘤的生长。结合以上两方面的设想,我们构建了靶向沉默Pim-3的双功能shRNA表达载体,该载体既能通过其包含的ssrna片段活化TLR7受体激发机体抗肿瘤免疫应答,又能通过shRNA特异性沉默原癌基因Pim-3的表达,促进肿瘤细胞的凋亡。本研究旨在观察此双功能表达载体对小鼠黑色素瘤的治疗作用,并探讨其可能的分子机制。方法1.以小鼠的黑色素瘤细胞系B16为主要研究对象,首先通过Western-blot检测Pim-3在B16细胞、黑色素瘤组织及正常小鼠皮肤组织中的表达。2.用脂质体将 pSIREN、ssrna、Pim-3-shRNA、ssrna-Pim-3-shRNA 质粒转染到B16细胞中,通过qPCR和Western-blot等方法检测双功能载体对Pim-3的沉默效果;通过ELISA检测转染后B16细胞中I型干扰素的分泌,以确定TLR信号通路的活化。3.用脂质体转染 pSIREN、ssrna、Pim-3-shRNA、ssrna-Pim-3-shRNA 质粒到B16细胞中,24h后,通过AnnexinV/PI染色和TUNEL免疫荧光技术检测B16 细胞的凋亡;通过 Western-blot 等方法检测 Bad、p-Bad、BCL-2、BCL-XL等凋亡相关分子的表达。4.通过划痕、transwell实验检测B16细胞转移和侵袭的变化;通过qPCR和Western-blot技术检测EMT相关指标的变化。5.通过Western-blot检测STAT3、MAPK及NF-κB信号通路的活化情况,通过免疫共沉淀技术(Co-IP)检测Pim-3与STAT3之间的结合,以探讨Pim-3调控B16细胞侵袭转移的机制。6.对C57BL/6小鼠进行B16细胞皮下荷瘤,待肿瘤长出后给予双功能载体治疗,观察肿瘤生长情况,脾脏和肿瘤组织中各淋巴细胞的比例和活化情况。7.给 B16 细胞转染 pSIREN、ssrna、Pim-3-shRNA、ssrna-Pim-3-shRNA 质粒后,通过尾静脉注射转染不同质粒的B16细胞,建立黑色素瘤肺转移模型,观察不同载体治疗对B16黑色素瘤细胞肺转移的影响。8.用清除抗体分别对C57BL/6小鼠NK、CD8+T和pDC细胞进行清除,再对小鼠进行B16细胞皮下荷瘤,观察在双功能载体介导的抗肿瘤作用中,这三种细胞所发挥的作用。9.进一步观察pDC细胞清除后,双功能载体的抗肿瘤作用及NK、CD8+T细胞的活化情况。结果1.Pim-3在正常小鼠皮肤中的表达极低,而在黑色素瘤细胞系中明显高表达。2.双功能载体能有效沉默黑色素瘤细胞中Pim-3的表达,刺激Ⅰ型干扰素的分泌,引起TLR信号通路的活化。3.用 Pim-3-shRNA、ssrna-Pim-3-shRNA 载体转染 B16 细胞后,B16 细胞的凋亡明显增加。凋亡相关分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表达明显下调。4.Pim-3-shRNA,尤其是ssrna-Pim-3-shRNA表达质粒,能明显的抑制B16的转移侵袭;进一步研究发现Pim-3的沉默主要通过抑制肿瘤细胞EMT过程的发生进而抑制肿瘤细胞的转移侵袭过程。5.ssrna 和 ssrna-Pim-3-shRNA 促进 NF-κB 信号通路的活化,而 Pim-3-shRNA和ssrna-Pim-3-shRNA沉默Pim-3抑制STAT3的磷酸化,且Co-IP结果显示Pim-3和STAT3之间有明显的结合。进一步研究发现沉默Pim-3可抑制STAT3的磷酸化,进而减弱EMT过程,抑制肿瘤的转移侵袭。6.双功能载体可

关键词：黑色素瘤 Pim-3 ssrna 双功能载体转移侵袭 pDC