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鼠疫菌培养基及培养条件的优化

青海畜牧兽医杂志 2024年第1期54卷 60-61页

作者：冯建萍青海省地方病预防控制所青海西宁810021

本试验对鼠疫菌培养基制备过程中涉及鼠疫菌生长的诸因素进行优化并作效果评价,目的在于筛选出适合鼠疫菌生长的优质培养基,从而保证鼠疫防控工作的顺利开展。

关键词：鼠疫菌培养基培养优化

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不同动物血液对于鼠疫菌生长影响的实验研究

现代预防医学 2024年第12期51卷 2235-2241+2276页

作者：赵莹张玲玲霍小玉黄雪娟郭敏高子厚苏超大理大学公共卫生学院云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室昆明医科大学公共卫生学院

目的探讨应用不同物种、不同浓度动物血制作的培养基对于鼠疫菌生长的影响，为优化改良鼠疫菌培养基提供理论依据。方法使用0.1%、0.5%、1%和2%四种浓度下大鼠血、兔血、豚鼠血等十种动物血制作的培养基培养鼠疫菌，共传十代，观察培... 详细信息

目的探讨应用不同物种、不同浓度动物血制作的培养基对于鼠疫菌生长的影响，为优化改良鼠疫菌培养基提供理论依据。方法使用0.1%、0.5%、1%和2%四种浓度下大鼠血、兔血、豚鼠血等十种动物血制作的培养基培养鼠疫菌，共传十代，观察培养结果，再进行相应统计分析。结果 1%浓度下十种动物血对于鼠疫菌菌落数目的影响有差异(P=0.015鼠疫菌菌落数目的影响差异具有统计学意义(P=0.037鼠疫菌长度的影响差异均具有统计学意义(P鼠疫菌长度的影响差异也具有统计学意义(P菌落数量时，最优选择为1%猪血，除此之外尽可能选择低浓度、易获取的血液刺激剂。若想培养出更优长度的鼠疫菌，最优选择为0.1%兔血，既能达到理想的实验效果又能节约成本。此外，利用只添加血液刺激剂的赫氏敏感培养基培养鼠疫菌，菌株的性状不会发生L型转变，菌株的总体性状是稳定的，这对菌种稳定传代保存有重要意义。

关键词：鼠疫菌动物血液血液刺激剂生长实验研究

青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因分型研究

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中华地方病学杂志 2022年第9期41卷 703-708页

作者：何建靳娟辛有全杨晓艳李胜张琪柏吉祥李广辉代瑞霞李伟青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室西宁810021 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所鼠疫室北京102206

目的探讨青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)的基因型及其地区分布。方法选取青海省地方病预防控制所保存的1954-2011年在不同地区宿主、媒介体内分离的1004株鼠疫菌作为实验对象,采用传统的苯酚-氯仿混... 详细信息

目的探讨青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)的基因型及其地区分布。方法选取青海省地方病预防控制所保存的1954-2011年在不同地区宿主、媒介体内分离的1004株鼠疫菌作为实验对象,采用传统的苯酚-氯仿混合抽提法提取鼠疫菌DNA。分别对3个CRISPR位点(YPa、YPb和YPc)进行PCR扩增、测序,将所测得CRISPR序列与文献最新报道的CRISPRDictionary数据库进行检索比对,以鉴定间区序列(spacer);对CRISPR各位点新发现的spacer,在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库进行Blast序列比对,推测基因序列来源。根据CRISPR spacer阵列的多态性对青藏高原鼠疫菌进行基因分型。结果1004株鼠疫菌共发现53种spacer,其中新发现6种,分别为a105、a106、a107、b51、b52、c14;1004株鼠疫菌被分成44个不同的CRISPR基因型,10大类群,新发现基因型15种,喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型以G26-a1′、G7、G22、G24-a1′、G22-a1′、G9、G26-a1′a60型为主,青海田鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型为G37-a6′型。结论青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型具有高度多样性,且地区分布特征显著。

关键词：鼠疫菌青藏高原鼠疫自然疫源地规律间隔成簇短回文重复序列基因型

甘宁黄土高原阿拉善黄鼠鼠疫疫源地鼠疫菌对12种抗菌药物的体外抑菌活性研究

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医学动物防制 2022年第5期38卷 460-462页

作者：李胜何建杨晓艳靳娟张琪柏吉祥魏柏青辛文媛辛有全代瑞霞青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室西宁810021

目的检测甘宁黄土高原阿拉善黄鼠鼠疫疫源地鼠疫菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,掌握该疫源地鼠疫菌对常用抗菌药物的敏感性。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂稀释法,测定头孢曲松钠、头孢呋辛钠、氨苄青... 详细信息

目的检测甘宁黄土高原阿拉善黄鼠鼠疫疫源地鼠疫菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,掌握该疫源地鼠疫菌对常用抗菌药物的敏感性。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂稀释法,测定头孢曲松钠、头孢呋辛钠、氨苄青霉素、氧氟沙星、环丙沙星、卡那霉素、链霉素、氯霉素、壮观霉素、四环素、莫西沙星,复方新诺明(甲氧苄啶-磺胺甲噁唑)12种抗菌药物分别对33株鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC_(90)和MIC_(90))。结果体外研究显示33株鼠疫菌对临床常用的12种抗菌药物均敏感,其中头孢曲松钠、环丙沙星、复方新诺明的抑菌活性较高(MIC_(90)≤0.06μg/ml),其次为氧氟沙星、莫西沙星、头孢呋辛钠、氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、链霉素和四环素(0.25μg/ml≤MIC_(90)≤4μg/ml),壮观霉素的抑菌活性最差(MIC_(90)=16μg/ml)。结论甘宁黄土高原阿拉善黄鼠鼠疫疫源地分离的33株鼠疫菌对12种常用抗菌药物均敏感。主动监测耐药菌株有助于早期发现耐药菌,以便为有效治疗鼠疫患者提供科学依据。

关键词：甘宁黄土高原阿拉善黄鼠鼠疫菌抗菌药物敏感性最低抑菌浓度琼脂稀释法体外抑菌活性

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抗鼠疫菌保护性抗原V抗体的筛选与鉴定

中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 266-271页

作者：谢青李志颖张卫郭家正黄莺王茜陈蕾张艺潇陆健昇杨志新军事科学院军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的构建纳米抗体噬菌体展示库,筛选抗鼠疫菌中和抗体,为鼠疫防治药物研制奠定基础。方法重组鼠疫菌保护性抗原V蛋白免疫双峰驼,分离外周血单核细胞,提取RNA,构建纳米抗体噬菌体展示库。以V蛋白为抗原对抗体库进行3轮固相筛选,挑选单克... 详细信息

目的构建纳米抗体噬菌体展示库,筛选抗鼠疫菌中和抗体,为鼠疫防治药物研制奠定基础。方法重组鼠疫菌保护性抗原V蛋白免疫双峰驼,分离外周血单核细胞,提取RNA,构建纳米抗体噬菌体展示库。以V蛋白为抗原对抗体库进行3轮固相筛选,挑选单克隆phage-ELISA鉴定,然后将富集的纳米抗体进行表达、纯化及评价。结果成功构建了库容量为1.9×10^(8)的抗鼠疫菌V蛋白纳米抗体噬菌体展示库。经过3轮筛选,获得8种抗体序列,表达和纯化后经ELISA检测,8株纳米抗体针对鼠疫菌V蛋白特异性良好且结合活性高。动物实验表明其中一株纳米抗体VHH-hFc6对鼠疫菌201株气溶胶攻击的保护率为33%。结论成功构建了抗鼠疫菌保护性抗原V蛋白的纳米抗体噬菌体展示库,筛选出8株抗V蛋白特异性纳米抗体,其中一株具有良好的中和活性。

关键词：鼠疫菌 V抗原纳米抗体中和抗体

内蒙古长爪沙鼠鼠疫疫源地鼠疫菌耐药相关基因检测及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2023年第7期18卷 777-781页

作者：王姝懿李建云刘芳冯一兰韩冰李伟内蒙古自治区综合疾病预防控制中心内蒙古呼和浩特010031

目的了解内蒙古长爪沙鼠鼠疫疫源地分离的鼠疫菌携带耐药及耐消毒剂基因情况,同时分析其结构功能和抗原表位,为鼠疫的治疗提供科学依据。方法对75株分离自内蒙古长爪沙鼠鼠疫自然疫源地的鼠疫菌DNA进行PCR扩增,检测耐磺胺类药物基因(S... 详细信息

目的了解内蒙古长爪沙鼠鼠疫疫源地分离的鼠疫菌携带耐药及耐消毒剂基因情况,同时分析其结构功能和抗原表位,为鼠疫的治疗提供科学依据。方法对75株分离自内蒙古长爪沙鼠鼠疫自然疫源地的鼠疫菌DNA进行PCR扩增,检测耐磺胺类药物基因(Sull、Sul2),耐链霉素基因(StrA、StrB),耐β-内酰胺类抗菌药物基因(Tem、CTX-m)和耐季铵盐类消毒剂基因(QacEdelta1)携带情况。同时分析Sul2基因的结构、功能及作为优势抗原的可能性。结果 PCR扩增显示,75株鼠疫菌均未检出上述耐药基因和耐消毒剂基因。生物信息学分析Sul2蛋白为不含有跨膜区的疏水性分泌蛋白,且属于外膜蛋白。其二级结构均以α螺旋和无规则卷曲为主,分别45.39%和33.21%。该蛋白含有6个B细胞表位和16个T细胞抗原表位。结论内蒙古长爪沙鼠鼠疫疫源地分离的75株鼠疫菌不具有耐药及耐消毒剂的特征。鼠疫菌的Sul2蛋白含有丰富的B、T细胞抗原表位,具有良好的抗原性,可为该疫源地鼠疫诊断和治疗提供参考。

关键词：内蒙古鼠疫菌消毒剂及耐药基因生物信息学

我国喜马拉雅旱獭鼠与南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌遗传特征研究

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中国热带医学 2023年第9期23卷 916-921页

作者：李胜靳娟何建辛有全柏吉祥张琪赵海红张晓璐杨晓艳代瑞霞青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室青海西宁810021

目的了解喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地与南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌表型及其遗传特征,为掌握两块鼠疫疫源地鼠疫菌病原学特征提供参考依据。方法选取我国喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地和南方家鼠鼠疫疫源地内分离的412株鼠疫菌,对其进行糖醇酵解... 详细信息

目的了解喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地与南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌表型及其遗传特征,为掌握两块鼠疫疫源地鼠疫菌病原学特征提供参考依据。方法选取我国喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地和南方家鼠鼠疫疫源地内分离的412株鼠疫菌,对其进行糖醇酵解实验、毒力因子鉴定、DFR分型和CRISPR分型研究。结果两块鼠疫疫源地鼠疫菌生化型呈明显的地区性分布特征,喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌被分为5个生化型;南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌生化特性较为稳定,只有1个生化型。两块疫源地分离的鼠疫菌绝大多数能产生毒力因子Fl和PstI,其中喜马拉雅旱獭疫源地70.53%(201/285)菌株为VW阳性,Pgm阳性菌株占75.09%(214/285),Pgm阴性菌株占20.00%(57/285),Pgm混合型菌株占5.26%(15/285);南方家鼠鼠疫疫源地37.80%(48/127)菌株为VW阳性,Pgm阳性菌株占29.13%(37/127),Pgm阴性菌株占58.27%(74/127),Pgm混合型菌株占12.60%(16/127)。DFR分型发现喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌包括22种基因型,其主要基因型为5、7、8、10、19、32、49型;家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌DFR基因分型相同,均属于9型。CRISPR分型发现,喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地所有菌株分为7个CRISPR基因簇14个CRISPR基因型,主要基因型为G7、G22、G26-a1’、G22-a1’;家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌CRISPR基因型均为G30型,其基因簇为Ca8。结论喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌表型和基因型多样,地理分布特征明显;南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌表型和基因型单一,因此采用DFR、CRISPR基因分型方法结合表型特征可有效地鉴别两块疫源地鼠疫菌和满足鉴定溯源研究的需求。

关键词：鼠疫喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌遗传特征

内蒙古鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐药相关基因检测及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4526-4535页

作者：王姝懿李建云刘芳冯一兰韩冰范蒙光内蒙古自治区综合疾病预防控制中心呼和浩特010031

【目的】试验旨在对内蒙古鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,鼠疫菌)抗生素及消毒剂耐药基因进行检测及生物信息学分析,以期为该地区的鼠疫防控提供科学依据。【方法】利用PCR对60株内蒙古鼠疫自然疫源地鼠疫菌的DNA进行耐... 详细信息

【目的】试验旨在对内蒙古鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,鼠疫菌)抗生素及消毒剂耐药基因进行检测及生物信息学分析,以期为该地区的鼠疫防控提供科学依据。【方法】利用PCR对60株内蒙古鼠疫自然疫源地鼠疫菌的DNA进行耐链霉素耐药基因(StrA、StrB)、β-内酰胺类耐药基因(Tem、Ctx-m)、磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2)和季铵盐类消毒剂耐药基因(QacEdelta)检测,并预测StrA、Sul1和QacEdelta蛋白的结构功能及抗原表位。【结果】PCR扩增结果显示,阴性对照和阳性对照均成立,60株鼠疫菌扩增结果均为阴性。从内蒙古鼠疫自然疫源地分离的鼠疫菌株中未发现有耐链霉素、磺胺类、β-内酰胺类抗菌药物及耐消毒剂等相关基因的菌株。生物信息学分析表明,StrA、Sul1和QacEdelta蛋白均为不含有跨膜区的疏水性外膜蛋白,且均属于分泌蛋白。3种蛋白的二级结构均以α-螺旋为主,占比分别为37.83%、45.88%和46.09%。抗原表位预测显示,3种蛋白中B细胞表位分别为9、8和3个;T细胞表位分别为9、16和14个。【结论】内蒙古鼠疫自然疫源地分离的60株鼠疫菌均未检测到耐药及耐消毒剂相关基因。StrA、Sul1和QacEdelta蛋白含有较多的B、T细胞抗原表位,具有较好的抗原性。本试验结果为指导该疫源地的鼠疫防控工作中合理使用抗菌药物和消毒剂提供参考依据。

关键词：内蒙古鼠疫菌消毒剂及耐药基因生物信息学

TaqMan-小沟结合物荧光探针对青海省青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药基因rpsL突变位点的筛查

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中国热带医学 2023年第6期23卷 662-666页

作者：柏吉祥辛有全李胜靳娟张琪杨晓艳金泳彭文轩代瑞霞何建青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室青海西宁810021

目的了解青海省青南地区rpsL基因点突变引起鼠疫菌耐链霉素的现状,为今后青南地区突发人间鼠疫的精准临床用药及预防耐药发生提供理论依据。方法筛选1957—2009年青海省青南地区取自鼠疫患者、媒介昆虫体内及中间宿主的104株代表性鼠疫... 详细信息

目的了解青海省青南地区rpsL基因点突变引起鼠疫菌耐链霉素的现状,为今后青南地区突发人间鼠疫的精准临床用药及预防耐药发生提供理论依据。方法筛选1957—2009年青海省青南地区取自鼠疫患者、媒介昆虫体内及中间宿主的104株代表性鼠疫菌,用赫氏平皿进行分离培养,采用十二烷基磺酸钠裂解和苯酚-氯仿法提取代表性鼠疫菌的DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsL基因设计引物及TaqMan-小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针Probe1[FAM]和Probe2[VIC],利用TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,对青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药位点rpsL基因的突变情况进行检测。结果青南地区104株被试菌株FAM检测结果均为阳性,对应检测rpsL(128:A),相对荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)峰值>1000,阴性菌株VIC检测结果均为阴性,对应检测rpsL(128:G),RFU峰值1000。即青南地区104株鼠疫菌中未发现耐链霉素rpsL基因点突变菌株。结论了解到青南地区鼠疫菌耐链霉素菌株分布情况,为青南地区预防耐药发生以及鼠疫菌临床治疗提供了基础数据。

关键词：鼠疫菌 TaqMan-小沟结合物荧光探针链霉素 rpsL基因筛查