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鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究

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中国中药杂志 2014年第17期39卷 3344-3348页

作者：赵丕文 David Yue-Wei LEE Zhongze Ma 孙艳玲陶仕英臧金凤牛建昭北京中医药大学基础医学院北京100029 Mclean Hospital Harvard Medical Schoolbelmontma02478

既往研究已经表明,鼠尾草酚(carnoso1)具有一定的抗乳腺癌效应,但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体(ER)阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受... 详细信息

既往研究已经表明,鼠尾草酚(carnoso1)具有一定的抗乳腺癌效应,但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体(ER)阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受体α,卢亚型特异性介导和调节机制。以ERα和ERβ特异性拮抗剂MPP,PHTPP为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察鼠尾草酚对T47D细胞增殖的影响;检测T47D细胞增殖周期的变化。利用Western blot方法检测鼠尾草酚对T47D细胞ERα和ERβ表达情况的影响。研究发现,1×10^(-5)~1×10^(-7)mol·L^(-1)鼠尾草酚能够显著抑制T47D细胞增殖,该抑制作用可被ERα拮抗剂MPP增强、被ERβ拮抗剂PHTPP减弱;1×10^(-1),1×10^(-6)mol·L^(-1)鼠尾草酚可使T47D细胞增殖指数显著下降。Western blot检测结果显示1×10^(-5),1×10^(-6)mol·L^(-1)鼠尾草酚可使T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达显著增加,并可明显提高ERα/ERβ。结果表明鼠尾草酚具有抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖的作用,其效应是通过靶细胞雌激素受体,特别是ERβ途径实现的;同时,鼠尾草酚对靶细胞雌激素受体ERα和ERβ亚型的表达及其比例具有调节功能。

关键词：鼠尾草酚乳腺癌 T47D细胞细胞增殖细胞周期雌激素受体

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鼠尾草酚对荷卵巢癌裸鼠移植瘤的作用研究

中国临床药理学杂志 2021年第12期37卷 1535-1538页

作者：谭金龙余美剑吴梦馨张丽娜江西上饶市人民医院肿瘤放化科江西上饶334000

目的探讨鼠尾草酚对荷卵巢癌裸鼠移植瘤的作用及可能的作用机制。方法用裸鼠背部皮下接种人卵巢癌细胞株SKOV3的方法构建荷卵巢癌BALB/c-Nude裸鼠模型,将荷卵巢癌裸鼠随机分为模型组、阳性对照组与实验组,各18只。实验组裸鼠灌胃鼠尾草... 详细信息

目的探讨鼠尾草酚对荷卵巢癌裸鼠移植瘤的作用及可能的作用机制。方法用裸鼠背部皮下接种人卵巢癌细胞株SKOV3的方法构建荷卵巢癌BALB/c-Nude裸鼠模型,将荷卵巢癌裸鼠随机分为模型组、阳性对照组与实验组,各18只。实验组裸鼠灌胃鼠尾草酚(20 mg·kg^(-1)),阳性对照组灌胃顺铂(2mg·kg^(-1)),模型组灌胃等量生理盐水,3组均隔天干预1次,连续干预21 d。测定抑瘤率与裸鼠的免疫功能;用Td T介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)检测移植瘤细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测移植瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达水平。结果阳性对照组与实验组的抑瘤率分别为(51.36±4.65)%,(32.84±2.92)%;模型组,阳性对照组与实验组裸鼠的胸腺指数分别为(1.42±0.53),(0.65±0.49),(5.38±1.62)mg·g^(-1);脾脏指数分别为(6.84±2.12),(4.21±1.82),(14.26±3.31)mg·g^(-1);NK细胞活性分别为(18.42±7.65)%,(11.43±5.91)%,(46.21±15.34)%;移植瘤细胞的凋亡指数分别为(14.73±2.62)%,(75.84±4.91)%,(51.32±3.67)%;移植瘤组织Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.82±0.13,0.18±0.05,0.73±0.11;PI3K蛋白相对表达量分别为0.91±0.09,0.26±0.08,0.76±0.12;Akt蛋白相对表达量分别为0.94±0.06,0.05±0.03,0.34±0.09。上述指标,模型组分别与实验组和对照组比较,差异均有统计学意义(均P鼠尾草酚可抑制荷卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,增强裸鼠的免疫功能,促进移植瘤细胞凋亡,其作用机制可能与下调移植瘤组织Bcl-2、PI3K、Akt蛋白表达相关。

关键词：卵巢癌鼠尾草酚移植瘤 B细胞淋巴瘤-2 磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B

鼠尾草酚对肿瘤坏死因子-α诱导HT-29细胞趋化因子表达的影响

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中国临床药理学杂志 2016年第14期32卷 1325-1328页

作者：姚晖夏冬王明明陈旺盛任磊徐亮西南医科大学附属医院胃肠外科四川泸州646000

目的探讨鼠尾草酚对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HT-29细胞趋化因子表达的影响及其作用机制。方法将HT-29细胞分为空白对照组(DMEM培养液)、TNF-α组(10 ng·m L^(-1)TNF-α)、低、中、高剂量鼠尾草酚组(10 ng·m L^(-1)TNF-α+10,20,40... 详细信息

目的探讨鼠尾草酚对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HT-29细胞趋化因子表达的影响及其作用机制。方法将HT-29细胞分为空白对照组(DMEM培养液)、TNF-α组(10 ng·m L^(-1)TNF-α)、低、中、高剂量鼠尾草酚组(10 ng·m L^(-1)TNF-α+10,20,40μmol·L^(-1)鼠尾草酚)和阳性对照组(10 ng·m L^(-1)TNF-α+40μmol·L^(-1)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)。用CCK-8法检测HT-29细胞活力,用酶联免疫吸附法检测白细胞介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白- 1(MCP-1)的表达,用Western-blot方法检测核转录因子-κB(NF-κB)p65的表达。结果空白对照组、TNF-α组、低、中、高剂量鼠尾草酚组和阳性对照组的OD值分别为(1.21±0.04),(1.17±0.06),(1.16±0.04),(1.15±0.05),(1.15±0.05),(1.18±0.05),6组的HT-29细胞活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α组的IL-8和MCP- 1表达分别为(4942.00±220.30),(2299.00±273.38)pg·m L^(-1),均明显高于空白对照组的(841.67±27.15),(140.67±23.54)pg·m L^(-1)(P鼠尾草酚组和阳性对照组的IL-8表达分别为(4136.33±253.00),(3156.00±241.89),(2585.67±185.04),(2652.67±219.55)pg·m L^(-1),MCP- 1表达分别为(1980.67±167.02),(1259.33±256.66),(851.00±161.16),(1452.00±256.66)pg·m L^(-1),均明显低于TNF-α组(P鼠尾草酚组和阳性对照组的NF-κB p65表达较TNF-α组显著下降(P鼠尾草酚能抑制TNF-α诱导HT-29细胞趋化因子IL-8和MCP- 1的表达,其作用机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB通路激活有关。

关键词：鼠尾草酚肿瘤坏死因子-α 趋化因子核转录因子-κB

鼠尾草酚对人脐静脉内皮细胞黏附淋巴细胞能力的影响及其机制

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山东医药 2017年第23期57卷 31-34页

作者：姚晖何小文何晓生吴小剑兰平西南医科大学附属医院四川泸州640000 中山大学附属第六医院

目的探讨鼠尾草酚对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)黏附淋巴细胞能力的影响及其机制。方法将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为鼠尾草酚高剂量组、鼠尾草酚低剂量组、TNF-α组和对照组。鼠尾草酚高剂量组、鼠尾草酚低剂量组分别... 详细信息

目的探讨鼠尾草酚对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)黏附淋巴细胞能力的影响及其机制。方法将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为鼠尾草酚高剂量组、鼠尾草酚低剂量组、TNF-α组和对照组。鼠尾草酚高剂量组、鼠尾草酚低剂量组分别加入10、5μmol/L鼠尾草酚培养18 h,然后加入10 ng/mL TNF-α培养6h;TNF-α组加入10 ng/mL TNF-α培养6h;对照组只加EGM-2培养液培养24 h。用淋巴细胞黏附试验观察各组HUVEC黏附淋巴细胞的能力(以相对荧光强度表示),用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测各组HUVEC细胞培养液上清液中的趋化因子白细胞介素8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),用Western blotting法检测各组HUVEC细胞中的黏附分子血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)。结果鼠尾草酚高剂量组、鼠尾草酚低剂量组、TNF-α组和对照组相对荧光强度分别为1.74±0.33、2.08±0.28、2.61±0.29、1.00±0.01,TNF-α组荧光强度高于对照组(P鼠尾草酚低、高剂量组荧光强度低于TNF-α组(P均鼠尾草酚高剂量组低于鼠尾草酚低剂量组(P鼠尾草酚低、高剂量组HUVEC细胞培养液上清液中IL-8、MCP-1蛋白水平及HUVEC细胞中VCAM-1、ICAM-1相对表达量下降(P均鼠尾草酚高剂量组低于鼠尾草酚低剂量组(P鼠尾草酚能下调HUVEC黏附淋巴细胞的能力。其机制可能是鼠尾草酚能抑制TNF-α诱导的HUVEC趋化因子IL-8、MCP-1及细胞黏附分子VCAM-1、ICAM-1表达上调。

关键词：鼠尾草酚人脐静脉内皮细胞肿瘤坏死因子α 白细胞介素8 单核细胞趋化蛋白1 细胞间黏附分子1 血管细胞黏附分子1

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鼠尾草酚抑制卵巢癌生长及其机制研究

中华中医药学刊 2015年第12期33卷 2901-2904,I0026页

作者：龚建明章珂珂王晓黄引平温州医科大学附属第一医院妇产科浙江温州325000

目的:研究鼠尾草酚对卵巢癌生长的影响及其机制。方法:不同浓度的鼠尾草酚(2.5μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1))作用卵巢癌细胞株SKOV3 24 h后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测SKOV3细胞... 详细信息

目的:研究鼠尾草酚对卵巢癌生长的影响及其机制。方法:不同浓度的鼠尾草酚(2.5μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1))作用卵巢癌细胞株SKOV3 24 h后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测SKOV3细胞中PI3K、P-Akt、FOXO3a(Forkhead box O3,FOXO3a)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、Akt蛋白的表达。建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察不同浓度的鼠尾草酚对卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中FOXO3a、XIAP阳性表达。结果:与对照组相比,鼠尾草酚可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞生长,并显著增加癌细胞凋亡率,呈浓度依赖性;鼠尾草酚可下调PI3K、P-Akt、XIAP蛋白表达,同时上调FOXO3a。鼠尾草酚各剂量组卵巢癌组织中XIAP阳性表达率均低于对照组,而FOXO3a阳性表达率均高于对照组。结论:鼠尾草酚可抑制卵巢癌细胞的生长,其机制可能通过PI3K/Akt信号通路,诱导其凋亡。

关键词：鼠尾草酚卵巢癌 PI3K Akt FOXO3a XIAP

鼠尾草酚和鼠尾草酸对类风湿性关节炎的影响及其相关机制研究

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鼠尾草酚和鼠尾草酸对类风湿性关节炎的影响及其相关机制研究

作者：周笑天南京师范大学

学位级别：硕士

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫疾病,早期表现为关节肿痛,关节滑膜慢性炎症、增生形成血管翳,血管翳侵害关节边缘和软骨下骨,造成不同程度的骨量流失,导致关节内软骨、骨以及关... 详细信息

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫疾病,早期表现为关节肿痛,关节滑膜慢性炎症、增生形成血管翳,血管翳侵害关节边缘和软骨下骨,造成不同程度的骨量流失,导致关节内软骨、骨以及关节囊的损坏,引起关节畸形,关节功能丧失。另外,RA的炎症还可以通过其全身作用影响骨重建,从而诱发全身性的骨量减少以及骨质疏松症,给人们的生产生活带来极大的危害。RA目前的治疗方法目前主要有:一般治疗、免疫净化、外科治疗、药物治疗。目前药物治疗方法虽有效但副作用较大,加之RA发病原因及发病机理尚未定论,找到一种合适有效的RA治疗方法迫在眉睫。而天然中草药在治疗过程中,可以提高机体抵抗力,改善全身状况,并且可以减缓其他药物的副作用。草药虽然在其成分方面还尚待进一步研究和确认,但由于其种种促进健康的特性,在近年来受到了极大的关注。其中,双萜类以其抗菌性、抗炎性、抗氧化性、神经保护以及抗癌作用而受到越来越多的关注。其中,最初从鼠尾草(salvia carnosa)中分离出的鼠尾草酚(CS,carnosol)有很强的抗炎能力和抗氧化作用,其在前列腺癌、乳腺癌、皮肤癌、白血病和结肠癌中的作用也均有文献报导。也有文献报导称CS可解除多条与炎症和癌症有关的信号通路,如NF-κB(nuclearfactorkappaB)、P13K7AKT、雌性激素与雄性激素受体等。鼠尾草酸(CA,carnosic acid)不仅与其氧化降解产物CS有相同的碳骨架,而且在生物活性与作用方面也有很多的相似之处。因此,我们提出,CS和CA是否对关节炎有调节作用?这种调节作用又是通过什么信号通路调控的?为此,我们从细胞水平、分子水平和动物水平分析了CS和CA对类风湿关节炎的治疗作用,并进行了可能的机制探讨。主要实验内容和结果:第一部分:体外实验培养 RA 患者滑膜成纤维细胞(fibroblast tike synovial cells,FLS),通过 MTS/PMS实验检测CS和CA的药物毒性;通过细胞划痕实验检测CS和CA对细胞的迁移水平的影响;并且检测FLS细胞受TNF-a刺激后,CS和CA对细胞内细胞因子表达水平的影响。结果:CS 和 CA 在实验浓度(0μM、0.5μM、1.OμM、2.5μM、5.OμM、lOμM、20μM)下对细胞增殖没有抑制作用;并且在5μM和10μM时均可对TNF-a诱导后的滑膜成纤维细胞的迁移产生抑制作用;两种药物能显著下调细胞中炎性因子表达水平,破骨细胞相关基因RANKL的表达水平,并且能够下调类风湿性关节炎标志性基因MMP-3的水平。第二部分:体内实验选取160g-180g雌性wistar大鼠,分别于皮内和皮下两次注射Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂建立胶原诱导性关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)模型。实验共分为4组:①空白对照组(Control):不诱导RA,腹腔注射生理盐水;②阴性对照组(CIA+Vehicle):诱导 RA,腹腔注射 10%DMSO;③实验组一(CIA+CS):诱导RA,腹腔注射CS(5mg/kg);④实验组二(CIA+CA):诱导RA,腹腔注射CA(5mg/kg)。从发病早期(即后爪评分为1-2分时)开始进行药物处理,腹腔注射生理盐水、10%DMSO、CS或CA,隔一天注射一次,总治疗时间为14天。14d后取材,比较实验组与对照组在肿胀程度、炎性因子表达、关节破坏等方面的区别,进而研究鼠尾草酚和鼠尾草酸在类风湿性关节炎中的作用。结果:经CS或CA治疗后,无论是在肿胀程度、炎性因子表达方面均有显著性差异。结论:无论在体内和体外实验中,CS和CA对RA-FLS无害、对TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞迁移的抑制作用,以及其在大鼠体内对炎性因子的抑制作用,和对关节软骨、骨组织的保护作用均提示其可以作为研究类风湿性关节炎的新方向,为类风湿性关节炎的治疗及预后提供新思路、新方法。

关键词：类风湿性关节炎鼠尾草酚鼠尾草酸滑膜成纤维细胞

鼠尾草酚衍生物的合成及其抗肿瘤恶病质活性研究

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鼠尾草酚衍生物的合成及其抗肿瘤恶病质活性研究

作者：魏锟四川轻化工大学

学位级别：硕士

肿瘤恶病质是一种发生于肿瘤晚期,由恶性肿瘤引起的全身代谢紊乱的综合消耗症。其主要临床表现为脂肪和肌肉组织的萎缩,导致体重下降、虚弱等。目前,针对这一症状,并无特异性治疗药物。鼠尾草酚是一种从迷迭香等唇形科植物中分离的二萜... 详细信息

肿瘤恶病质是一种发生于肿瘤晚期,由恶性肿瘤引起的全身代谢紊乱的综合消耗症。其主要临床表现为脂肪和肌肉组织的萎缩,导致体重下降、虚弱等。目前,针对这一症状,并无特异性治疗药物。鼠尾草酚是一种从迷迭香等唇形科植物中分离的二萜类天然产物。研究表明鼠尾草酚能显著改善由肿瘤恶病质引起的肌肉细胞萎缩,具有开发成抗肿瘤恶病质药物的潜力。本文以鼠尾草酚为先导化合物,进行了结构修饰和抗肿瘤恶病质活性研究工作,取得了一定进展。由于鼠尾草酚的抗肿瘤恶病质药物作用靶点尚不明确,为寻找有效靶点,本文设计合成了鼠尾草酚-生物素偶联物,通过靶点垂钓初步确定了鼠尾草酚作用于肿瘤恶病质的靶点。由于鼠尾草酚化学结构中11,12位具有邻苯二酚的结构,易发生氧化,在体内也极易发生代谢转化,影响其药效和成药性。为了解决鼠尾草酚这一缺陷,本文一方面,在邻苯二酚的位置,采用噁唑成环反应,形成五元噁唑环;另一方面,采用Suzuki偶联反应,将结构中不稳定的酚羟基,用芳环来进行替代,以提高化合物的结构稳定性和代谢稳定性。由于鼠尾草酚的化学结构中7,20位具有内酯环结构,在酸碱条件下均不稳定,也是体内代谢的代谢软点。为克服这一缺点,本文以鼠尾草酸为原料,利用三氧化铬氧化反应在7位引入羰基,再通过还原胺化和酰胺缩合反应形成内酰胺桥环,将内酯化学结构替换为化学和代谢更加稳定的酰胺结构,以提高化合物的结构稳定性和代谢稳定性。最终,在确定鼠尾草酚的药物作用靶点方面,本文运用靶点垂钓实验初步确定鼠尾草酚的作用靶点为胱抑素B（Cystatin-B）、线粒体加工肽酶β亚基（Mitochondrial-processing peptidase subunit beta）、钙调蛋白-2（Calponin-2）、60S核糖体蛋白L27a（60S ribosomal protein L27a）;在鼠尾草酚衍生物的合成方面,本文合成了35个结构新颖的11,12位结构修饰的鼠尾草酚衍生物、13个结构新颖的7,20位结构修饰的鼠尾草酚衍生物,合成的化合物的化学结构通过H NMR、C NMR、NOESY、MS、单晶X-ray等手段进行确证。运用C2C12肌管细胞的肿瘤恶病质肌萎缩模型,对已合成的42个化合物进行了抗肿瘤恶病质活性测试,并与鼠尾草酚对照,其中10个衍生物显示出比鼠尾草酚更强的抗肿瘤恶病质的活性。这些化合物有望作为候选化合物进行下一阶段的测试并开发成为抗肿瘤恶病质的药物。本研究为抗肿瘤恶病质药物的开发以及鼠尾草酚的应用提供了参考。

关键词：肿瘤恶病质鼠尾草酚药物作用靶点结构修饰鼠尾草酸

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鼠尾草酚对椎间盘退变的保护作用及机制研究

鼠尾草酚对椎间盘退变的保护作用及机制研究

作者：杨明苏州大学

学位级别：硕士

目的:80%以上的人会在一生的某个阶段曾经历过腰痛。慢性腰痛的社会成本非常高,包括生活质量下降、工资损失及医疗保健成本下降。目前椎间盘退变的治疗主要有临床上的药物保守以及外科手术的彻底根治手段,常用的药物一般包括止痛和消炎... 详细信息

目的:80%以上的人会在一生的某个阶段曾经历过腰痛。慢性腰痛的社会成本非常高,包括生活质量下降、工资损失及医疗保健成本下降。目前椎间盘退变的治疗主要有临床上的药物保守以及外科手术的彻底根治手段,常用的药物一般包括止痛和消炎两种作用,但是这些药物并不能从根本上抑制甚至消除椎间盘退变的进展,而临床将椎间盘完全或不完全切除以达到治疗目的。这虽然有效的缓解了患者的症状,但是存在了很多缺点。因此我们需要对椎间盘的退变的发病机制进行深入研究,以找到更佳的治疗手段。从分子角度来看,活性氧、糖基化终产物等引起髓核细胞线粒体功能障碍,应激反应和炎症反应最终导致髓核细胞凋亡和细胞外基质丢失。天然多酚类物质大多具有优异的生物活性,如迷迭香是地中海饮食中常见的添加剂,有充分的证据表明,迷迭香的添加物鼠尾草酚可能是地中海饮食有助于降低癌症和心血管疾病风险的重要原因,鼠尾草酚是促进其功能的主要成分,研究表明,鼠尾草酚的抗炎和抗氧化作用非常广泛。因此本实验主要探究鼠尾草酚(Carnosol)是否具有保护氧化应激环境下髓核细胞,促进细胞外基质合成,抑制基质降解的能力,以及鼠尾草酚通过何种机制对髓核细胞产生保护作用。方法:我们利用过氧化氢(H202)干预大鼠NPC细胞构建了体外椎间盘退变模型,用10 μM和20μM Carnosol处理髓核细胞,用CCK8法检测正常与炎性环境Carnosol对髓核细胞增殖能力的影响,ELISA、RT-qPCR检测炎性因子、细胞外基质(ECM)合成与降解基因的表达,Western blot检测各指标的蛋白表达情况以及通路蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞内DCFH-DA标记的活性氧荧光强度。同时我们利用椎间盘针刺模型诱导大鼠体内椎间盘退变模型(IDD),通过向椎间隙注射Carnosol进行干预,影像学观察椎间盘变化,并制作标本,切片,通过番红-快绿染色以及组织化学染色观察Carnosol能否保护体内退变椎间盘组织。结果:体外实验结果表明:1.20 μM Carnosol在24h以内能够有效促进正常与氧化应激环境下NPCs的增殖。***能够减轻NPCs氧化应激环境下,炎性因子的IL-1β的分泌。***能够促进正常与氧化应激环境下细胞外基质合成基因和蛋白(COL-II、ACAN、SOX9)的表达。***能够抑制氧化应激环境下NPCs外基质降解酶的基因和蛋白(MMP13、MMP3、ADAMTS5)的表达。***能够降低氧化应激环境下细胞内活性氧。***能够上调Nrf2、HO-1蛋白表达,激活Nrf2/HO-1信号途径。体内实验:Carnosol椎间隙注射后能够有效保护椎间盘退变的大鼠NPCs,减少髓核细胞细胞外基质的丢失,促进细胞外基质合成蛋白(COL-II)的表达,抑制细胞外基质降解酶(MMP13)的表达。结论:Carnosol能够通过激活Nrf2/HO-1途径,提高体内与体外氧化应激环境下髓核细胞的抗炎、抗氧化能力,保护髓核细胞,延缓椎间盘退变进展。

关键词：鼠尾草酚椎间盘退变 Nrf2/HO-1通路氧化应激

鼠尾草酚通过激活SIRT1/EZH2信号通路减轻肝脏纤维化

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鼠尾草酚通过激活SIRT1/EZH2信号通路减轻肝脏纤维化

作者：赵环宇大连医科大学

学位级别：硕士

背景:肝纤维化(liver fibrosis)是多种慢性肝损害所致的可逆性病理改变,是肝硬化发展的必经阶段。其主要表现为肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活所致的肝细胞外间质成分过度异常沉积,影响肝脏的功能。目前肝纤维化在诊治方面... 详细信息

背景:肝纤维化(liver fibrosis)是多种慢性肝损害所致的可逆性病理改变,是肝硬化发展的必经阶段。其主要表现为肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活所致的肝细胞外间质成分过度异常沉积,影响肝脏的功能。目前肝纤维化在诊治方面虽然有一些进展,但仍缺乏确定有效的药物,且相关分子机制尚不完全明确。有研究表明Enhancer of Zeste Homolog 2(EZH2)在促进肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)分化中发挥重要作用,但其具体机制仍不完全清楚。鼠尾草酚(carnosol,CS)是迷迭香中提取的一种脂溶性有效成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,但其对肝纤维化的治疗作用国内外未见报道。目的:探究CS对肝纤维化的保护作用,以及Sirtuin 1(SIRT1)/EZH2在抗肝纤维化中的分子机制。方法:***在大鼠肝纤维化中保护作用的研究60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为五组:(A)空白对照组;(B)CS空白给药组(30mg/kg);(C)CCl4腹腔注射组;(D)CCl4+CS低剂量(15mg/kg)给药组;(E)CCl4+CS高剂量(30mg/kg)给药组。C、D、E组通过腹腔注射CCl4(0.5 mg/kg,按1:10比例稀释于橄榄油中,2次/周,4周)模拟肝纤维化模型,A、B组给予等量溶媒橄榄油腹腔注射;同时,B、D、E组每天通过灌胃方式给予不同浓度CS油溶液,A、C组给予等量溶媒橄榄油。四周后腹主动脉取血,分离肝脏组织标本。检测大鼠血清中谷丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)活性。采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)和Masson染色法检查肝脏病理改变及胶原累积分布情况;通过Western Blot法检测肝组织SIRT1、EZH2、Collagen I、α-SMA、E-Cadherin、Vimentin等蛋白水平;real-time PCR法检测肝组织PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA等的m RNA水平。***对转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导肝细胞损伤的保护作用及相关机制研究(1)AML-12、LX-2细胞分成四组:空白对照组;CS(10μM)组;TGFβ1(4ng/ml)组;CS(10μM)+TGFβ1(4ng/ml)组。CS预给药6h,TGFβ1诱导12h后提取细胞全蛋白。Western Blot法检测细胞内Collagen I、α-SMA表达情况。(2)AML-12、LX-2细胞分成五组:空白对照组;TGFβ1(4ng/ml)组;高、中、低剂量CS(2.5μM、5μM、10μM)+TGFβ1(4ng/ml)组。CS预处理6h,使用TGFβ1诱导12h后提取细胞全蛋白。Western Blot法检测细胞内Collagen I、α-SMA蛋白表达水平。(3)大鼠原代HSC、AML-12细胞分成四组:阴性对照(si-control)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)组;EZH2干扰(si-EZH2)组;si-EZH2+TGFβ1(4ng/ml)组。control si RNA/EZH2 si RNA转染48h,TGFβ1诱导12h后,提取细胞RNA或全蛋白。采用real-time PCR法检测EZH2、PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA的m RNA表达情况;Western Blot法检测Collagen I、α-SMA、E-Cadherin、Vimentin蛋白表达水平;免疫荧光法观察细胞中E-Cadherin、Vimentin的分布和表达情况。(4)大鼠原代HSC、AML-12细胞分成五组:阴性对照(si-control)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)组;si-control+TGFβ1(4ng/ml)+CS(10μM)组;SIRT1干扰(si-SIRT1)+TGFβ1(4ng/ml)组;si-SIRT1+TGFβ1(4ng/ml)+CS(10μM)组。control si RNA/SIRT1 si RNA转染48h,CS作用6h,TGFβ1诱导12h后,提取细胞全蛋白或RNA。采用Western Blot法检测细胞内SIRT1、EZH2、Collagen I、α-SMA、E-Cadherin及Vimentin蛋白表达情况;real-time PCR技术检测PPARγ、TIMP1、CTGF、Collagen I、α-SMA的m RN

关键词：鼠尾草酚肝纤维化 SIRT1 EZH2