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从JAK1/2-STAT1信号通路探讨A型流感病毒对巨噬细胞的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

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中国免疫学杂志 2024年

作者：陈纯静赵澄卢芳国张香港贺笠彭美红陈琲李彤湖南中医药大学医学院湖南中医药大学第一附属医院

基于Janus激酶/信号转导和转录激活因子（Janus kinase /signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）通路介导的细胞因子表达研究A型流感病毒（IAV）对巨噬细胞的影响，并进一步探讨麻杏石甘汤含药血清的干预作用。R... 详细信息

基于Janus激酶/信号转导和转录激活因子（Janus kinase /signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）通路介导的细胞因子表达研究A型流感病毒（IAV）对巨噬细胞的影响，并进一步探讨麻杏石甘汤含药血清的干预作用。RAW264.7分为正常对照组、JAK/STAT信号通路激活剂组、JAK/STAT信号通路抑制剂组、模型对照组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组、麻杏石甘汤组。经IAV干预后，换为相应的培养基，继续培养24、48h后收集样本，检测与分析指标：以ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β（interleukin-1β，IL-1β）、CXCL2（CXC chemokine ligand 2，CXCL2）的分泌水平；以RT-qPCR法检测细胞中流感病毒核蛋白（Nuclear Protein，NP）、JAK1/2、STAT1的mRNA表达水平；以Western blotting法检测细胞中JAK1/2、STAT1的蛋白表达水平；以免疫荧光法检测细胞中磷酸化STAT1（phosphorylated STAT1，p-STAT1）；Pearson相关分析分别评估p-STAT1蛋白表达水平与IL-1β、CXCL2分泌水平之间的相关性。结果显示，细胞培养上清液中IL-1β、CXCL2分泌水平、流感病毒NP及细胞JAK1/2、STAT1 mRNA表达水平、细胞JAK1/2、STAT1、p-STAT1 蛋白表达水平均升高（P＜0.05或0.01）；细胞p-STAT1与IL-1β、CXCL2分泌水平呈现正相关。麻杏石甘汤能下调细胞培养上清液中IL-1β、CXCL2分泌水平、下调流感病毒NP及细胞JAK1/2、STAT1 mRNA表达水平、下调细胞中JAK1/2、STAT1、p-STAT1蛋白表达水平（P＜0.05或0.01）。JAK1/2-STAT1信号通路激活及其介导的炎症因子失衡可能是IAV所致巨噬细胞免疫病理损伤的分子机制之一，麻杏石甘汤可能通过调控该信号通路缓解IAV的致病作用。

关键词： RAW264.7细胞 IAV 麻杏石甘汤 JAK1/2-STAT1 炎症因子免疫病理损伤

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麻杏石甘汤复方合煎与单煎的差异性研究

麻杏石甘汤复方合煎与单煎的差异性研究

作者：李超天津中医药大学

学位级别：硕士

中药复方一直以来以汤剂作为中药临床用药的主要剂型,复方中所有药材均为合煎形式。现如今,因为配方颗粒具有服用方便、便于携带、容易保存的优点,在现代临床上广泛应用。但是,配方颗粒改变了我国传统汤药的群药煎煮习惯,众多中医药学... 详细信息

中药复方一直以来以汤剂作为中药临床用药的主要剂型,复方中所有药材均为合煎形式。现如今,因为配方颗粒具有服用方便、便于携带、容易保存的优点,在现代临床上广泛应用。但是,配方颗粒改变了我国传统汤药的群药煎煮习惯,众多中医药学者对中药配方颗粒不经过共同煎煮这个过程,能不能达到和中药汤剂一样的疗效,仍存在质疑。麻杏石甘汤出自《伤寒论》,在临床应用中,很多治疗呼吸系统疾病的中成药是由麻杏石甘汤化裁方而来。而且麻杏石甘汤由甘草、石膏、麻黄、苦杏仁四种药材组成,其中矿物类药材石膏是当今配方颗粒最具有争议的药物,一些学者认为矿物类药物只有在合煎的过程中才能发挥作用。因此本课题选择了经典名方麻杏石甘汤为研究对象,来探究其复方合煎和单煎之间的差异。本课题的主要研究内容包括以下几部分:1.通过对麻杏石甘汤古籍文献考证,确定了方中各味药的基源与2020年版《中国药典》来源一致,甘草的炮制方式为炒制,苦杏仁的炮制方式为燀法。确定了汉代1两为13.75克,处方用量为麻黄55g、甘草27g、石膏110g、苦杏仁20g。并对实验中所使用的药材进行鉴定与质量检测,确定实验样品的真伪和质量。2.通过化学特征分析麻杏石甘汤复方合煎与单煎的差异,首先建立了HPLC-DAD分析方法,并对此方法进行了一系列方法学验证,其结果均符合要求。利用此方法比较麻杏石甘汤合煎水煎液和单味药材单煎水煎液中五种成分的含量差异,对比分析发现麻杏石甘汤合煎液中甘草酸的溶出量低于甘草单煎液的溶出量,合煎中的三种麻黄碱类的总含量相比于麻黄单煎中的麻黄碱类的总含量也有所降低,进而说明了中药复方合煎中存在中药中化学成分的互相影响,从而导致单煎与合煎的化学成分的溶出量不同。采用钙离子测试盒对比分析麻杏石甘汤合煎液和石膏水煎液中钙离子的含量,发现合煎液中的钙离子溶出量要高于石膏单煎液。除此之外,模拟中药配方颗粒的配伍过程,并模拟中药配方颗粒配伍过程,通过煎煮、冻干制成单味药材的单煎冻干粉和合煎冻干粉,比较合煎冻干粉和单煎冻干粉中五种化学组成含量差异,得出了和中药水煎液一样的结论。为了分析麻杏石甘汤煎液和合煎液之间的化学成分差异,本课题利用质谱分析方法全面鉴定麻杏石甘汤单煎与合煎的样品成分,鉴定出了77种化学成分,并没有发现新的化合物。但是发现两者之间有多种黄酮类成分化学成分存在差异,因此,对两者中的黄酮类成分含量进行研究。通过较全面的化学分析,能更好地分析麻杏石甘汤单煎与合煎之间的差异。3.建立大鼠发热模型,对比分析麻杏石甘汤的单煎液、合煎液、单煎缺石膏液、合煎缺石膏液的解热效果。对发热大鼠在造模后的不同时间点的体温变化进行计算,统计学分析其解热作用。研究结果显示,与其他组相比,合煎组能显著抑制大鼠体温升高以及降低最大体温上升高度。没有石膏参与的合煎缺石膏组与单煎缺石膏组,在抑制大鼠体温升高的作用上远没有合煎组的效果好,这表明石膏对于发挥麻杏石甘汤解热作用具有重要作用,且必须配合群药合煎才可以发挥更好的疗效。另外,通过分析大鼠下丘脑和血清中IL-6、TNF-α、PGE2的含量,发现麻杏石甘汤的合煎液对于发热大鼠的影响最大。4.以代谢组学为切入点,考察合煎和单煎麻杏石甘汤治疗发热大鼠后的作用,发现其代谢通路及相关可能的生物标志物并探究其异同之处。根据代谢组学研究结果,麻杏石甘汤合煎的疗效可能略好于单煎,这对麻杏石甘汤单味药处方颗粒能否在临床上取代传统汤剂有一定借鉴意义。

关键词：麻杏石甘汤合煎与单煎化学成分代谢组学发热

基于JAK1-STAT1通路探讨流感“肺脑传变”的分子机制及麻杏石甘汤干预作用

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中国实验方剂学杂志 2022年

作者：陈纯静赵澄张香港王平肖荣胡珏匡炜熊涛卢芳国湖南中医药大学长沙市中医医院

目的：基于Janus激酶1/信号转导和转录激活因子1（Janus kinase 1/Signal transducer and activator of transcription 1，JAK1-STAT1）通路研究流感“肺脑传变”的分子机制，并进一步探讨麻杏石甘汤（Ma Xing Shi Gan Decoction，MXSGD）的干预作用。方法：SPF级BLAB/c小鼠100只随机分为正常组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和MXSGD组，每组20只。除正常组常规饲养外，其余四组以A型流感病毒（Influenza A virus，IAV）滴鼻感染构建小鼠流感病毒肺炎模型，造模24小时后，各药物治疗组分别予以奥司他韦(21.63 mg·kg;·d;)、抗病毒颗粒(3.9 g·kg;·d;)、MXSGD(6.05 g·kg;·d;)灌胃，正常组和模型组以等量生理盐水灌胃，每天1次，连续给药3天或7天。苏木素-伊红染色法（Hematoxylin E staining，HE）观察肺、脑组织病理变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-Time quantitative polymerase chain reaction， RT-qPCR）检测肺、脑组织中流感病毒载量及JAK1、STAT1mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（western blot）检测肺、脑组织中JAK1、STAT1蛋白表达水平；免疫组化法检测肺、脑组织中磷酸化信号转导和转录激活因子1（phosphorylation-Signal transducer and activator of transcription 1，p-STAT1）表达水平；酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）检测血清中白介素1β（InterleukinI-1β，IL-1β）、白介素10（InterleukinI-10，IL-10）的量。结果：与正常组比较，模型组小鼠肺组织及大脑皮质出现明显病理变化；肺部流感病毒核蛋白（Nucleoprotein，NP）基因相对表达量显著增加（P＜0.01）；肺组织和脑组织中JAK1、STAT1基因和蛋白表达水平明显增加（P＜0.05，P＜0.01）；肺组织和大脑皮质中p-STAT1表达水平明显增加（P＜0.05，P＜0.01）；血清中IL-1β表达量明显增加（P＜0.05）。与模型组比较，MXSGD组小鼠肺组织及大脑皮质病理损伤减轻；肺组织流感病毒NP基因相对表达量显著降低（P＜0.01）；肺组织和脑组织中JAK1、STAT1基因和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01）；血清中IL-10水平显著增加（P＜0.01）。结论：JAK1-STAT1通路异常活化可能是流感“肺脑传变”的分子机制之一，MXSGD作为有效的抗流感病毒中药复方，可通过调控该通路介导的细胞因子水平的变化缓解A型流感病毒肺部感染小鼠的脑组织病理损伤。

关键词： A型流感病毒流感“肺脑传变” 麻杏石甘汤 JAK1-STAT1 细胞因子

基于网络药理学的银翘散合桑菊饮加减方、麻杏石甘汤加减方与抗病毒西药作用机制比较——以2018初冬流行性感冒轻症为例

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中医杂志 2019年第11期60卷 928-934页

作者：白辰刘铁钢徐竞男马雪颜李卓于河谷晓红北京中医药大学

目的分析中药方剂与抗病毒西药治疗流感轻症的机制差异,探讨中药复方抗流感病毒的可能机制。方法选取银翘散合桑菊饮加减方、麻杏石甘汤加减方,与奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦作对比。在SymMap等生物数据库中分别检索两中药复方中药物... 详细信息

目的分析中药方剂与抗病毒西药治疗流感轻症的机制差异,探讨中药复方抗流感病毒的可能机制。方法选取银翘散合桑菊饮加减方、麻杏石甘汤加减方,与奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦作对比。在SymMap等生物数据库中分别检索两中药复方中药物的靶蛋白,与疾病基因库中流感的疾病基因进行匹配。利用String数据库及Cytoscape软件对靶蛋白进行互作关系和拓扑分析,运用DAVID数据库对两中药复方得分高的模块进行富集分析,明确两中药复方治疗流感轻症的生物机制。结果纳入的3个西药的靶蛋白均为神经氨酸酶,KEGG通路均涉及糖降解过程。银翘散合桑菊饮加减方的靶蛋白中涉及流感基因436个、生物进程261个、KEGG通路125个;麻杏石甘汤加减方的靶蛋白中涉及流感基因464个、生物进程262个、KEGG通路115个。除共同涉及的大量流感基因与信号通路外,银翘散合桑菊饮加减方涉及基因SIRT1、CAT和Th17细胞分化、T细胞受体信号通路、神经营养素信号通路;麻杏石甘汤加减方涉及基因CDKN1B、LEP。结论与抗病毒西药相比,两个中药复方通过多靶标、多通路调节人体,其功能更集中于提高人体的免疫能力,促进宿主自身抗感染能力。

关键词：流行性感冒抗病毒麻杏石甘汤桑菊饮银翘散网络药理学生物信息学

代谢物组学整体效应探讨麻杏石甘汤对发热大鼠退热的量效关系研究

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中药药理与临床 2015年第3期31卷 1-4页

作者：廖群徐国良李冰涛李佳屈飞徐镜徐凤莲张启云江中药业股份有限公司南昌330096 江西中医药大学中医基础理论分化发展中心南昌330004

目的：采用代谢物组表征整体效应,考察不同剂量麻杏石甘汤对内毒素（LPS）致热模型大鼠退热作用的量效关系。方法：血浆预处理以后,超高效液相飞行时间质谱联用仪（UHPLC/Q-TOF）采集血浆样品数据,建立数据矩阵,使用主成分分析（PCA）... 详细信息

目的：采用代谢物组表征整体效应,考察不同剂量麻杏石甘汤对内毒素（LPS）致热模型大鼠退热作用的量效关系。方法：血浆预处理以后,超高效液相飞行时间质谱联用仪（UHPLC/Q-TOF）采集血浆样品数据,建立数据矩阵,使用主成分分析（PCA）等化学计量学的方法分析数据矩阵,提取能够反映病症与疗效相关的代谢物组,考察代谢物组随剂量的变化趋势,以代谢物组表征整体效应建立麻杏石甘汤整方的量效关系。结果：在主成分得分图中,剂量组随着剂量的增大,其样本点逐渐远离模型组向空白组回归;以剂量组主成分得分值拟合量效曲线,得到S型曲线;量效参数为：量效剂量范围[D]0.2~[D]0.8=3.22~4.54g/kg,中位剂量：[D]0.5=3.825 g/kg,阈剂量：[D]0.2=3.22g/kg。结论：代谢物组表征整体效应可以用以建立某些中药复方的量效关系。

关键词：麻杏石甘汤发热代谢物组,量效关系

基于网络药理学的麻杏石甘汤治疗支气管哮喘的作用机制分析

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药物评价研究 2020年第11期43卷 2168-2175页

作者：耿胜男谢鹏李阳杰杜钢军郑州工业应用技术学院河南郑州451150 河南大学药学院药物研究所河南开封475000

目的基于网络药理学方法探讨麻杏石甘汤的主要活性成分及治疗支气管哮喘的作用机制。方法在中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库中检索麻杏石甘汤的化学成分及靶点,采用Cytoscape 3.7.2软件构建活性成分-预测靶点网络图。在Genecards... 详细信息

目的基于网络药理学方法探讨麻杏石甘汤的主要活性成分及治疗支气管哮喘的作用机制。方法在中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库中检索麻杏石甘汤的化学成分及靶点,采用Cytoscape 3.7.2软件构建活性成分-预测靶点网络图。在Genecards数据库中获取支气管哮喘疾病靶点,与药物靶点映射获得麻杏石甘汤作用于支气管哮喘的预测靶点。通过STRING数据库构建靶点相互作用网络,导入Cytoscape 3.7.2中筛选麻杏石甘汤的核心靶点。利用DAVID数据库及Cytoscape3.7.2对麻杏石甘汤的核心靶点进行KEGG信号通路和GO生物过程富集分析,并构建麻杏石甘汤活性成分-核心靶点-信号通路网络图。结果预测结果显示,麻杏石甘汤中136个主成分可靶向98个哮喘相关靶点,关键有效成分包括麻黄碱、槲皮素、木犀草素、山柰酚等,核心靶点包括IL-6、MAPK3、TNF、TP53、VEGFA、JUN、EGFR、EGF、NOS3、CAT,涉及HIF-1、PI3K-Akt、MAPK、雌激素等71个信号通路和RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、细胞凋亡过程、ERK1和ERK2级联的正调控、上皮细胞增殖、平滑肌细胞增殖等20个生物过程。结论初步揭示了麻杏石甘汤的药效物质基础及治疗支气管哮喘的机制,为麻杏石甘汤治疗支气管哮喘的研究提供参考。

关键词：网络药理学麻杏石甘汤支气管哮喘有效成分作用机制

正交法研究麻杏石甘汤配伍不同中药治疗小儿咳久不愈

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中国中药杂志 1993年第6期18卷 370-371页

作者：张尊祥戴新民杨然解放军杭州疗养院 310007

多年来,我院用麻黄杏仁甘草石膏汤加鱼腥草在临床上治疗小儿咳嗽见效甚佳,但对咳久不愈的患者,疗效还不理想。为此,我们在麻杏石甘汤的基础上,伍用其它止咳化痰平喘药,对小儿咳久不愈的治疗进行探索。

关键词：正交法麻杏石甘汤咳嗽儿童

利用超分子组装理论探讨麻杏石甘汤抗病毒机制研究的新策略

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南京中医药大学学报 2021年第1期37卷 136-139页

作者：陈瑞陈志鹏南京中医药大学药学院江苏南京210023

汤剂中的超分子现象受到了越来越多的关注,成为中药学领域的研究热点。该文综述了近几年有关中药汤剂中的超分子现象的研究进展,并以麻杏石甘汤为例,提出从超分子角度探究麻杏石甘汤抗病毒活性的原因,为研究中药汤剂中超分子结构与药效... 详细信息

汤剂中的超分子现象受到了越来越多的关注,成为中药学领域的研究热点。该文综述了近几年有关中药汤剂中的超分子现象的研究进展,并以麻杏石甘汤为例,提出从超分子角度探究麻杏石甘汤抗病毒活性的原因,为研究中药汤剂中超分子结构与药效之间的关系提供新的思路。

关键词：超分子化学中药汤剂自组装麻杏石甘汤抗病毒

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HPLC测定麻杏石甘汤中麻黄碱的含量

中成药 2004年第9期26卷 i007-i008页

作者：毕云生潘函清赵普军胡冠时解放军济南军区总医院山东济南250031

麻杏石甘汤源于张仲景的《伤寒论》,由麻黄、杏仁、石膏、甘草4味药组成,具有解热,抗炎,抗病毒,镇咳,祛痰等药理效应,临床应用广泛.该方麻黄为君药,为了获得稳定可靠的临床疗效,必须用现代科学的方法测定麻黄碱的含量.方中的麻黄碱含量... 详细信息

麻杏石甘汤源于张仲景的《伤寒论》,由麻黄、杏仁、石膏、甘草4味药组成,具有解热,抗炎,抗病毒,镇咳,祛痰等药理效应,临床应用广泛.该方麻黄为君药,为了获得稳定可靠的临床疗效,必须用现代科学的方法测定麻黄碱的含量.方中的麻黄碱含量文献报道中多用薄层扫描法测定[1,2],尚未见用HPLC法测定麻杏石甘汤中麻黄碱含量的报道.因麻黄碱为碱性药物,处方其它药味又有干扰,HPLC测定法较困难.本文研究建立用HPLC法测定半仿生提取法制备[2]的麻杏石甘汤中麻黄碱含量方法,为控制麻杏石甘汤质量,特别是为HPLC法测定其中盐酸麻黄碱含量提供了操作简便、精密度好、准确可靠的一种方法.

关键词： HPLC 麻黄碱麻杏石甘汤