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鹅副粘病毒F和HN基因的克隆及原核表达载体的构建

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中国预防兽医学报 2005年第2期27卷 90-93页

作者：高宏丽王君伟于天飞管雪婷唐志芬东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

根据发表的鹅副粘病毒SF0 2株全基因组序列 ,分别设计合成一对引物和二对引物 ,分别采用RT_PCR方法和RT_套式PCR扩增出与预期设计大小相符的F基因和HN基因特异性条带。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18_T载体中 ,转化TGI感受态细胞 ,经AMP/... 详细信息

根据发表的鹅副粘病毒SF0 2株全基因组序列 ,分别设计合成一对引物和二对引物 ,分别采用RT_PCR方法和RT_套式PCR扩增出与预期设计大小相符的F基因和HN基因特异性条带。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18_T载体中 ,转化TGI感受态细胞 ,经AMP/IPTG/X_Gal平板筛选 ,酶切鉴定 ,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定 ,结果表明 :鹅副粘病毒JS/ 1/ 97/Go株F基因全长 16 6 2bp ,编码 5 5 3个氨基酸残基 ;F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112 R_R_Q_K_R_F117,与NDV的强毒株特征相符。HN基因全长 1716bp ,编码 5 71个氨基酸残基。将F基因插入到原核表达质粒pGEX_6P_1的EcoRⅠ、XhoI多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中 ,获得了表达F基因的阳性亚克隆重组质粒 ;将HN堪因插入原核表达质粒pProEXHTb的XBaⅠ、XhoⅠ多克隆位点之间 ,转化到TGI感受态细胞中。

关键词：鹅副粘病毒 RT-PCR F基因 HN基因

鹅副粘病毒不同来源分离株血凝特性及ELD_(50)的比较

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中国预防兽医学报 2001年第4期23卷 303-305页

作者：周继宏王永坤田慧芳宦海霞郭海龙扬州大学畜牧兽医学院扬州225009

鹅副粘病是一种新发现的由副粘病毒引起的能引起不同年龄鹅发病和不同程度致死的疾病。为了研究其病毒特性 ,我们用分离鉴定的 11株鹅副粘病毒 ,分别在SPF鸡胚传代至 2～ 11代后用鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的红细胞作血凝试验 ,测出各毒株... 详细信息

鹅副粘病是一种新发现的由副粘病毒引起的能引起不同年龄鹅发病和不同程度致死的疾病。为了研究其病毒特性 ,我们用分离鉴定的 11株鹅副粘病毒 ,分别在SPF鸡胚传代至 2～ 11代后用鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的红细胞作血凝试验 ,测出各毒株的凝集价 ,证明所分离的 11株病毒均不同程度地凝集上述 5种禽类的红血球。同时分别测定 10株病毒的ELD50 ,结果表明各毒株的ELD50 在 8～

关键词：鹅副粘病毒血凝价 ELD50 病原特性

鹅副粘病毒NA-1分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 18-21页

作者：王学理丁壮左玉柱向华常爽黄海楠宣华解放军军需大学兽医医院内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000

鹅副粘病毒分离株NA_1经 11日龄鸡胚增殖后纯化。提取病毒的基因组RNA ,采用RT_PCR扩增出与预期设计的 1 7kb大小相符合的特异条带。将扩增产物提纯后克隆入pMD 18_T载体 ,经纯化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳... 详细信息

鹅副粘病毒分离株NA_1经 11日龄鸡胚增殖后纯化。提取病毒的基因组RNA ,采用RT_PCR扩增出与预期设计的 1 7kb大小相符合的特异条带。将扩增产物提纯后克隆入pMD 18_T载体 ,经纯化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆 ,并对阳性克隆进行测序。测序后拼接得出HN基因的全序列长度为 174 0bp ,该基因的ORF总长为 1716bp ,编码 5 71个氨基酸。与GenBank下载的 15株参考毒株比较HN基因编码区全核苷酸序列 ,发现所测NA_1毒株与参考毒株YG97核苷酸序列同源性为 97 3% ,与F48E9同源性为 84 5 % ,与LaSota为 82 2 %。

关键词：鹅副粘病毒 NA-1分离株 HN蛋白基因克隆序列分析同源性

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鹅副粘病毒HN基因的克隆与序列分析

中国兽医科技 2002年第2期32卷 10-13页

作者：赵文华朱建波姚龙涛信爱国何水林张念祖云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 上海市奉贤县兽医站上海奉贤201400

以鹅副粘病毒GPVSF0 2毒株的基因组RNA为模板 ,通过RTPCR方法扩增出HN基因片段 ,然后将其克隆至T载体中。经PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序 ;测序后拼接得出HN基因的全序列。经分析HN基因编码区核苷酸序列 ,所测GPVSF0 2毒株与参考毒株N... 详细信息

以鹅副粘病毒GPVSF0 2毒株的基因组RNA为模板 ,通过RTPCR方法扩增出HN基因片段 ,然后将其克隆至T载体中。经PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序 ;测序后拼接得出HN基因的全序列。经分析HN基因编码区核苷酸序列 ,所测GPVSF0 2毒株与参考毒株NL 96核苷酸序列的同源性为 86 %。

关键词：鹅副粘病毒 HN基因克隆序列分析 RT-PCR 基因工程疫苗

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鹅副粘病毒F基因的克隆及遗传变异分析

中国兽医学报 2007年第2期27卷 176-179页

作者：董国英丁壮吉林大学畜牧兽医学院

以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体.经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序.测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1～374bp氨基酸序列.序列分析表明,LN-7-02株F蛋... 详细信息

以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体.经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序.测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1～374bp氨基酸序列.序列分析表明,LN-7-02株F蛋白裂解位点区的氨基酸组成为112R-R-Q-K-R-F117,与禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1)强毒株特征相符.将LN-7-02与AMPV-1株CH2000、F48E9和LaSota进行同源性比较,结果LN-7-02与CH2000、F48E9和LaSota的同源性分别为91.8%、86%和84%,表明该毒株相对于经典的AP-MV-1在F基因上已发生了较大变异.根据国内外70株APMV-1的F基因核苷酸序列绘制系统发育进化树,结果疫苗株Lasota属于基因Ⅱ型,经典株F48E9属于我国特有的基因Ⅸ型,而LN-7-02株与鹅副粘病毒JS-9-01、ZJ-100和GD-QY97同属于APMV-1基因Ⅶ型.

关键词：鹅副粘病毒 F基因克隆序列分析

鹅副粘病毒F基因的克隆测序及核苷酸序列分析

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中国兽医学报 2002年第6期22卷 544-546页

作者：赵文华朱建波姚龙涛宋建领信爱国何水林张念祖云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 上海市奉贤县兽医站上海奉贤201400

以鹅副粘病毒 (GPV) SF0 2株的基因组 RNA为模板 ,通过 RT- PCR的方法扩增出 F基因片段 ,然后将其克隆至 T载体中。经 PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序。测序后拼接得出 F基因的全序列。与 Gen Bank下载的 9株参考毒株比较 F基因编码区... 详细信息

以鹅副粘病毒 (GPV) SF0 2株的基因组 RNA为模板 ,通过 RT- PCR的方法扩增出 F基因片段 ,然后将其克隆至 T载体中。经 PCR鉴定后 ,对阳性克隆进行测序。测序后拼接得出 F基因的全序列。与 Gen Bank下载的 9株参考毒株比较 F基因编码区全核苷酸序列 ,发现所测 GPV- SF0 2毒株与参考毒株 L Z- NDV核苷酸序列同源性为 96 %,与F48E9同源性为 92 .5 %,与 L a Sota为 88%。

关键词：核苷酸序列分析鹅副粘病毒 F基因基因克隆

锤头状核酶在鸡胚成纤维细胞中的对鹅副粘病毒SF02繁殖的抑制作用(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第9期35卷 801-805页

作者：邹键龚祖埙中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学重点实验室上海200031

针对鹅副粘病毒SF0 2的F基因 ,设计了锤头状核酶RzF5 98,并插入真核细胞表达载体pcDNA3获得该核酶的转基因质粒pcDNA RzF5 98。以无核酶功能的突变体dRzF5 98和pcDNA3空质粒为对照 ,分析核酶对病毒繁殖的抑制作用。结果表明 ,RzF5 98不... 详细信息

针对鹅副粘病毒SF0 2的F基因 ,设计了锤头状核酶RzF5 98,并插入真核细胞表达载体pcDNA3获得该核酶的转基因质粒pcDNA RzF5 98。以无核酶功能的突变体dRzF5 98和pcDNA3空质粒为对照 ,分析核酶对病毒繁殖的抑制作用。结果表明 ,RzF5 98不仅能在体外成功切割靶基因的mRNA ,还能有效抑制SF0 2在鸡胚成纤维细胞中的繁殖。转染pcDNA RzF5 98的鸡胚成纤维细胞经SF0 2感染后存活率可达 80 %左右 ,而未转染任何质粒的细胞和转染pcDNA3空质粒的细胞经SF0 2感染后存活率只有约 5 %。转染dRzF5 98的细胞对病毒也具有一定抗性 ,这可能是由于反义RNA的作用。

关键词：锤头状核酶鹅副粘病毒新城疫病毒鸡胚成纤维细胞

鹅副粘病毒LS-1株的分离鉴定及F基因分析

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西南大学学报（自然科学版） 2011年第4期33卷 31-35页

作者：张伟刁有祥徐福亮李宏梅马艳芳孙宁山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 青岛康地恩药业有限公司山东青岛266111

从山东省梁山县疑似鹅副粘病毒感染的病死鹅中分离到1株LS-1病毒株,经血凝和血凝抑制试验,证实该毒株为禽1型副粘病毒.毒力测定结果表明,该病毒对鸡胚平均致死时间（MDT）为39.5 h;1日龄无特定病原体（SPF）鸡脑内接种分离病毒的致病指... 详细信息

从山东省梁山县疑似鹅副粘病毒感染的病死鹅中分离到1株LS-1病毒株,经血凝和血凝抑制试验,证实该毒株为禽1型副粘病毒.毒力测定结果表明,该病毒对鸡胚平均致死时间（MDT）为39.5 h;1日龄无特定病原体（SPF）鸡脑内接种分离病毒的致病指数（ICPI）为1.76;6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（IVPI）为2.42.序列测定结果表明LS-1株F基因核苷酸长度为1 653 bp,编码为551个氨基酸,有6个糖基化位点,其裂解位点的氨基酸序列为112-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe-117,与已公布的强毒株裂解位点的氨基酸序列相符.同源性分析表明,该毒株F基因与目前已公布的鹅副粘病毒F基因核苷酸同源性在87.0%~98.4%之间,推导的氨基酸序列同源性在87.0%~98.5%之间.

关键词：鹅副粘病毒 F基因 RT-PCR 序列分析

鹅副粘病毒NP基因的原核表达及表达产物抗原性检测

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中国兽医杂志 2005年第12期41卷 3-6页

作者：杨玉菊王君伟李曦杨志何海娟哈尔滨学院生化学院黑龙江哈尔滨150086 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp,共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至... 详细信息

根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp,共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至原核表达载体pGEX-6P的多克隆位点,经酶切鉴定后将含有NP基因的阳性亚克隆重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用诱导剂IPTG分别以不同的浓度进行诱导,并在不同的诱导时间进行采样,样品经处理后通过SDS-PAGE、Westernblot和Dot-ELISA进行分析。结果显示:以终浓度为1mmol/LIPTG进行诱导4h表达可达到高峰,表达的融合蛋白大小约为80kD,并具有良好的抗原性。

关键词：鹅副粘病毒 NP基因克隆原核表达抗原性检测