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鸭瘟病毒载体疫苗研究进展

中国动物检疫 2024年第7期41卷 61-68页

作者：封莹洁孟鸽房立春罗娟尚佳静于晓慧蒋文明刘华雷范春艳李阳河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250000 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室山东青岛266032

疫苗接种是控制疫病的有效方法一,其中病毒载体疫苗以其转染效率高、外源基因表达水平高等优点成为当前疫苗的重要研究方向。鸭瘟病毒基因非常适合作为插入和表达其他病原体的外源抗原基因,并且随着CRISPR/Cas9技术、细菌人工染色体技... 详细信息

疫苗接种是控制疫病的有效方法一,其中病毒载体疫苗以其转染效率高、外源基因表达水平高等优点成为当前疫苗的重要研究方向。鸭瘟病毒基因非常适合作为插入和表达其他病原体的外源抗原基因,并且随着CRISPR/Cas9技术、细菌人工染色体技术、同源重组技术等基因编辑技术的发展,鸭瘟病毒作为最有前途的载体被广泛应用于传染病疫苗研发。经试验验证,基于重组鸭瘟病毒载体的禽细菌病疫苗以及禽流感、鸭病毒性肝炎等多种病毒病疫苗均具有较好的免疫效果和安全性。本文综述了鸭瘟病毒作为疫苗载体的特点、鸭瘟病毒的基因编辑技术和鸭瘟病毒载体疫苗应用研究进展情况,以期为进一步研发鸭瘟病毒载体疫苗提供理论基础,同时也为新发传染病预防提供新策略。

关键词：鸭瘟病毒病毒载体疫苗基因编辑技术疫苗研发

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鸭瘟病毒gJ蛋白生物信息学分析

现代畜牧科技 2024年第2期 6-8页

作者：李方杰王宵李美荃董翠莲昆明学院农学与生命科学学院云南昆明650214

鸭瘟病毒是一种可引起鸭急性、热性、败血性传染病的病毒。gJ蛋白是鸭瘟病毒囊膜蛋白的一种,该文利用生物信息学方法对gJ蛋白进行分析,结果表明,该蛋白由539个氨基酸组成,具有较好的稳定性;有1个α-跨膜螺旋区,有1个信号肽位点;预测了g... 详细信息

鸭瘟病毒是一种可引起鸭急性、热性、败血性传染病的病毒。gJ蛋白是鸭瘟病毒囊膜蛋白的一种,该文利用生物信息学方法对gJ蛋白进行分析,结果表明,该蛋白由539个氨基酸组成,具有较好的稳定性;有1个α-跨膜螺旋区,有1个信号肽位点;预测了gJ蛋白的二级结构,分析其有52个磷酸化位点,7个糖基化位点,有18个B细胞抗原表位,14个较强的T细胞抗原表位。该研究为进一步研究gJ蛋白的结构特性和免疫功能提供理论依据。

关键词：鸭瘟病毒 gJ蛋白生物信息学

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鸭瘟病毒的分子生物学研究进展

贵州畜牧兽医 2024年第4期48卷 63-67页

作者：王艳吴鹏杨芸芸周碧君杨颖文明贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州大学动物疫病研究所贵州贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵州贵阳550025

文章介绍了鸭瘟病毒的基因功能、蛋白功能、致病机制、免疫机制方面的研究进展情况,并提出相关研究存在的不足和需要加强研究的方向,为更加深入了解该病毒,从而开发新的治疗方法和策略提供参考。

关键词：鸭瘟病毒基因组致病机制免疫机制

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鸭感染鸭瘟病毒的症状与防控

吉林畜牧兽医 2024年第8期45卷 55-57页

作者：王远雄邓佩文防城港市东兴市江平镇水产畜牧兽医站广西防城港538101 防城港市东兴市动物疫病预防控制中心广西防城港538100

本文主要以鸭感染鸭瘟病毒的症状与防治为重点进行阐述,首先对鸭瘟的流行特点和病理变化、临床症状进行分析,其次从加强鸭场管理、切断传播途径、鸭瘟弱毒活疫苗免疫接种、完善卫生防疫体系、隔离消毒、药物防治等方面深入说明做好预防... 详细信息

本文主要以鸭感染鸭瘟病毒的症状与防治为重点进行阐述,首先对鸭瘟的流行特点和病理变化、临床症状进行分析,其次从加强鸭场管理、切断传播途径、鸭瘟弱毒活疫苗免疫接种、完善卫生防疫体系、隔离消毒、药物防治等方面深入说明做好预防工作,全面降低鸭瘟病毒对病鸭产生的损害,一方面为防控鸭瘟病毒感染工作提供解决途径,另一方面也为相关研究提供参考资料。

关键词：鸭子鸭瘟病毒感染症状预防方法治疗措施

鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

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微生物学报 2008年第1期48卷 98-102页

作者：潘华奇曹瑞兵刘磊孙海亮姬向波陈勇军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培... 详细信息

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。

关键词：鸭瘟病毒 gB蛋白原核表达抗原域间接ELISA

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鸭瘟病毒gC基因的克隆及其分子特性分析

中国兽医科学 2008年第12期38卷 1038-1044页

作者：徐超李欣然信洪一练蓓程安春汪铭书朱德康贾仁勇罗启慧陈孝跃四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心四川雅安625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014

对已构建的鸭瘟病毒(DPV)DNA文库重组质粒测序后,运用ORF Finder、BLASTN等工具进行全面生物信息学分析,根据分析结果设计引物,以DPV DNA为模板进行PCR扩增和T克隆,获得完整基因,经测序和探针核酸斑点杂交进行验证。结果证实,获得的完整... 详细信息

对已构建的鸭瘟病毒(DPV)DNA文库重组质粒测序后,运用ORF Finder、BLASTN等工具进行全面生物信息学分析,根据分析结果设计引物,以DPV DNA为模板进行PCR扩增和T克隆,获得完整基因,经测序和探针核酸斑点杂交进行验证。结果证实,获得的完整ORF片段(ORF1296)为DPV的gC基因(GenBank登录号EU076811),全长1 296 bp,与已报道的其他疱疹病毒gC基因具有较高的同源性,它编码432个氨基酸,蛋白分子质量为45 ku、等电点(PI)为5.292,具有疱疹病毒典型I型膜蛋白结构特征。gC基因进化树分析表明,DPV与α-疱疹病毒亚科的鸟源疱疹病毒亲缘关系最近,编码的gC蛋白多为柔性区域,富含无规卷曲,含少量α-螺旋和β-折叠,氨基酸序列的第21～24、50～58、67～70、161～171、273～281、387～393位最有可能为抗原表位。此结果为进一步开展DPV gC基因及其编码蛋白的深入研究提供了有用数据。

关键词：鸭瘟病毒 gC基因克隆分子特性

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鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第7期40卷 51-58页

作者：张坤刁有祥程彦丽崔京腾王蛟刘鑫山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

【目的】探讨鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,... 详细信息

【目的】探讨鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法(IFA)对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血小板总数(PLT)和总蛋白(TP)、血红蛋白(HGB)含量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。

关键词：鸭瘟病毒致病性血常规和血生化淋巴细胞转化病理组织学间接免疫荧光染色 SPF鸭

鸭瘟病毒dUTPase基因的分子特性及转录时相分析

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高技术通讯 2008年第10期18卷 1088-1094页

作者：招丽婵袁桂萍程安春汪铭书贾仁勇周登春陈虹葛菡四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心雅安625014 广东温氏食品集团有限公司温氏研究院新兴527400 四川大学分析测试中心成都610064 动物疫病与人类健康四川省重点实验室雅安625014

应用大量生物信息学分析工具及 RNA 斑点杂交技术对本实验室构建鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)CHv 株基因文库时新发现的 dUTPase 基因(GenBank 登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析。研究表明:该基因大小为1344bp,编码447... 详细信息

应用大量生物信息学分析工具及 RNA 斑点杂交技术对本实验室构建鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)CHv 株基因文库时新发现的 dUTPase 基因(GenBank 登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析。研究表明:该基因大小为1344bp,编码447个氨基酸,包含 dUTPase 家族蛋白的5个保守 motifs,排列形式3-l-2-4-5具备Ⅱ型 dUTPase的典型特征。DPV CHv dUTPase 基因在25个疱疹病毒参考株之间高度保守,并与 a 疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高。DPV CHv dUTPase基因转录检测发现DPV 感染宿主细胞后最早30rain 可检测到该基因转录产物,随后转录产物量迅速放大,4h达高峰,24h 后下降至相对低的水平。该研究为阐明病毒基因表达调控机理提供了有用的实验数据,并对病毒其他基因的发现和研究具有指导性意义。

关键词：鸭瘟病毒 dUTPase 分子特性转录分析斑点杂交

鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立

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中国农业科学 2016年第14期49卷 2796-2804页

作者：赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川山东农业大学动物科技学院

【目的】鸭瘟(DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控... 详细信息

【目的】鸭瘟(DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒(DPV)胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的H6F6单抗作为标记抗体(标记的最适pH为8.0—8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释),将纯化的A8D7单抗(浓度为2倍原液稀释)和羊抗鼠IgG(浓度为10倍稀释)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1:10~3、1:10~3、1:10~5、1:10~3。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿囊液稀释50倍后用该试纸条检测依然为阳性;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异。利用制备的胶体金试纸条和PCR方法对38份临床样品进行检测比较,结果显示两者符合率为91.6%。【结论】本研究建立的试纸条检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,可用于DPV的快速检测。

关键词：鸭瘟病毒 gB蛋白原核表达单克隆抗体胶体金试纸条