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鸡痘病毒复制非必需区的选择对重组鸡痘病毒免疫效力的影响

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微生物学报 2005年第3期45卷 359-362页

作者：孙蕾刘武杰陈素娟石火英刘秀梵吴艳涛张体银扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区... 详细信息

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区的两个侧翼区FPV1和FPV2 ,利用此假定复制非必需区构建FPV表达载体pP12LS及表达ZJ1株新城疫病毒(NDV)F基因的转移载体pP12LSF。pP12LSF与2 82E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒rFPV_FSC。重组FPV在CEF上连续传2 0代仍具有良好的遗传稳定性。对重组FPV进行免疫效力试验,在SPF鸡上,重组病毒rFPV_FSC和与之仅有复制非必需区差异的rFPV_FSB均能抵抗NDV强毒的攻击,提供10 0 %的保护。但在有母源抗体的商品鸡上,rFPV_FSC与rFPV_FSB的免疫效力却有显著差异,保护率分别为10 0 %和6 1 5 4 % ,rFPV_FSC的免疫效力与NDV常规油苗相当。试验结果表明,母源抗体对重组FPV的免疫效力有一定的影响。

关键词：鸡痘病毒复制非必需区免疫效力

小鼠对HIV-2嵌合结构基因重组鸡痘病毒的免疫反应

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高技术通讯 2006年第7期16卷 730-734页

作者：李子健张立树金宁一江文正李昌北京大学第三医院血管医学研究所北京100083 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室长春130062 华东师范大学生命科学学院上海200026

将HIV-2嵌合结构基因gag-gp105插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒pA-gg;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法鉴定重组病毒;将获得的重组病毒大量制备并纯化后,肌肉注射免疫BALB/... 详细信息

将HIV-2嵌合结构基因gag-gp105插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒pA-gg;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法鉴定重组病毒;将获得的重组病毒大量制备并纯化后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清HIV-2抗体,流式细胞仪测定CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测脾特异性CTL杀伤活性.结果表明,成功筛选出一株可稳定表达HIV-2嵌合蛋白Gag-gp105的重组鸡痘病毒rFPV-gg;该重组病毒免疫组小鼠的血清出现HIV-2抗体,脾T细胞亚类数量增加,并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性.本研究提示,HIV-2 gag-gp105重组病毒能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答.

关键词：人免疫缺陷病毒Ⅱ型(HIV-2) 结构基因重组鸡痘病毒免疫反应

鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的分子生物学鉴定及致病机理研究

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中国农业科学 2009年第11期42卷 4077-4084页

作者：王刚孙洪磊于颖吴玉宝娄本红刘思当山东农业大学动物科技学院

【目的】验证FPV野毒株是否存在REV基因整合现象,初步研究整合毒株致病鸡群REV的抗体变化规律、FPV感染组织细胞的病变及发病鸡的病理组织学变化特征。【方法】自泰安及周边地区搜集的9例典型FP临床病例取其病变组织分离FPV,电镜观察FP... 详细信息

【目的】验证FPV野毒株是否存在REV基因整合现象,初步研究整合毒株致病鸡群REV的抗体变化规律、FPV感染组织细胞的病变及发病鸡的病理组织学变化特征。【方法】自泰安及周边地区搜集的9例典型FP临床病例取其病变组织分离FPV,电镜观察FPV形态特征、PCR扩增REV-env和LTR序列、ELISA检测FP发病鸡群血清REV抗体变化特征及病理组织学检查病鸡的病理学变化。【结果】9株FPV野毒株均有REV基因片段的整合,整合毒株使感染组织细胞的核由原来紧密球状变成较松散的螺旋状;FP患病鸡REV抗体阳性率显著升高;发病鸡除FP的一般病变外,同时显示脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官的淋巴组织严重萎缩,网状内皮细胞增生;肝脏、十二指肠、肺脏等器官内的淋巴组织亦表现相应的病理变化;用分离纯化整合REV基因的FPV毒株对SPF鸡试验性感染表明:整合REV基因的FPV毒株试验性感染SPF鸡患痘后期REV抗体水平的变化及组织器官的病理变化与野毒株FPV自然感染鸡所致病变相同。【结论】泰安及周边地区流行的FPV野毒株普遍存在REV基因的整合现象,整合有REV基因的FPV野毒株的致病性已发生改变,具有REV的某些致病特征。

关键词：鸡痘病毒网状内皮组织增生症病毒基因整合病理变化致病性

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鸡痘病毒在鸽体内的分布及毒性

中国生物制品学杂志 2010年第10期23卷 1058-1060,1064页

作者：金明兰鲁会军马鸣潇郑敏刘慧娟金宁一军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

目的检测鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)在鸽体内的分布及毒性。方法将鸡痘病毒经翅膀内侧无血管处刺种鸽子,50μl/只,对照组经相同部位刺种等量生理盐水。刺种后逐日进行临床观察,分别于刺种后6h、12h、1d、3d、7d、10d、15d和21d,剖杀鸽... 详细信息

目的检测鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)在鸽体内的分布及毒性。方法将鸡痘病毒经翅膀内侧无血管处刺种鸽子,50μl/只,对照组经相同部位刺种等量生理盐水。刺种后逐日进行临床观察,分别于刺种后6h、12h、1d、3d、7d、10d、15d和21d,剖杀鸽子,进行内脏器官的病理组织学检测,采用PCR法检测FPV在鸽体内的分布。结果在试验期间,幼鸽精神状态良好,采食、饮水正常,刺种后15d,临床症状基本消失;各组织未见明显的病理变化;刺种后6h,在刺种肌肉内检测到病毒DNA;刺种后3d和7d,在所有组织内均检测到病毒DNA;刺种后10d,在肌肉和脾脏内可检测到病毒DNA;刺种后15d,所有组织内均未检测到病毒DNA;对照组未检测到病毒DNA。结论鸡痘病毒在鸽体内存留时间短,无毒性,生物安全性良好。

关键词：鸡痘病毒鸽病毒分布毒性

鸡痘病毒弱毒疫苗株在鸡组织内的分布、消长规律及毒性试验

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中国兽医学报 2006年第5期26卷 471-474页

作者：郭建顺金宁一夏志平金扩世徐敬龙贾雷立范喜章吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 河北省秦皇岛正大有限公司河北秦皇岛066200

通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6 h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1 d... 详细信息

通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6 h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1 d,皮肤、肺、脑PCR检测阳性;7 d,在皮肤、肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;10、15 d,肝为阳性;21 d,脾、法氏囊PCR检测为阴性,肝为疑似;28 d,除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,但刺种部位皮肤一直到接种后35 d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组:基本规律与刺种组相同。接种后3 h,在肺部即可检测到病毒DNA;6 h,在肺和脑部PCR检测成阳性,法氏囊为疑似;1 d,在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;21 d,肺、肾、法氏囊、脑均为阳性,其中脑一直持续到接种后28 d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明,FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。

关键词：鸡痘病毒鸡分布毒性试验

鸡痘病毒NX10株TK基因在病毒复制中不是完全非必需的

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2914-2922页

作者：王曼曼赵妍张雪梅刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员。FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用。重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入... 详细信息

【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员。FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用。重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入位点的前提。因此,鉴定可供外源基因插入的复制非必需位点将为重组病毒的构建提供更多选择。本研究拟鉴定FPV NX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒复制中的必要性。【方法】以TK基因作为靶基因,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记构建转移载体,FPV NX10株为亲本病毒,通过同源重组筛选重组病毒r FPV-ΔTK-EGFP。通过在CEF细胞培养物中添加5-溴脱氧尿苷(BUd R)验证TK基因在FPV复制中的作用。【结果】构建了转移载体p UC19-TK AB-EGFP。在转染后重组病毒克隆纯化过程中,蚀斑克隆中绿色荧光病变所占的比例逐渐增加,但在荧光蚀斑的边缘能观察到不带荧光病变的存在。对第9-15轮随机选取的蚀斑克隆的Western blot分析表明,重组病毒中插入的EGFP基因均能够正确表达,但PCR结果显示在重组病毒中始终存在野生型病毒。在细胞培养液中添加BUd R后,重组病毒不能继续生长。【结论】FPV NX10毒株TK基因在该病毒的复制中不是完全非必需的。

关键词：鸡痘病毒 TK基因重组病毒复制非必需基因

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鸡痘病毒介导的呼吸道病毒疫苗的研制现状

中国病原生物学杂志 2019年第12期14卷 1471-1474页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

呼吸道病毒通常引起呼吸道的相关感染,研制疫苗防治该类疾病是当前研究的热点之一。鸡痘病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和粘膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达呼吸道病毒的多种蛋白。这些呼吸道病毒包括禽流感病毒、新城疫... 详细信息

呼吸道病毒通常引起呼吸道的相关感染,研制疫苗防治该类疾病是当前研究的热点之一。鸡痘病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和粘膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达呼吸道病毒的多种蛋白。这些呼吸道病毒包括禽流感病毒、新城疫病毒、火鸡鼻支气管肺病毒、出血性肠炎病毒和传染性支气管炎病毒等,本文综述以鸡痘病毒为传递载体的呼吸道病毒疫苗的研制现状。

关键词：呼吸道病毒鸡痘病毒疫苗综述

鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1197-1199页

作者：王彦红马怀良时红星吴培培彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠... 详细信息

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选。结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPVORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3B10、2G8G7。3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPVORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上。结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础。

关键词：鸡痘病毒 ORF214 单克隆抗体(mAb)

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鸡痘病毒PCR检测方法的建立

中国兽医学报 2004年第6期24卷 534-536页

作者：郭建顺金宁一夏志平金扩世徐敬龙贾雷立王凯军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp... 详细信息

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于

关键词：鸡痘病毒 PCR检测方法引物设计模板制备