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高速逆流色谱分离纯化枸杞多糖在神经炎症中的作用

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食品工业科技 2024年

作者：郝高峰曹妤赵宁刘建飞邸多隆甘肃中医药大学药学院中国科学院兰州化学物理研究所

目的：构建高速逆流色谱技术分离纯化枸杞多糖的新方法，并对分离得到的枸杞多糖进行结构表征，探究其对神经炎症的影响。方法：通过分配系数K值和固定相保留率Sf，筛选并优化双水相体系偶联高速逆流色谱分离纯化枸杞多糖的条件，利用... 详细信息

目的：构建高速逆流色谱技术分离纯化枸杞多糖的新方法，并对分离得到的枸杞多糖进行结构表征，探究其对神经炎症的影响。方法：通过分配系数K值和固定相保留率Sf，筛选并优化双水相体系偶联高速逆流色谱分离纯化枸杞多糖的条件，利用高效分子排阻色谱联用激光光散射仪和示差检测器串联检测法、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生结合高效液相色谱法、傅立叶变换红外光谱仪、热重分析仪、扫描电子显微镜对枸杞多糖进行初步结构表征，利用脂多糖诱导的小胶质细胞炎症模型研究枸杞多糖对神经炎症的作用。结果：确定最佳双水相体系为乙醇、饱和硫酸铵、水、异丙醇的质量比为1.4：1.0：2.58：0.3，高速逆流色谱最佳分离纯化条件为转速900 r/min，流动相流速0.8 mL/min。在上述条件下，分离得到3个枸杞多糖组分LBPs-1、LBPs-2和LBPs-3，多糖含量分别为78.35%±1.52%，69.03%±1.71%和62.11%±2.31%，分子量分别为7.40×104Da，2.73×104Da和1.47×104Da，单糖组成分别为甘露糖：鼠李糖：半乳糖醛酸：葡萄糖醛酸：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖，其中摩尔比分别为1.9：4.9：1.3：8.1：7.6：32.6：41.8、2.1：4.3：1.5：8.3：5.1：28.6：37.9和5.9：4.6：1.1：0.7：13.8：66.8：5.3，同时热稳定性和微观形貌也有显著差异。生物活性研究结果表明，不同分子量的枸杞多糖可通过抑制炎症因子分泌，缓解脂多糖诱导的小胶质细胞炎症。结论：本研究构建了双水相体系偶联高速逆流色谱分离纯化枸杞多糖的新方法，为植物多糖高效分离纯化提供了技术支撑，为枸杞多糖在抑制神经炎症相关疾病中的应用提供了科学依据。

关键词：高速逆流色谱双水相体系枸杞多糖分离纯化结构解析神经炎症

花生茎叶中黄酮类化合物的高速逆流色谱分离与助睡眠活性分析

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中国食品添加剂 2024年第3期35卷 51-57页

作者：赵还珠冯其翔崔莉邹业飞魏代磊张浩王岱杰齐鲁工业大学(山东省科学院)菏泽校区(分院) 菏泽274000 齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省分析测试中心济南250014 山东金胜生物科技有限公司临沂276600

开展花生茎叶中黄酮类化合物的高效分离与活性分析研究。采用高速逆流色谱技术进行分离纯化,并结合分子对接技术评价其助睡眠活性。筛选最佳溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(5∶5∶2∶8,5∶5∶3∶7,5∶5∶5∶5,v/v),通过梯度洗脱分... 详细信息

开展花生茎叶中黄酮类化合物的高效分离与活性分析研究。采用高速逆流色谱技术进行分离纯化,并结合分子对接技术评价其助睡眠活性。筛选最佳溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(5∶5∶2∶8,5∶5∶3∶7,5∶5∶5∶5,v/v),通过梯度洗脱分离得到两种化合物,经质谱和核磁结构鉴定为大豆苷元和芒柄花黄素。采用分子对接分析大豆苷元和芒柄花黄素对失眠相关的两种蛋白受体(GABRA1和FOS)均有较好的亲和力,相互作用力主要为氢键,两种化合物具有助睡眠的潜在活性。建立了花生茎叶中大豆苷元和芒柄花黄素的高速逆流色谱分离方法,采用分子对接证实两种化合物具有助睡眠的潜在活性,为花生茎叶中化学成分的分离及进一步开发助睡眠活性化合物提供了参考。

关键词：花生茎叶黄酮类化合物高速逆流色谱分子对接助睡眠活性

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高速逆流色谱法从小叶金钱草中分离四种黄酮苷类化合物

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食品工业科技 2022年第24期43卷 93-101页

作者：宋道光陈志青海师范大学地理科学学院青海西宁810008 青海师范大学青藏高原药用动植物资源重点实验室青海西宁810008

为研究小叶金钱草中大极性黄酮苷类化合物,采用正丁醇萃取、DM 301大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、反相硅胶柱层析纯化,得到大极性黄酮苷类组分。结合离线二维高速逆流色谱,分别以正己烷/正丁醇/水/冰乙酸(系统Ⅰ:1:2:1:0.1,v/v/v/v和系统Ⅱ... 详细信息

为研究小叶金钱草中大极性黄酮苷类化合物,采用正丁醇萃取、DM 301大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、反相硅胶柱层析纯化,得到大极性黄酮苷类组分。结合离线二维高速逆流色谱,分别以正己烷/正丁醇/水/冰乙酸(系统Ⅰ:1:2:1:0.1,v/v/v/v和系统Ⅱ:1:1:1:0.1,v/v/v/v)为溶剂系统,在主机转速900 r/min、流速2 mL/min、254 nm检测波长条件下进行分离。结果表明,从小叶金钱草正丁醇组分中分离得到四种黄酮苷类化合物,经^(1)H、^(13)C NMR鉴定为杨梅素3,3'-二-α-L-鼠李糖苷(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(2)、槲皮素3,3'-二-α-L-鼠李糖苷(3)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(4),高效液相色谱分析其纯度均大于95%。化合物3为首次从小叶金钱草中分离得到,本研究为小叶金钱草的化学成分研究提供依据。

关键词：小叶金钱草槲皮素鼠李糖苷黄酮苷高速逆流色谱梯度洗脱

高速逆流色谱结合半制备液相色谱制备甘青青兰中3种活性成分

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植物研究 2022年第2期42卷 252-258页

作者：周加本热增才旦热毛先利毛才让青海师范大学生命科学学院西宁810008 青海民族大学药学院西宁810007 青海师范大学民族师范学院西宁810008

采用高速逆流色谱(HSCCC)结合液相色谱法制备甘青青兰(Dracocephalum tanguticum Maxim.)中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,建立快速分离制备甘青青兰中活性成分的方法。采用半制备型高效液相色谱(SP-HPLC)富集甘青青兰乙酸乙酯萃... 详细信息

采用高速逆流色谱(HSCCC)结合液相色谱法制备甘青青兰(Dracocephalum tanguticum Maxim.)中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,建立快速分离制备甘青青兰中活性成分的方法。采用半制备型高效液相色谱(SP-HPLC)富集甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯、迷迭香酸,再用制备液相(Pre-HPLC)和HSCCC对富集物进行分离纯化,获得54 mg化合物Ⅰ、130 mg化合物Ⅱ和200 mg化合物Ⅲ,纯度分别为96.9%、97.9%和95.1%,经核磁共振碳谱(13CNMR)和氢谱(1HNMR)分别鉴定为绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸。本实验方法适用于甘青青兰乙酸乙酯萃取物中绿原酸、胡麻甙-6″-乙酯和迷迭香酸的分离制备,并避免了传统分离方法操作繁多、试剂消耗量大、不可回收等弊端,为分离甘青青兰活性成分、制备对照品等研究提供了参考依据。

关键词：高速逆流色谱半制备型液相色谱甘青青兰绿原酸胡麻甙-6″-乙酯迷迭香酸

高速逆流色谱法提取分离天然产物中生物碱的应用

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中国中药杂志 2023年第8期48卷 1989-1999页

作者：郭好好王晶陈圆辛秀兰刘玉峰辽宁大学药学院辽宁沈阳110036 北京电子科技职业学院生物工程学院北京100176

生物碱类化合物在植物中广泛存在,具有一系列药理活性,并已被广泛用于治疗各种疾病。由于生物碱通常存在于多组分混合物中且含量较低,较难通过传统方法进行提取分离。高速逆流色谱法是一种不存在固态支撑相的液-液色谱技术,具有进样量... 详细信息

生物碱类化合物在植物中广泛存在,具有一系列药理活性,并已被广泛用于治疗各种疾病。由于生物碱通常存在于多组分混合物中且含量较低,较难通过传统方法进行提取分离。高速逆流色谱法是一种不存在固态支撑相的液-液色谱技术,具有进样量大、成本低、不存在不可逆吸附等优势。相比于传统的生物碱提取分离方法,高速逆流色谱法可选的溶剂体系和洗脱模式可以保证一次性分离多种不同极性生物碱,可实现生物碱类化合物的高回收及大量制备。该研究通过借鉴相关文献,讨论了高速逆流色谱(HSCCC)相比于传统分离手段的优缺点,并对近年来采用高速逆流色谱法分离生物碱类化合物所用的溶剂系统和洗脱模式进行了总结,旨在为生物碱类化合物的高速逆流色谱分离提供一些参考。

关键词：高速逆流色谱生物碱提取分离溶剂系统洗脱模式

高速逆流色谱法制备罗汉果根中葫芦素类化合物

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色谱 2022年第4期40卷 364-371页

作者：孙嘉忆孙佳祺李和平颜小捷李典鹏卢凤来桂林理工大学化学与生物工程学院广西桂林541006 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西桂林541006

葫芦素作为四环三萜类化合物广泛存在于葫芦科植物中,但其含量较低、结构相似,采用常规的柱层析分离法较难得到大量、高纯度的单体化合物,导致其活性的研究与应用受到限制。研究采用高速逆流色谱法(HSCCC),建立了一种从罗汉果根提取物... 详细信息

葫芦素作为四环三萜类化合物广泛存在于葫芦科植物中,但其含量较低、结构相似,采用常规的柱层析分离法较难得到大量、高纯度的单体化合物,导致其活性的研究与应用受到限制。研究采用高速逆流色谱法(HSCCC),建立了一种从罗汉果根提取物中制备葫芦素类化合物的方法。罗汉果根乙醇提取物经HPD-100大孔树脂、MCI、RP-C18柱层析分离后获得葫芦素粗品。通过基于薄层色谱的溶剂选择法(GUESS)对液-液萃取与高速逆流色谱的溶剂体系进行快速筛选,确定采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶3∶7,v/v/v/v)萃取葫芦素粗品,有机层萃取物再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶6∶5∶5,v/v/v/v)进行HSCCC分离,以上相作为固定相,下相作为流动相,流速2.0 mL/min,主机转速860 r/min,进样量280 mg,一次分离即可获得5种葫芦素类化合物,经高效液相色谱检测其纯度分别为97.0%、95.4%、96.3%、91.6%和95.3%,并通过核磁共振技术、高分辨质谱技术及文献资料对比对各化合物的结构进行鉴定。经鉴定,5种化合物分别为葫芦素Q1、23,24-二氢葫芦素F-25-乙酸酯、葫芦素B、23,24-二氢葫芦素B和二氢异葫芦素B-25乙酸酯。该方法操作简单、快速,分离效果好,可作为规模化制备葫芦素类化合物的一种新方法。

关键词：高速逆流色谱高效液相色谱制备葫芦素罗汉果根

高速逆流色谱法分离制备博落回血根碱与白屈菜红碱

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食品工业科技 2022年第1期43卷 39-46页

作者：贾长青马瑞钱玺丞王丹丹郁建生铜仁职业技术学院药学院贵州铜仁554300 铜仁职业技术学院民族中兽药国家地方联合工程中心贵州铜仁554300 贵州梵净山农业高科技股份有限公司贵州铜仁554300

本文旨在建立一种使用常规高速逆流色谱技术分离制备高纯度博落回血根碱和白屈菜红碱的方法。通过分析型高速逆流色谱对六种溶剂体系进行快速筛选,确定以三氯甲烷-甲醇-0.2 mol/L盐酸水溶液(4:2:2,V/V/V)为两相溶剂体系并放大到制备型... 详细信息

本文旨在建立一种使用常规高速逆流色谱技术分离制备高纯度博落回血根碱和白屈菜红碱的方法。通过分析型高速逆流色谱对六种溶剂体系进行快速筛选,确定以三氯甲烷-甲醇-0.2 mol/L盐酸水溶液(4:2:2,V/V/V)为两相溶剂体系并放大到制备型高速逆流色谱上,以上相为固定相,下相为流动相,流速8 mL/min,转速为455 r/min,进样量1000 mg,温度为25℃条件下分离制备博落回血根碱和白屈菜红碱。实验结果表明:此方法一次性能够从1000 mg博落回生物碱粗品分离得到博落回血根碱盐酸盐505 mg和白屈菜红碱盐酸盐435 mg。经超高效液相色谱(UPLC)检测,按照外标法计算,两者纯度分别为99.77%、99.73%。采用标准品对照法、1H NMR和13C NMR对目标产物进行了结构鉴定。分离所得产物的结构数据与文献一致。该方法具有后处理简单、成本低廉、分离产物纯度高、实用性强等特点,适用于血根碱和白屈菜红碱的大量制备。

关键词：高速逆流色谱博落回血根碱白屈菜红碱制备

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活性引导结合高速逆流色谱分离蓝莓活性成分及其与α-葡萄糖苷酶的相互作用

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中国食品学报 2023年第1期23卷 41-53页

作者：杨兆艳田艳花王玲丽谭佳琪山西药科职业学院食品工程系太原030031 运城学院生命科学系山西运城044000 北京大学前沿交叉研究院北京100091

基于活性引导结合高速逆流色谱(HSCCC)技术,分离蓝莓中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的组分。首先,经不同溶剂提取后,活性成分在水中得到富集;其次,通过HSCCC分离水提物,得到6种组分,其中F4对α-葡萄糖苷酶的抑制率显著高于其它几种;再次... 详细信息

基于活性引导结合高速逆流色谱(HSCCC)技术,分离蓝莓中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的组分。首先,经不同溶剂提取后,活性成分在水中得到富集;其次,通过HSCCC分离水提物,得到6种组分,其中F4对α-葡萄糖苷酶的抑制率显著高于其它几种;再次将F4采用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶纯化,得到高纯的组分Ⅰ;最后通过紫外光谱、傅里叶红外光谱、高效液相色谱-质谱联用及核磁技术鉴定组分Ⅰ为矢车菊-3-O-葡萄糖苷(C3G),纯度为95.06%。此外,采用多光谱扫描和分子对接技术对C3G与α-葡萄糖苷酶的相互作用进行表征。研究发现C3G与α-葡萄糖苷酶通过氢键自发结合形成复合物。与C3G复合后,α-葡萄糖苷酶的二级结构发生不同程度的变化,其中α-螺旋和β-转角降低,β-折叠和不规则卷曲增加。分子对接模拟发现C3G与残基Leu 313、Ser 157、Tyr 158、Phe 314、Arg 315和Asp 307以氢键结合,并与周围4个疏水残基存在疏水作用,共同维持复合物结构。本研究结果对开发2型糖尿病功能性食品具有重要意义。

关键词：蓝莓活性引导高速逆流色谱矢车菊-3-O-葡萄糖苷 α-葡萄糖苷酶相互作用

高速逆流色谱分离黄连生物碱及其抑菌活性初探

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畜牧与兽医 2022年第6期54卷 132-138页

作者：朱茂银项勋邬佳莉任胜杰申宏利侯明鹏段纲黄翠琴常华云南农业大学云南昆明650201 龙岩学院/福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室福建龙岩360012

为了研究黄连生物碱的抑菌活性,采用高速逆流色谱(HSCCC)法分离黄连生物碱,K-B法检测其抑菌活性,测其对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:从黄连中分离出黄连碱、掌叶防己碱、小檗碱、表小檗碱,提取率分别为44.... 详细信息

为了研究黄连生物碱的抑菌活性,采用高速逆流色谱(HSCCC)法分离黄连生物碱,K-B法检测其抑菌活性,测其对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:从黄连中分离出黄连碱、掌叶防己碱、小檗碱、表小檗碱,提取率分别为44.41%、36.72%、68.54%、18.33%;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为10.00、29.50、21.00和12.50 mm;对无乳链球菌分别为11.40、27.50、14.00和15.50 mm;对粪肠球菌、大肠杆菌O157等均无效;黄连碱、表小檗碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为136.36、272.73μg/mL;小檗碱对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为62.18、136.36μg/mL,对无乳链球菌的MIC和MBC分别为136.36、272.73μg/mL;掌叶防己碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为62.18、136.36μg/mL。结果表明:用HSCCC制备生物碱,省时、方便,4种生物碱对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌作用明显,对其余试验菌无效。

关键词：黄连生物碱高速逆流色谱抑菌活性