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髓核内注射骨髓间质干细胞对椎间盘基质的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2007年第6期28卷 675-679页

作者：张银刚郭雄李天清王世捷李曙明许鹏任峰玲西安交通大学医学院第一附属医院骨科陕西西安710061 西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的研究髓核内注射骨髓间质干细胞对椎间盘基质的影响。方法32只新西兰大白兔,L2-3、L3-4、L4-5、L5-6被随机分为正常对照组、生理盐水对照组、细胞移植组Ⅰ、细胞移植组Ⅱ(BMP2转基因组)。髓核内注射后1、3、6月时间点,用Ⅰ、Ⅱ型胶... 详细信息

目的研究髓核内注射骨髓间质干细胞对椎间盘基质的影响。方法32只新西兰大白兔,L2-3、L3-4、L4-5、L5-6被随机分为正常对照组、生理盐水对照组、细胞移植组Ⅰ、细胞移植组Ⅱ(BMP2转基因组)。髓核内注射后1、3、6月时间点,用Ⅰ、Ⅱ型胶原单克隆抗体免疫组化染色分析胶原表型的改变,用实时荧光定量PCR分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达,采用重复测量方差分析进行统计学分析。结果术后1、3、6月时间点,细胞移植组髓核有较多的细胞,蛋白多糖染色显示细胞移植组髓核兰染增加,免疫组化显示Ⅰ型胶原实验各组未见明显差异,Ⅱ型胶原细胞移植组有较强的红染颗粒沉积。实时荧光定量RT-PCR分析显示,在细胞移植组,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的mRNA增加,而Ⅰ型胶原mRNA则无改变。与细胞移植组Ⅰ比较,细胞移植组Ⅱ蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA增加。结论骨髓间质干细胞移植能够提高髓核中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量,复合BMP2转基因有"分子增强效应",提示基于骨髓间质干细胞移植策略是治疗椎间盘退变潜在的有效方法。

关键词：骨髓间质干细胞椎间盘基因治疗

大鼠骨髓间质干细胞经三七总皂甙体外诱导分化为神经元样细胞:表型特征、凋亡蛋白的表达及存活

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第42期11卷 8465-8468页

作者：施雪英陈先文袁良津方毅周力军胡慧敏安徽医科大学附属安庆医院神经内科安徽省安庆市246003 安徽医科大学第一附属医院神经内科安徽省合肥市230022

目的:研究证实三七总皂甙能促进骨髓间质干细胞向神经细胞的横向分化,但分化细胞能否表达神经递质?存活时间是否延长?采用三七总皂甙对大鼠骨髓间质干细胞进行体外诱导,并检测分化的神经元样细胞表型特征、凋亡蛋白表达及存活情况。方法... 详细信息

目的:研究证实三七总皂甙能促进骨髓间质干细胞向神经细胞的横向分化,但分化细胞能否表达神经递质?存活时间是否延长?采用三七总皂甙对大鼠骨髓间质干细胞进行体外诱导,并检测分化的神经元样细胞表型特征、凋亡蛋白表达及存活情况。方法:实验于2006-01/2007-01在安徽医科大学实验中心完成。①实验方法:脱颈椎法快速处死大鼠,取股骨,剪断骨两端,IMDM冲洗骨髓腔,分离培养骨髓间质干细胞。取第5代细胞,用含体积分数为0.2胎牛血清、1mmol/L2巯基乙醇的完全培养液预诱导24h,然后更换含不同诱导剂的无血清培养液诱导分化,设立3组:三七总皂甙组的诱导剂含2.0g/L三七总皂甙,2巯基乙醇+丁羟茴醚组的诱导剂含200μmol/L丁羟茴醚+10mmol/L2巯基乙醇,空白对照组不添加任何诱导剂。②实验评估:观察诱导期间细胞形态变化及分化细胞的存活时间。免疫细胞化学检测分化的神经元样细胞表型特征及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达情况,并采用TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:①加入三七总皂甙诱导后约2h可见细胞胞质收缩,逐渐有突起形成。约5h后多数细胞呈明显的神经元样细胞形态,胞体呈圆形,突起较长,双极或多极形,在突起末端出现分支,部分相邻细胞的突起连接成网。②2巯基乙醇+丁羟茴醚诱导8h后即有部分细胞贴壁,但不牢靠,1d后约半数细胞死亡,3d后仅少数细胞存活。三七总皂甙诱导后细胞死亡现象缓慢发生,1周内少数神经元样细胞出现漂浮、崩解,三四周仍有部分细胞存活。③分化细胞能够表达神经干细胞标志巢蛋白、神经元标志神经元特异性烯醇化酶、神经递质标志乙酰胆碱酯酶及γ-氨基丁酸,不表达酪氨酸羟化酶及胶质纤维酸性蛋白。④诱导后12,24h与2巯基乙醇+丁羟茴醚组比较,三七总皂甙组分化细胞bcl-2蛋白阳性表达率明显升高(P细胞凋亡指数明显降低(P骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞,表达神经递质表型特征;与传统的诱导因子比较,可延长细胞存活时间,且具有抗细胞凋亡作用。

关键词：骨髓间质干细胞神经元分化三七总皂甙凋亡

Superfect高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

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中国病理生理杂志 2007年第1期23卷 12-17页

作者：孙吉平贾延劼王晓莉杨于嘉中南大学湘雅医院儿科湖南长沙410008 郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450000

目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载... 详细信息

目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体,对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定;利用Percoll细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞周期后,Superfect介导正确重组的载体转染骨髓MSCs,检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化;G418筛选阳性细胞后,RT-PCR和Western blotting检测PDX-1基因在骨髓MSCs中的表达。结果:重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示85.9%的MSCs处于G0/G1期,提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能;荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光,Superfect介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关;RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓MSCs表达,随转染时间延长,表达逐渐增强,与Western blotting结果一致。结论:成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;Superfect能高效介导外源性基因在骨髓MSCs中表达;转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。

关键词：骨髓间质干细胞基因胰腺十二指肠同源框1 糖尿病

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体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构

中山医科大学学报 2003年第1期24卷 11-15,I001页

作者：李善宗张成吴金浪肖庆忠陈国俊李树浓中山大学附属第一医院神经科广东广州510080 中山大学中山医学院电镜室广东广州510080 中山大学病理生理学教研室广东广州510080

[目的]研究体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构。[方法]采用常规技术对SD鼠骨髓间质干细胞进行体外培养传代、鉴定、诱导分化和透射电镜分析。[结果]流式细胞仪检测,细胞表达CD29和CD44,不表达CD11b和CD45;经5-氮杂胞苷和两性霉素B... 详细信息

[目的]研究体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构。[方法]采用常规技术对SD鼠骨髓间质干细胞进行体外培养传代、鉴定、诱导分化和透射电镜分析。[结果]流式细胞仪检测,细胞表达CD29和CD44,不表达CD11b和CD45;经5-氮杂胞苷和两性霉素B诱导分化后结蛋白和肌球蛋白染色阳性。透射电镜观察有巨噬样、内皮样和成纤维样三类基本细胞,巨噬样细胞表面有胞质突起,胞浆含电子密度高的结晶样包涵体;内皮样细胞靠胞膜边有吞饮小泡,胞浆中有电子密度高的内皮特殊小体;成纤维样细胞呈梭形,较幼稚,细胞器简单,有丰富的糖原和核糖体;经诱导分化的肌样细胞胞浆靠胞膜缘可见无细胞器的条状肌丝区带;细胞间存在胞膜局部紧密连接和胞质突起接合。[结论]传代贴壁生长的为骨髓间质干细胞;超微结构分析显示早期幼稚细胞发育的特征,但各有特点;在不同培养条件诱导下,细胞具备向肌肉和脂肪组织分化的潜能。本研究为进一步了解和掌握骨髓间质干细胞的生物学特性和临床应用打下基础。

关键词：体外培养骨髓间质干细胞超微结构流式细胞仪生物学动物实验

胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

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中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1324-1327,I001页

作者：项鹏夏文杰张丽蓉陈振光张秀明李艳李树浓中山医科大学病理生理学教研室广东广州510080 广东药学院病理生理学教研室广东广州510224 中山医科大学附属第一医院心胸外科广东广州510089

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX... 详细信息

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论

关键词：胞内cAMP浓度骨髓间质干细胞神经元样细胞腺苷环-磷酸福司柯林诱导分化

供者源性的骨髓间质干细胞对急性移植物抗宿主病的影响

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中国病理生理杂志 2003年第5期19卷 577-580,T001页

作者：李浩威温冠媚肖庆忠李红乐段连宁项鹏张秀明李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 广西医科大学病理生理学教研室广西南宁530021 广州医学院第一附属医院广东广州510120

目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar... 详细信息

目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar)。受者Wistar大鼠采用致死性全身照射预处理 ,当天移植F344大鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组则移植F344大鼠骨髓细胞、脾细胞和第 5代的MSCs。观察各组移植后急性GVHD的发生时间、发病率和存活时间。结果 :共移植MSCs推迟急性GVHD的发病时间 [( 19 1± 1 7)dvs( 15 6± 1 5 )d ,P <0 0 5 ],延长该组的存活时间 [( 35 6± 7 0 )dvs ( 2 5 4± 6 0 )d ,P <0 0 5 ],但无法完全消除急性GVHD的发生。结论 :MSCs在体内具有免疫抑制功能 ,供者来源的MSCs在不使用免疫抑制剂情况下。

关键词：急性移植物抗宿主病供者源性骨髓间质干细胞骨髓移植大鼠

钛颗粒负荷对切应力作用下骨髓间质干细胞F-actin表达和DNA含量的影响

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生物医学工程学杂志 2004年第1期21卷 1-7页

作者：吴江陈槐卿曹慧周江张立 K-LPaulSung 四川大学华西医学中心生物医学工程研究室成都610041 四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041 The Whitaker Institute of Bioengineering and Orthopaedics University of California

假体磨损碎屑颗粒是引起假体 -骨界面无菌性炎症和骨溶解而致全关节置换术失败的主要原因之一。磨屑颗粒所诱发的骨溶解须有周围骨组织中成骨细胞分泌足够的骨基质以弥补丢失的骨量 ,而成骨细胞正常的数量和质量有赖于其来源骨髓祖细胞 ... 详细信息

假体磨损碎屑颗粒是引起假体 -骨界面无菌性炎症和骨溶解而致全关节置换术失败的主要原因之一。磨屑颗粒所诱发的骨溶解须有周围骨组织中成骨细胞分泌足够的骨基质以弥补丢失的骨量 ,而成骨细胞正常的数量和质量有赖于其来源骨髓祖细胞 -骨髓间质干细胞的正常增殖分化能力的维持。为了探讨磨屑钛颗粒对大鼠骨髓间质干细胞 (Rat MSCs,r MSCs)产生细胞毒性的可能细胞分子机制 ,选用健康 3月龄 SD雄性大鼠 ,采用 Percoll等密度梯度离心法分离获取 r MSCs,经体外传代纯化培养后 ,与不同直径、不同负荷浓度、不同负荷作用时间的钛颗粒悬液共孵育 ,再采用精准的流室系统对钛颗粒负荷的 r MSCs施加一定的流体剪切应力 (Fluid shear stress,FSS)后立刻固定细胞 ,经免疫荧光抗体染色 ,结合激光共聚焦显微镜技术和图像分析软件定性定量分析 r MSCs F-actin表达和 DNA含量的变化情况。同时设置相应的未经钛颗粒孵育的 r MSCs细胞为对照组细胞。结果显示 ,切应力作用可上调 r MSCs胞内 F- actin的表达。亚微 (Subm icron)直径 (0 .9μm)的钛颗粒负荷对 r MSCs F- actin表达和 DNA含量的抑制作用最为显著 ,并伴有凋亡小体出现 ;直径为 2 .7μm的钛颗粒负荷产生的抑制作用略为减弱 ,而较大直径 (6 .9μm)的抑制效应最?

关键词：钛颗粒负荷切应力骨髓间质干细胞 F-actin表达 DNA含量成骨细胞

聚多巴胺仿生法制备羟基磷灰石涂层及对骨髓间质干细胞生物学特性的影响

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中国组织工程研究 2019年第1期23卷 47-54页

作者：徐炎安阳淇名李鸿蒋电明谯波重庆医科大学附属第一医院骨科重庆市400016 四川大学物理科学技术学院四川省成都市610015 重庆医科大学附属第三医院骨科重庆市401120

背景:聚多巴胺仿生法被证实可在多种不同金属表面制备羟基磷灰石涂层,但目前缺乏利用其在人工合成材料表面制备羟基磷灰石涂层的研究。目的:利用聚多巴胺仿生法在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,评价其对骨髓间质干细... 详细信息

背景:聚多巴胺仿生法被证实可在多种不同金属表面制备羟基磷灰石涂层,但目前缺乏利用其在人工合成材料表面制备羟基磷灰石涂层的研究。目的:利用聚多巴胺仿生法在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,评价其对骨髓间质干细胞生物学的影响。方法:采用聚多巴胺仿生法在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,获得羟基磷灰石-聚多巴胺-纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(hydroxyapatite-polydopamine-nano-hydroxyapatite/polyamide66,HA-PDA-HA/P66)材料,通过X射线光电子能谱分析和扫描电镜检测羟基磷灰石涂层,并检测材料的表面粗糙度及亲水性。将骨髓间质干细胞C3H10T1/2分别与纳米羟基磷灰石/聚酰胺66、聚多巴胺-纳米羟基磷灰石/聚酰胺66、HA-PDA-HA/P66材料共培养,培养6,12h后,采用CCK-8法检测细胞黏附情况;培养1d,通过扫描电镜观察细胞形态;培养1,3 d,DAPI染色检测细胞增殖;成骨诱导培养7,10 d,检测细胞碱性磷酸酶活性;成骨诱导培养14 d,茜素红染色检测细胞矿化能力。结果与结论:(1)X射线衍射和扫描电镜证实成功制备了羟基磷灰石涂层,且羟基磷灰石涂层明显提高了材料亲水性和表面粗糙度;(2)培养6,12 h,HA-PDA-HA/P66材料表面黏附的细胞数明显多于其余两种材料(P 细胞呈多边形,且有较多伪足;培养1,3 d,HA-PDA-HA/P66材料表面的细胞增殖能力高于其余两种材料(P 细胞内碱性磷酸酶活性高于其余两种材料(P <0.05);成骨诱导14 d,HA-PDA-HA/P66材料周围钙结节形成多于其余两种材料;(5)结果表明,利用聚多巴胺仿生法可在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,且涂层具有良好的生物活性与生物相容性。

关键词：纳米羟基磷灰石/聚酰胺66 骨髓间质干细胞生物相容性生物活性成骨分化干细胞羟基磷灰石类尼龙细胞生物学组织工程

PKH26标记的骨髓间质干细胞在阿尔茨海默病大鼠中的迁移

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浙江大学学报（医学版） 2012年第6期41卷 659-664页

作者：李文玉金日龙胡兴越浙江大学医学院邵逸夫医院神经内科浙江杭州310016 浙江大学医学院附属第一医院骨科浙江杭州310003

目的:研究荧光染料PKH26标记的骨髓间质干细胞(bone-marrow derived mesenchymalstem cells,BM-MSC)在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,以下简称AD)大鼠中的迁移。方法:抽取正常人骨髓,体外分离培养BM-MSC;以PKH26标记第5代BM-MSC,采用流式细胞仪检测BM-MSC表面标记物,并在荧光显微镜下观察PKH26标记率;将PKH26标记的BM-MSC尾静脉注射到正常对照组和AD动物模型组,14天后在大鼠海马区,用荧光显微镜观察PKH26标记的BM-MSC细胞。利用Morris水迷宫实验比较AD模型组和BM-MSC移植组空间学习记忆能力。结果:流式细胞仪检测BM-MSC表面标记物CD73和CD105呈阳性,在体外BM-MSC的PKH26标记率达100%。Morris水迷宫实验比较BM-MSC移植组和AD动物组,BM-MSC移植组在第13、14天时空间学习记忆能力比AD动物组有显著改善。在移植BM-MSC的大鼠海马区可发现PKH26标记的BM-MSC阳性细胞,与DAPI吻合。PKH26阳性细胞在AD动物模型组明显多于正常对照组。结论:BM-MSC不仅能通过AD大鼠的血脑屏障,而且存活在AD大鼠的海马区,并有能够改善AD模型大鼠的学习障碍。

关键词：骨髓间质干细胞骨髓细胞阿尔茨海默病 PKH26